大腸菌群數(shù)測定

微生物檢測-大腸菌群測定大腸菌群數(shù)？大腸菌群指一群在37℃、24小時能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需氧或兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。主要包括埃希氏菌屬、檸檬酸桿菌屬、腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬等菌屬的細菌。菌落總數(shù)簡介

實驗原理

37℃，24h，乳糖，產(chǎn)酸（溴甲酚紫），產(chǎn)氣（小倒管）三步法：初發(fā)酵、分離培養(yǎng)、復(fù)發(fā)酵器材與試劑水樣、無菌蒸餾水、乳糖蛋白胨培養(yǎng)基，伊紅美藍培養(yǎng)基，革蘭染液吸管、試管、平皿、載玻片初發(fā)酵水樣、無菌水、三倍乳糖蛋白胨，吸管、酒精燈、吸球器材與試劑大腸菌群數(shù)測定實驗步驟：

1.初發(fā)酵（1）2個大試管（內(nèi)有倒管），100ml水樣+已滅菌的3倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液（50ml）（2）10支試管（內(nèi)有倒管），10ml水樣+已滅菌的3倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液（5ml）（3）培養(yǎng)：37℃，24h

（4）觀察指標：產(chǎn)酸（黃色），產(chǎn)氣（倒管內(nèi)有氣泡）吸取水樣加注水樣初發(fā)酵結(jié)果左2為陽性結(jié)果，培養(yǎng)基變成黃色（產(chǎn)酸），小倒管內(nèi)有氣體產(chǎn)生。大腸菌群數(shù)測定實驗步驟

2.分離培養(yǎng)（1）制備伊紅美藍平板：

45℃，無菌，傾注，15ml

（2）選產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管（3）接種至伊紅美藍平板分區(qū)劃線法（4）培養(yǎng)：37℃，24h分離培養(yǎng)器材與試劑初發(fā)酵結(jié)果、酒精燈、接種環(huán)、伊紅美蘭平板培養(yǎng)基分區(qū)劃線法第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)分區(qū)劃線法操作要點

1.劃下一個區(qū)前必須滅菌接種環(huán)

2.劃線時接種環(huán)同平板呈30-40°角

3.每次劃線應(yīng)該壓到上一個區(qū)域的2-3條線

4.用接種環(huán)的“面”而不是“弧”在平板上滑動大腸菌群數(shù)測定實驗步驟

2.分離培養(yǎng)：

（5）菌落特征：深紫黑色、有金屬光澤紫黑色、無或略有金屬光澤淡紫紅色、中心顏色深（6）革蘭染色、鏡檢：選特征菌落革蘭染色法器材與試劑結(jié)晶紫、盧戈碘液、95%乙醇、酸性復(fù)紅、生理鹽水、酒精燈、載玻片、濾紙革蘭染色法涂片：接種環(huán)，挑取菌落，生理鹽水一滴，涂勻熱固定：通過火焰若干次初染：結(jié)晶紫一滴，1min，水洗媒染：盧戈碘液一滴，1min，水洗脫色：95%乙醇，30s或至無色為止復(fù)染：復(fù)紅一滴，30s涂片熱固定初染媒染脫色復(fù)染革蘭氏染色陰性革蘭氏染色陽性革蘭染色法復(fù)發(fā)酵器材與試劑培養(yǎng)24小時后的伊紅美蘭平板、酒精燈、接種環(huán)、復(fù)發(fā)酵管大腸菌群數(shù)測定實驗步驟

3.復(fù)發(fā)酵（1）選取鑒定為無芽孢G-桿菌的菌落1-3個（2）接種至