DAC柱分離的使用副本

DAC柱分離的使用一、色譜知識簡介二、DAC簡介及相關配置介紹三、裝柱、拆柱培訓

四、常規(guī)制備操作培訓

五、注意事項與日常維護色譜法是利用不同性質的物質在不相混溶的兩相中分配系數(shù)，吸附解吸附或其它性能不同而被分離。TLCLCHPLCGC薄層色譜開管色譜高效液相色譜氣相色譜Chromatography高效液相色譜分析定性定量

確定樣品中化合物制備提取分離純化混合物中有價值的化合物

而不是傳統(tǒng)意義上的分析儀器常見的分離方式：蒸餾、離心、電泳、過濾、超濾重結晶等等色譜是其中一種分離工具高效液相色譜分析制備超高效液相（UPLC）動態(tài)軸向壓縮（DAC)模擬移動床（SMB）什么是高壓制備色譜？高壓制備色譜與經典色譜并沒有本質的區(qū)別，不同點是高壓制備色譜與傳統(tǒng)經典的色譜相比，有較高的效率，并且實現(xiàn)了自動化操作；在儀器方面，它采用了高壓輸液泵送流動相，同時在色譜柱后加有檢測器，對色譜柱流出物進行連續(xù)檢測。目前高壓制備色譜總的來講有如下幾個特點：1.柱長較短2.內徑大3.流速高高壓制備色譜，有時又稱為高效制備色譜（Highperformancepreparativeliquidchromatography)主要進口品牌：Gilson，USAVarian，USAWaters，USAShimadzu，Japan分析制備放大優(yōu)化分析方法的選擇性在分析柱上進行超量載樣放大到制備柱制備相關技術1）制備的目的是在一次操作中盡可能地多上樣，所以，首先得在分析柱上實現(xiàn)超載，否則，分析柱分離得再漂亮，再在制備柱中線性放大時就因為成本不合理而被無情地否決。2）制備的目的是分離你所關心的組分，只要它能與其它雜質分離的好就行了，所以不要希望在分析柱上先得到所有組分的基線分離，完全沒有必要！設計梯度時只需對目的物前后5-10%梯度的范圍進行精細分離。3）制備中常常因為超載而無法使目的物與鄰近雜質間達到基線分離，可以采用分段收集的方法得到指定純度的目的物，要求越純，單次操作的得率也越低。4）制備中因為目的物來之不易，常常需要將純度不合格得目的物重新上柱循環(huán)，一般只需稀釋1-2倍就可以了。由于重新上柱是會增加成本的，所以超載的量要平衡單次操作的純品得量和效益與返工成本，以單位純品數(shù)量進行成本核算，以優(yōu)化最佳上樣量。一、色譜知識簡介二、DAC簡介及相關配置介紹三、裝柱、拆柱培訓

四、常規(guī)制備操作培訓

五、注意事項與日常維護DAC色譜柱簡介動態(tài)軸向壓縮柱（dynamicaxialcompression，簡稱DAC）采用活塞裝柱（勻漿填充），在使用過程中始終保持填料處于壓縮狀態(tài)以確保其穩(wěn)定性。動態(tài)軸向壓縮柱在使用過程中活塞始終產生一定的壓力壓縮填料，消除產生的死體積。其原理是通過活塞的上下運動來裝柱、維持柱壓和卸柱，活塞周邊安裝了特殊設計的密封圈能容許活塞在色譜柱內壁上下自由滑動，同時又能保持高的密封性?；钊\動和壓力維持依靠由氣壓控制的液壓，并通過設計使液壓可以長期穩(wěn)定在需要的壓力數(shù)值?；钊c頂端法蘭均配有多孔不銹鋼篩板及能使樣品及流動相在柱截面上均勻分布的分配器。液流分配器保證了大量樣品盡可能地瞬時分散在柱截面上，進而快速均勻進入柱床，避免了柱中心樣品局部過濃的現(xiàn)象，保證了色譜柱的分離效果。填料顆粒的性質、勻漿溶劑的性質、軸向壓縮力的強度等，對DAC制備柱的填充密度及柱效均有影響。配置介紹：本系統(tǒng)由P6000高壓輸液泵、DAC100、KNAUERDetector2550、KNAUERValvedriveV2.1S、Clarity色譜工作站等組成。泵殼體泵頭壓力傳感器建立新文檔打開現(xiàn)有文檔顯示報告打印欄打印報告設置項目目錄設置用戶選項輸出數(shù)據設置后運行單次分析序列分析（配備自動進樣器）色譜圖窗口積分計算當前運行的方法信息采集數(shù)據“儀器監(jiān)視窗口、采集、測量及控制”方法菜單校準窗口創(chuàng)建報告輸入用戶名后點擊“確定”即可打開工作站方法模板界面，一、色譜知識簡介二、DAC簡介及相關配置介紹三、裝柱、拆柱培訓

