第二章 菌種擴(kuò)大培養(yǎng)

第二章菌種擴(kuò)大培養(yǎng)第1頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三定義：菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)就是把保藏的菌種，即砂土管，冷凍干燥管中處于休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化，再經(jīng)過扁瓶或藥瓶和種子罐，逐級擴(kuò)大培養(yǎng)后達(dá)到一定的數(shù)量和質(zhì)量的純種培養(yǎng)過程。這些純種的培養(yǎng)物稱為種子。

第2頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三種子必須具備的條件①菌種細(xì)胞的生長活力強(qiáng)，接種后在發(fā)酵罐中能迅速生長②生理性狀穩(wěn)定③菌體總量和濃度能滿足大容量發(fā)酵罐的要求④無雜菌污染（不帶雜菌）⑤生產(chǎn)能力穩(wěn)定

第3頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三種子制備過程實驗室種子制備階段：瓊脂斜面至固體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)（如茄子瓶斜面培養(yǎng)等或液體搖瓶培養(yǎng)生產(chǎn)車間種子制備階段：種子罐擴(kuò)大培養(yǎng)

第4頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三第5頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三第6頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三第7頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三實驗室種子制備

在砂土管或冷凍干燥管內(nèi)保藏的菌種以無菌的方式接至適合的斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)成熟后挑選正常的菌落再接一次試管斜面并至搖瓶。

第8頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三生產(chǎn)車間種子制備

實驗室制備的孢子斜面或搖瓶種子移接到種子罐進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)種子罐培養(yǎng)一方面使菌種獲得足夠的數(shù)量，另一方面種子罐中的培養(yǎng)基更接近發(fā)酵罐培養(yǎng)的醪液成分和培養(yǎng)條件，譬如通無菌空氣，攪拌形式等等，以使菌體適應(yīng)發(fā)酵環(huán)境

第9頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三種子罐級數(shù)的確定

種子罐的級數(shù)是指制備種子需逐級擴(kuò)大培養(yǎng)的次數(shù)

對于生長快的細(xì)胞，種子用量的比例少，即需要的接種量少，所以相應(yīng)的種子罐也少

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接種種齡和接種量接種齡

種子罐中培養(yǎng)的菌體從開始移入下一級種子罐或發(fā)酵罐時的培養(yǎng)時間接種量

接種量指的是移入的種子懸浮液體積和接種后培養(yǎng)液體的體積的比例

種子質(zhì)量的判斷

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種子質(zhì)量的控制措施

菌種穩(wěn)定性的檢查

將保藏菌株溶于無菌的生理鹽水中，逐級稀釋，然后在培養(yǎng)皿瓊脂固體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，長出菌落，選擇形態(tài)優(yōu)良的菌落接入三角瓶進(jìn)行液體搖瓶培養(yǎng)，檢測出生產(chǎn)率高的菌種備用

雜菌檢查

顯微鏡觀察，或平板培養(yǎng)試驗，即將種子液涂在平