酶學(xué)反應(yīng)技術(shù)

酶活性測定技術(shù)一、酶用來診斷各種疾病早在1908年以測定尿液中的淀粉酶來診斷急性胰腺炎30年代臨床測定堿性磷酸酶用于診斷骨骼疾病、肝膽疾病特別是出現(xiàn)阻塞性黃疸時(shí)堿性磷酸酶也明顯增高臨床上可根據(jù)不同體液中酶濃度的變化來診斷各種疾病由于酶蛋白的含量甚微很難直接測定其蛋白質(zhì)的含量而且在生物組織中酶蛋白又與其他多種蛋白混合存在，將其提純耗時(shí)費(fèi)力故以酶活性的測定來了解血清中酶的存在與多寡二、酶活性的概念酶活性即酶促反應(yīng)速度，指在規(guī)定條件下單位時(shí)間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生成量。v=-d〔S〕/dt或v=d〔P〕/dt。注：在實(shí)際測定酶促反應(yīng)速度時(shí)，以測定單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物的生成量為好。底物濃度為〔S〕,產(chǎn)物濃度為〔P〕,時(shí)間為t，反應(yīng)速度為v三、酶活性測定的最主要的方法按照對酶促反應(yīng)時(shí)間的選擇不同

連續(xù)監(jiān)測法定時(shí)法(固定時(shí)間法)四、酶偶聯(lián)反應(yīng)技術(shù)概念：酶偶聯(lián)反應(yīng)測定技術(shù)是指將兩種或兩種以上的數(shù)種酶組成一個(gè)連續(xù)反應(yīng)體系來測定待測酶活性或代謝物濃度的技術(shù)。應(yīng)用：對于底物或產(chǎn)物不能直接測定或難于準(zhǔn)確測定的酶促反應(yīng)。ExEaEiABCP式中A為底物，B、C為中間產(chǎn)物，P為產(chǎn)物（必須能夠直接測定），Ex為待測酶，Ea、Ei都為工具酶。按照工具酶作用的不同，Ea又稱為輔助酶，Ei又稱為指示酶，CP稱為指示反應(yīng)。四、酶偶聯(lián)反應(yīng)技術(shù)酶偶聯(lián)反應(yīng)常用指示酶及其指示反應(yīng)（1）脫氫酶用作工具酶的脫氫酶都是以NAD(P)H為輔酶的脫氫酶，例如LDH、MDH、G6PD、GLDH等，它們催化下列反應(yīng)：可對NAD(P)H在紫外吸收或紫外激發(fā)熒光進(jìn)行測定。應(yīng)用：ALT、AST、CK等酶活性測定。P+NAD(P)H+H+

PH2+NAD(P)+(2)過氧化物酶POD可催化過氧化氫與某些色原反應(yīng)，例如與4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反應(yīng)，將其氧化為有色物質(zhì)，反應(yīng)如下：（Trinder反應(yīng)，1969）應(yīng)用：GOD、COD、GPO、甘油氧化酶、尿酸酶（屬于氧化酶類）等都可以將各自的底物氧化為過氧化氫，因此都可以與POD偶聯(lián)，通過Trinder反應(yīng)加以測定。POD2H2O2+4-AAP+酚醌亞胺（紅色）+4H2O小結(jié)：酶活性測定的最主要的方法是連續(xù)監(jiān)測法當(dāng)?shù)孜?/p>