紅細(xì)胞血型及相關(guān)檢驗(yàn)

第二節(jié)紅細(xì)胞血型及相關(guān)檢驗(yàn)一、ABO血型鑒定（一）鹽水介質(zhì)試管法1．原理紅細(xì)胞表面的A、B抗原與相應(yīng)的IgM型抗A、抗B抗體在鹽水介質(zhì)中發(fā)生特異性結(jié)合，可出現(xiàn)肉眼可見的凝集。一、ABO血型鑒定（一）鹽水介質(zhì)試管法2．試劑

人血清ABO血型抗體(1)標(biāo)準(zhǔn)血清

人ABO血型單克隆抗體標(biāo)準(zhǔn)血清滅菌冷凝集素及穩(wěn)定性補(bǔ)體親和力特異性抗體效價(jià)標(biāo)準(zhǔn)血清的要求：一、ABO血型鑒定（一）鹽水介質(zhì)試管法2．試劑(2)標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液3個(gè)以上的健康人血液，按A、B、O型分別混合后，經(jīng)生理鹽水洗滌3次，用壓積紅細(xì)胞配成2%～5%紅細(xì)胞懸液。

一、ABO血型鑒定（一）鹽水介質(zhì)試管法3．簡要操作（1）正定型：標(biāo)準(zhǔn)血清+待檢者紅細(xì)胞懸液（2）正定型：標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液+待檢者血清一、ABO血型鑒定（二）鹽水介質(zhì)玻片法（三）微柱凝膠介質(zhì)血型卡法微柱凝膠介質(zhì)中紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合，形成的紅細(xì)胞凝塊，不能通過凝膠間隙，懸浮在凝膠的上層或中層，呈陽性反應(yīng)；游離紅細(xì)胞離心時(shí)可以通過凝膠間隙，沉于微柱管的底部，呈陰性反應(yīng)。

患者：避免使用影響血型鑒定結(jié)果的藥物。

器材及試劑：清潔干燥，防止交叉污染，試劑質(zhì)量應(yīng)符合要求，凝膠卡封口完整，凝膠避免干涸及氣泡，有效期內(nèi)使用。

操作：先加血漿或血清，后加紅細(xì)胞懸液，注意離心速度和時(shí)間，注意反應(yīng)溫度，觀察結(jié)果仔細(xì)，必要時(shí)使用顯微鏡。

標(biāo)本：新鮮，防止細(xì)菌污染，不能使用溶血標(biāo)本，紅細(xì)胞懸液濃度適當(dāng)；血漿標(biāo)本用EDTA-K2或枸櫞酸鹽抗凝。質(zhì)量保證方法學(xué)評價(jià)：方法評價(jià)鹽水介質(zhì)玻片法操作簡單，無需特殊儀器，適于血型普查；靈敏度差，反應(yīng)時(shí)間長，不能用于反定型，結(jié)果不能保存，人為因素影響大，易發(fā)生血液污染。鹽水介質(zhì)試管法常用方法，應(yīng)用廣泛，較玻片法靈敏、結(jié)果準(zhǔn)確，反應(yīng)時(shí)間短，適于急診血型鑒定；結(jié)果不能保存、人為因素影響大。微柱凝膠介質(zhì)血型卡法特異性強(qiáng)，靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確、保持時(shí)間長，標(biāo)本和試劑用量少，操作可以標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化；減少了醫(yī)源性污染；需要專門離心設(shè)備和試劑卡，成本較高。血型鑒定正反定型不一致的原因：①標(biāo)本造成張冠李戴。②使用溶血標(biāo)本或誤把溶血現(xiàn)象當(dāng)作不凝集。③血清與紅細(xì)胞懸液比例不當(dāng)。④紅細(xì)胞懸液過濃或過淡。⑤離心速度、時(shí)間不當(dāng)。⑥試劑失效或受細(xì)菌污染。⑦器材不清潔、不干燥。⑧試驗(yàn)時(shí)溫度過高。⑨登記時(shí)出現(xiàn)錯(cuò)誤。①抗體形成不足或水平降低；②疾病影響；③藥物的影響；④血清中本身存在ABO血型以外的抗體或因大量輸血出現(xiàn)意外抗體，干擾定型。①紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過少；②產(chǎn)生類B抗原；③細(xì)菌污染：導(dǎo)致紅細(xì)胞上的T抗原被激活，出現(xiàn)多凝集或全凝集現(xiàn)象。血清標(biāo)本紅細(xì)胞標(biāo)本技術(shù)性錯(cuò)誤二、Rh血型鑒定（二）酶介質(zhì)法二、Rh血型鑒定（三）其他方法1．抗人球蛋白試驗(yàn)不完全抗體因分子量小，在鹽水介質(zhì)中只能與含有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞結(jié)合，使紅細(xì)胞致敏，但不發(fā)生凝集?？谷饲虻鞍卓膳c紅細(xì)胞上結(jié)合的不完全抗體結(jié)合，將致敏紅細(xì)胞連接，發(fā)生肉眼可見的凝集。

