藥物敏感試驗(yàn)

抗菌藥物敏感試驗(yàn)

細(xì)菌室李巍2021/10/101抗菌藥物敏感試驗(yàn)定義、目的、方法培養(yǎng)基、接種菌量、培養(yǎng)條件結(jié)果閱讀判斷標(biāo)準(zhǔn)2021/10/102

什么是抗菌藥物的敏感性試驗(yàn)測(cè)定抗菌藥物在體外抑制病原微生物生長(zhǎng)的效力，稱為抗菌藥物對(duì)細(xì)菌的抑制試驗(yàn)，或稱為細(xì)菌對(duì)藥物的敏感性試驗(yàn)。2021/10/103為什么要做藥敏試驗(yàn)？供醫(yī)師選用抗菌藥物時(shí)的參考細(xì)菌耐藥性檢測(cè)和耐藥性變遷評(píng)價(jià)新抗菌藥物的藥效學(xué)特征對(duì)細(xì)菌耐藥譜分析和分型有助于某些菌種的鑒定作為醫(yī)院內(nèi)感染流行病學(xué)調(diào)查的手段之一2021/10/104如何進(jìn)行藥敏試驗(yàn)方法學(xué)

1.稀釋法--試管稀釋法--平板稀釋法

2.擴(kuò)散法（紙片法）

3.E-TEST4.自動(dòng)化儀器2021/10/105

2021/10/106

2021/10/107幾個(gè)重要的指標(biāo)MIC（最低抑菌濃度）在體外能夠抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度

MBC(最低殺菌濃度)

在體外能夠使細(xì)菌的總數(shù)減少或殺滅99.9%以上的最低藥物濃度臨界濃度根據(jù)MIC，結(jié)合常用劑量時(shí)該藥所能達(dá)到的血藥濃度，劃定細(xì)菌對(duì)各種抗菌藥物敏感或耐藥的界限2021/10/108

2021/10/109如何制備菌懸液？如何取菌落？為什么至少取3個(gè)菌落？可能丟失耐藥細(xì)菌（攜帶有耐藥質(zhì)粒的耐藥菌株）2021/10/1010擴(kuò)散法：K-B操作：-制備0.5麥?zhǔn)隙染?無(wú)菌棉簽蘸取菌液，在管壁將多余菌液旋轉(zhuǎn)擠去，在瓊脂表面均勻涂布3次，最后沿著平板內(nèi)緣涂抹一周-室溫或35度干燥5—10分鐘-將紙片緊貼于表面-紙片間距20厘米，離平板內(nèi)緣15厘米2021/10/1011如何閱讀結(jié)果（紙片法）工具：游標(biāo)卡尺、尺子光源：反射光、透射光閱讀：背襯不反光的黑色背景用肉眼觀察，也可用BIOMIC機(jī)器閱讀2021/10/1012紙片法結(jié)果的正確閱讀反射光不反光的黑色背景完全抑制的抑菌圈直徑，包括紙片的直徑抑菌圈的界限應(yīng)該是以肉眼觀察沒(méi)有明顯的可見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)區(qū)域在抑菌圈邊緣微弱生長(zhǎng)的、僅能在放大鏡下才能觀察到的細(xì)小菌落應(yīng)忽略2021/10/1013

2021/10/1014應(yīng)注意葡萄球菌、腸球菌的閱讀苯唑西林、利奈唑胺和萬(wàn)古對(duì)葡萄球菌的抑制圈萬(wàn)古霉素對(duì)腸球菌的抑制圈任何有可見(jiàn)的菌落生長(zhǎng)均視作對(duì)上述抗菌藥物耐藥需在透視光下閱讀，遇不敏感的結(jié)果需用稀釋法測(cè)MIC確證2021/10/1015應(yīng)注意磺胺類藥物的結(jié)果閱讀培養(yǎng)基可能含有拮抗物如胸腺嘧啶、核苷類物質(zhì)，允許有輕微生長(zhǎng)的薄菌苔忽略20%或更低生長(zhǎng)的薄菌苔，測(cè)量抑菌圈直徑較為明顯的細(xì)菌生長(zhǎng)界限下列細(xì)菌均注意：腸桿科、不動(dòng)、伯克、葡萄、嗜血、肺鏈、弧菌屬、腦膜炎奈瑟菌2021/10/1016應(yīng)注意變形桿菌屬的閱讀生長(zhǎng)呈遷移性在一些抗菌藥物抑菌環(huán)可見(jiàn)霧霾樣遷徙生長(zhǎng)的菌苔霧霾樣生長(zhǎng)忽略不計(jì)忽略遷移性2021/10/1017應(yīng)注意溶血性細(xì)菌的結(jié)果閱讀鏈球菌--β-溶血鏈球菌--草綠色鏈球菌--肺鏈應(yīng)忽略溶血區(qū)，讀取生長(zhǎng)完全被抑制處2021/10/1018注意產(chǎn)色素細(xì)菌的結(jié)果閱讀有些細(xì)菌在生長(zhǎng)的過(guò)程中產(chǎn)生色素

