第十四章 免疫學(xué)實驗技術(shù)抗原抗體反應(yīng)

第十四章免疫學(xué)實驗技術(shù)抗原抗體反應(yīng)第1頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三第一節(jié)抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可發(fā)生特異性結(jié)合，呈現(xiàn)某種反應(yīng)現(xiàn)象因抗體主要來自血清，因此在體外進行的抗原抗體反應(yīng)稱為血清學(xué)反應(yīng)或免疫血清學(xué)技術(shù)由于抗體純化技術(shù)及單克隆抗體技術(shù)的發(fā)明與應(yīng)用，抗體不一定來自血清，因此，血清學(xué)反應(yīng)已不能完全代表抗原-抗體反應(yīng)。第2頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三第3頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三抗原-抗體反應(yīng)特點1、抗原與抗體的結(jié)合是特異性結(jié)合（特異性）傷寒桿菌的抗體只與傷寒桿菌結(jié)合，不與痢疾桿菌結(jié)合，反之亦然這種特異性結(jié)合是由抗原分子上的決定簇和抗體分子V區(qū)中的超變區(qū)相互適應(yīng)所決定的。但抗原成分復(fù)雜,常含有多種抗原決定簇,可以刺激機體分別產(chǎn)生相應(yīng)的抗體,即多克隆抗體.如果兩種不同的抗原物質(zhì)具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的決定簇，則與抗體血清反應(yīng)時可出現(xiàn)交叉反應(yīng)。如變形桿菌與立克次氏體之間有共同抗原決定族。（其他例子）第4頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三CLCLCH1VLVLVHVHCH2CH3C端N端恒定區(qū)可變區(qū)FC段Fab段鉸鏈區(qū)補體結(jié)合Fc受體結(jié)合抗原結(jié)合部位第5頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三第6頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三2、抗原抗體結(jié)合是分子表面的非共價鍵結(jié)合（可逆性）結(jié)合力的大小取決于兩分子間由氫鍵、疏水鍵、靜電引力和范德華力組成的引力與電子云產(chǎn)生的排斥力相互作用后的合力兩分子之間有較強的結(jié)合力,但在一定條件下,可發(fā)生解離,解離后的抗原和抗體性質(zhì)不變.抗原與抗體的結(jié)合是分子表面的結(jié)合，這一過程受物理化學(xué)的、熱力學(xué)的法則所制約，結(jié)合的溫度應(yīng)在0-40℃內(nèi)，pH在4-9范圍內(nèi)。如超過60℃或pH降到3以下時，則抗原抗體復(fù)合物又可重新離解。利用抗原抗體既能特異性結(jié)合，又能在一定條件下重新分離，可進行親和層析，以制備免疫純的抗原或抗體。第7頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三3、抗原-抗體反應(yīng)可分為兩個階段（反應(yīng)的階段性）第一階段為特異性結(jié)合階段，此階段需時短，無可見反應(yīng)出現(xiàn)第二階段為可見反應(yīng)階段，需時較長，出現(xiàn)可見現(xiàn)象，表現(xiàn)為沉淀、凝集和細胞溶解等。第8頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三4、抗原與抗體結(jié)合是否呈現(xiàn)明顯可見的反應(yīng)現(xiàn)象，與兩者的分子比例密切相關(guān)（最適比例性）只有在抗原與抗體呈適當比例時，結(jié)合反應(yīng)才出現(xiàn)凝集，沉淀等可見反應(yīng)結(jié)果，在最適比例時，反應(yīng)最明顯。因抗原過多或抗體過多而出現(xiàn)抑制可見反應(yīng)的現(xiàn)象，稱為帶現(xiàn)象。凝集反應(yīng)時，因抗原為大的顆粒性抗原，容易因抗體過多而出現(xiàn)前帶現(xiàn)象，因而需將抗體作遞度稀釋，而固定抗原濃度。沉淀反應(yīng)的抗原為小分子的可溶性抗原，通常稀釋抗原，以避免抗原過剩而出現(xiàn)后帶現(xiàn)象。第9頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三抗原抗體反應(yīng)主要影響因素1、電解質(zhì)在中性或堿性條件下，抗原抗體均帶負電荷，適當濃度的電解質(zhì)會使它們失去一部分負電荷而相互結(jié)合，出現(xiàn)明顯的沉淀或凝集現(xiàn)象。通常應(yīng)用0.85%的氯化鈉作為稀釋液，以供給適當濃度的電解質(zhì)。2、溫度一般常使反應(yīng)在37℃水浴中進行。3、酸堿度抗原-抗體反應(yīng)適宜的pH為6-8第10頁，共12頁，2023年，2月20日，星期三抗原-抗體反應(yīng)種類根據(jù)抗原的物理性狀及參加反應(yīng)的成分不同，分為：沉淀反應(yīng)可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合所發(fā)生的反應(yīng)凝集反應(yīng)顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合所發(fā)生的反應(yīng)補體結(jié)合反應(yīng)抗原抗體結(jié)合后激活補體所致的反應(yīng)中和反應(yīng)細菌外毒素或病毒與相應(yīng)抗體結(jié)合所致的中和反