四、常規(guī)制備操作培訓

五、注意事項與日常維護色譜柱裝柱過程1．100DAC柱的勻漿制作a)先倒勻漿瓶內加入干填料（1200g）b)再逐步加入2000mL異丙醇于勻漿瓶內c)邊加邊攪拌d)再將剩下的400mL異丙醇加入瓶內，帶清洗瓶壁，充分攪拌均勻。2勻漿溶液的轉移和色譜柱柱管內壁的清洗a)將攪拌均勻的勻漿液超聲脫氣后，轉移至色譜柱柱管內，將勻漿液全部裝入柱內.b)用裝有異丙醇的洗瓶，淋洗色譜柱柱管內側，使柱管內側無填料附著。3運行設備，活塞下移，排氣泡。a)將活塞頭和螺紋桿放置于柱管上端，操作控制臺使活塞向下移動b)當活塞頭上端液路管有液體流出時，觀察是否有氣泡排出，等氣泡完全排空后，用堵頭將其堵上.

4運行設備，活塞下移，開始裝柱。a)打開色譜柱柱管下端連接管路的堵頭b)將柱頭壓力設為70Bar.c)勻漿液通過色譜柱柱管下端連接管路，流入廢液桶。

5靜置15Min后，將色譜柱與檢測設備連接。6色譜柱性能驗證色譜柱的平衡a)用純甲醇做流動相,流量10ml/Min,運行30Min.b)用純甲醇做流動相,流量20ml/Min,運行30Min.c）用純甲醇做流動相,流量50ml/Min,運行30Min.d)用純甲醇做流動相,流量100ml/Min,運行30Min.e)用純甲醇做流動相,流量200ml/Min,運行30Minf）監(jiān)測基線，如果滿量程100mv時，基線水平，說明系統(tǒng)已平

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五、注意事項與日常維護準備

開機

檢查

平衡系統(tǒng)排氣泡創(chuàng)建方法沖洗關機制備

進樣1.1

準備所需的流動相，用合適的0.45μm濾膜過濾，超聲脫氣15-30min。

1.2根據待檢樣品的需要更換合適的DAC色譜柱（正、反相，注意方向）。

1.3配制樣品和標準溶液，用合適的0.45μm或0.22μm濾膜過濾。1.4檢查色譜柱氣壓、油壓是否正常。開啟順序：高壓輸液泵→混合器→檢測器→接收器→電腦主機。打開計算機后雙擊桌面的Clarity(中文版)圖標進入色譜工作站。在Clarity工作站的設備監(jiān)控器檢查儀器是否連接成功（進入工作站時，檢測器會有一聲“嘀”，表示檢測器鏈接成功）。根據自己實驗要求，在工作站方法選項卡中建立合適制備方法并保存。（一般以A、B泵走二元梯度，流速不大于500Ml；檢測器為四波長，設置需要的檢測波長）。一、色譜知識簡介二、DAC簡介及相關配置介紹三、裝柱、拆柱培訓

四、常規(guī)制備操作培訓

五、注意事項與日常維護1

流動相及樣品溶液必須用0.45um濾膜過濾，流動相還要進行脫氣處理。如使用未過膜的化試級溶劑，每天都需更換柱前過濾膜并清洗篩板。

2

試驗結束后關閉工作站，方可關閉泵的電源。

3

每次初始開機時，應逐漸增大流速至所需值，異丙醇過渡時使用低流