--銅綠

--黃桿菌

--沙雷菌應(yīng)忽略色素分泌圈，讀取生長(zhǎng)完全被抑制處2021/10/1019

2021/10/1020

解讀注意事項(xiàng)1、藥敏試驗(yàn)是參照美國(guó)的CLSI推薦的標(biāo)準(zhǔn)制定的。2、細(xì)菌全自動(dòng)分析儀的藥敏組合是固定的。3、某些細(xì)菌對(duì)某類抗生素天然耐藥，則不需要做藥敏試驗(yàn)。4、試驗(yàn)的藥物代表一類藥，而不是一種藥。2021/10/1021

解讀注意事項(xiàng)5、對(duì)葡萄球菌一代比三代頭孢治療效果好。6、有些藥物不適用于單獨(dú)使用，僅用于聯(lián)合用藥，如利福平。7、因?yàn)槭求w外藥敏試驗(yàn)，有些藥體外試驗(yàn)敏感，可能臨床治療無(wú)效。8、同一菌株可能出現(xiàn)亞種，導(dǎo)致連續(xù)藥敏結(jié)果不吻合。2021/10/1022

細(xì)菌耐藥概念多重耐藥（MDR）:指細(xì)菌同時(shí)對(duì)三種以上結(jié)構(gòu)不同（作用機(jī)制不同）抗菌藥物耐藥，如頭孢菌素、喹諾酮類、氨基糖苷類；泛耐藥（PDR）:細(xì)菌對(duì)本身敏感的所有藥物耐藥；超級(jí)細(xì)菌:并非科學(xué)概念，一般指PDR與部分MDR，沒(méi)有確切定義，以下細(xì)菌屬于此列：MRSA/VRSA;VRE;MDR-PA,PDR-AB;ESBL(+)+AmpC(+)腸桿菌產(chǎn)碳青霉烯酶腸桿菌（產(chǎn)KPC酶、包括產(chǎn)NDM-1細(xì)菌）2021/10/1023MRSA：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌VRSA：耐萬(wàn)古霉素金黃色葡萄球菌VRE：耐萬(wàn)古霉素腸球菌ESBLs：超廣譜β-內(nèi)酰胺酶KPC酶：產(chǎn)碳青霉稀酶的一種KPC型NDM-1：Ⅰ型新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶

下面就以上幾種情況分別解讀2021/10/1024

與臨床溝通中常見(jiàn)問(wèn)題

1、我們想用的藥物在藥敏試驗(yàn)中沒(méi)有做？可能是天然耐藥可能是藥物的敏感性被其他藥物所預(yù)報(bào)2021/10/1025

與臨床溝通中常見(jiàn)問(wèn)題

2.為什么有的菌報(bào)告很多種藥物，有的僅報(bào)告幾種藥物？報(bào)告的藥物種類根據(jù)細(xì)菌種類的不同而有所不同，如銅綠假單胞菌報(bào)告的藥物較多，而嗜麥芽窄食單胞菌報(bào)告的藥敏較少2021/10/1026CLSI藥敏建議2021/10/1027

與臨床溝通中常見(jiàn)問(wèn)題

3、是否能將所用的藥都做藥敏試驗(yàn)?沒(méi)有必要：通過(guò)耐藥機(jī)制和標(biāo)志性藥物可以預(yù)測(cè)其他抗菌藥物的敏感性沒(méi)有可能：不是所用藥物都可以做藥敏試驗(yàn)（需要藥物在體外穩(wěn)定，需要有操作標(biāo)準(zhǔn)和解釋標(biāo)準(zhǔn)）2021/10/1028

與臨床溝通中常見(jiàn)問(wèn)題

4、在藥敏試驗(yàn)報(bào)告中MIC越小的抗菌藥物效果越好嗎？如何根據(jù)MIC聯(lián)合用藥？感染菌對(duì)同一種藥物的MIC越小，效果越好不同種抗菌藥物之間MIC無(wú)可比性目前很多儀器報(bào)告的是檢測(cè)折點(diǎn)，而不是真正的MIC2021/10/1029

