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種子生產(chǎn)與經(jīng)營專業(yè)教學(xué)資源庫《薯類種子生產(chǎn)技術(shù)》馬鈴薯莖尖脫毒技術(shù)目錄CONTENTS一二三外植體選取與消毒莖尖剝離與接種莖尖培養(yǎng)四脫毒苗鑒定1.外植體選取應(yīng)選用生產(chǎn)上主栽的、或具有某種特性(如抗馬鈴薯癌腫病)優(yōu)良品種塊莖的休眠芽或剛出土幼苗的莖尖、或田間成株上的葉芽作莖尖剝離材料。一、外植體選取與消毒2.外植體消毒將入選材料放入紗布袋，用自來水沖洗1h后，在無菌條件下，放入70％～75％酒精中浸5～30s，再用無菌水漂洗1～2次，再用0.1％升汞（每升加1滴吐溫）液消毒3～8min(或用3％次氯酸鈉液加2～4滴吐溫振蕩消毒15～20min)，取出用無菌水漂洗3～5次，瀝干備用。一、外植體選取與消毒1.莖尖剝離用滅菌濾紙吸干材料表面水分，在體視解剖鏡下用手術(shù)刀等工具輕、準(zhǔn)、快速地剝?nèi)ビ兹~，切取帶1～2個葉原基(0.1～0.4mm大小)的生長點(diǎn)。一、外植體選取與消毒2.接種將切下的生長點(diǎn)迅速接入裝有莖尖分化培養(yǎng)基的試管或培養(yǎng)瓶中，每管（瓶）放1個生長點(diǎn)。注明品種，莖尖號，接種期。二、莖尖剝離與接種1.試管苗培養(yǎng)日溫25℃，夜溫15℃，光照時數(shù)12～14h／d，光照強(qiáng)度2000～3000lx條件下培養(yǎng)。三、莖尖培養(yǎng)2.試管苗繼代培養(yǎng)三、莖尖培養(yǎng)1.馬鈴薯PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM或PVS等病毒，用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測，無陽性反應(yīng)再用指示植物鑒定。2.紡錘塊莖類病毒(PSTVd)用往復(fù)雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳法（R）檢測，鑒定篩選出不帶PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM、PVS和PSTVd的脫毒苗。經(jīng)鑒定脫毒苗可以進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)。四、脫毒苗鑒定ELISA雙抗體夾心測抗原（病毒）四、脫毒苗鑒定病毒種類指示植物表現(xiàn)癥狀馬鈴薯X病毒（PVX）千日紅、曼陀羅、辣椒、心葉煙脈間花葉馬鈴薯S病毒（PVS）莧色藜、千日紅、曼陀羅、昆諾阿藜葉脈深陷，粗縮馬鈴薯Y病毒（PVY）野生馬鈴薯、洋酸菜、曼陀羅隨品種而異，有些輕微花葉或粗縮，敏感品種反應(yīng)為壞死馬鈴薯卷葉病毒（PLRV）洋酸菜葉尖呈淺黃色，有些品種呈紫色或紅色幾種馬鈴薯病毒的指示植

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