與臨床溝通中常見(jiàn)問(wèn)題

5、培養(yǎng)陽(yáng)性的細(xì)菌都需要用抗菌藥物治療嗎？不是的培養(yǎng)陽(yáng)性感染，可能為污染（血培養(yǎng)），可能為定植（痰培養(yǎng)）任何結(jié)果必須結(jié)合臨床情況進(jìn)行評(píng)價(jià)（很重要）感染部位的清創(chuàng)、引流、換藥比使用抗菌藥物更加重要改善患者全身情況：器官功能支持，糾正酸堿平衡，電解質(zhì)紊亂，低蛋白血癥，高血糖等2021/10/1030

與臨床溝通中常見(jiàn)問(wèn)題

6、選擇藥敏報(bào)告敏感的藥物，為什么臨床治療無(wú)效？

體外藥敏試驗(yàn)只能預(yù)測(cè)體內(nèi)治療效果，并不等同；一般來(lái)說(shuō)，耐藥＝治療無(wú)效；敏感≠治療有效?？赡懿皇钦嬲闹虏【ㄎ廴净蚨ㄖ簿┘?xì)菌本身因素（如誘導(dǎo)耐藥，生物被膜）感染部位與藥代動(dòng)力學(xué)因素細(xì)菌的MIC，給藥劑量和用藥方式藥敏試驗(yàn)藥物中有些藥物單獨(dú)使用無(wú)效，但可以與其他藥物聯(lián)合用藥藥物劑型及生物利用度（純品、商品）2021/10/1031

與臨床溝通中常見(jiàn)問(wèn)題7、涂片鏡檢結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果不吻合？涂片鏡檢是報(bào)告所有檢見(jiàn)的細(xì)菌，而培養(yǎng)的目的是檢出致病菌。一些苛氧菌需在特殊的環(huán)境或培養(yǎng)基上才能生長(zhǎng)。2021/10/1032

與臨床溝通中常見(jiàn)問(wèn)題

8、取的明顯就是膿液標(biāo)本，為何鑒定報(bào)告為無(wú)菌生長(zhǎng)？我們做的是有氧培養(yǎng)，膿液可能為厭氧菌感染?？赡芗?xì)菌被大量的中性粒細(xì)胞吞噬。2021/10/1033

與臨床溝通中常見(jiàn)問(wèn)題

9、鑒定結(jié)果明明寫(xiě)著四聯(lián)球菌、革蘭氏陽(yáng)性桿菌，為何沒(méi)有藥敏結(jié)果？四聯(lián)球菌為微球菌，一般不引起人體致病，為非致病菌，故考慮污染可能。藥敏結(jié)果參照CLSI標(biāo)準(zhǔn)，目前革蘭氏陽(yáng)性菌沒(méi)有參照標(biāo)準(zhǔn)，故暫不能做藥敏試驗(yàn)，若需治療可參照陽(yáng)性球菌用藥。2021/10/1034

與臨床溝通中常見(jiàn)問(wèn)題

10、一般培養(yǎng)不是三天出結(jié)果嗎，今天第四天了怎么還沒(méi)出來(lái)？一般培養(yǎng)經(jīng)48小時(shí)后，即第三天出報(bào)告，若需分離致病菌的則第四天出報(bào)告。2021/10/1035

與臨床溝通中常見(jiàn)問(wèn)題11、今天的培養(yǎng)結(jié)果怎么與前天的不一樣？取材是否規(guī)范。痰標(biāo)本，有時(shí)選優(yōu)勢(shì)菌做，就可能導(dǎo)致兩次不一樣。2021/10/1036

與臨床溝通中常見(jiàn)問(wèn)題12.明顯稀便，培養(yǎng)結(jié)果為何正常？大便普通培養(yǎng)，通常只能鑒定志賀菌、沙門菌感染，致病性大腸桿菌我們沒(méi)有鑒定血清。懷疑霍亂時(shí)，需開(kāi)霍亂弧菌培養(yǎng)?？赡懿《靖腥?輪狀病毒)。2021/10/1037

小結(jié)耐藥菌，尤其是多重耐藥菌的出現(xiàn)，使臨床抗感染治療面臨著困難的用藥決策細(xì)菌藥敏試驗(yàn)在