2．低離子強(qiáng)度溶液試驗(yàn)二、Rh血型鑒定

----酶介質(zhì)法質(zhì)量保證：①紅細(xì)胞要用生理鹽水充分洗滌，懸液濃度應(yīng)適當(dāng)。②每次實(shí)驗(yàn)均需做陽性、陰性對照。③陰性應(yīng)采用間接抗球蛋白試驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)。④觀察結(jié)果時(shí)應(yīng)輕輕搖動(dòng)試管，不可用力振搖。①不能選用酶介質(zhì)法用于M、N、S、Fya和Fyb抗原檢查此類系統(tǒng)。②酶試劑易失效，每批試劑要分裝凍存，融化后一次使用。③酶試劑的量應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)要求加入。④注意37℃水浴的溫度。酶介質(zhì)法鹽水介質(zhì)法方法學(xué)評價(jià):方法評價(jià)鹽水介質(zhì)法操作簡便、省時(shí)，特異性強(qiáng)，敏感度高，應(yīng)用廣泛，但試劑較貴酶介質(zhì)法簡便、經(jīng)濟(jì)，準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性欠佳，反應(yīng)時(shí)間較長抗人球蛋白試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確，檢查不完全抗體最可靠的方法，操作煩瑣費(fèi)時(shí)，試劑較貴低離子強(qiáng)度溶液試驗(yàn)反應(yīng)時(shí)間短，靈敏度高三、交叉配血試驗(yàn)交叉配血試驗(yàn)包括主側(cè)配血和次側(cè)配血，主側(cè)是受血者血清（receptorserum，RS）與供血者紅細(xì)胞（donorcell，DC）相配的一側(cè)，次側(cè)是受血者紅細(xì)胞（receptorcell，RC）與供血者血清（donorserum，DS）相配的一側(cè)，兩者合稱交叉配血。受血者供血者主側(cè)次側(cè)陰性陽性三、交叉配血試驗(yàn)（一）鹽水介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)三、交叉配血試驗(yàn)（二）抗人球蛋白介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)抗人球蛋白試驗(yàn)可分為直接抗人球蛋白試驗(yàn)（DAT）和間接抗人球蛋白試驗(yàn)（IAT）。

直接抗人球蛋白試驗(yàn)

間接抗人球蛋白試驗(yàn)抗人球蛋白同種異型抗體三、交叉配血試驗(yàn)（三）低離子凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)?zāi)郯肥且环N高價(jià)陽離子季胺鹽多聚物，溶解后能產(chǎn)生大量陽離子，可以中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞間距縮小，發(fā)生可逆性的非特異性凝集；抗體致敏紅細(xì)胞被凝胺凝集則產(chǎn)生不可逆的特異性凝集。質(zhì)量保證：（1）標(biāo)本新鮮，應(yīng)防止污染，且無凝血、溶血。（2）實(shí)驗(yàn)器材應(yīng)清潔干燥，為防止交叉污染。（3）認(rèn)真查對標(biāo)本與輸血申請單上提供的患者姓名、性別、床號、住院號等是否一致。（4）交叉配血發(fā)生溶血或凝集現(xiàn)象，是配血不合的反應(yīng)，首先應(yīng)考慮受血者與供血者的ABO和Rh血型鑒定是否有錯(cuò)，須重新鑒定血型，必要時(shí)可進(jìn)行抗體篩檢。（5）如果患者在48h內(nèi)輸入1600～2000ml以上的血液，需要多個(gè)供血者，除了患者與供血者需進(jìn)行交叉配血外，供血者之間也應(yīng)進(jìn)行交叉配血，防止供血者之間血型不合。（6）結(jié)果觀察要仔細(xì)，必要時(shí)要用顯微鏡檢查證實(shí)。仔細(xì)核對配血結(jié)果，認(rèn)真填寫報(bào)告和登記，準(zhǔn)確無誤后發(fā)出報(bào)告。（7）配血后，受血者和供血者的標(biāo)本應(yīng)置冰箱保存。質(zhì)量保證：①本法僅用于檢查ABO血型系統(tǒng)IgM血型抗體與抗原是否相配合。②宜用試管法進(jìn)行交叉配血，不能采用玻片法。本法適用于有輸血史和妊娠史，血液中可能產(chǎn)生免疫性抗體的患者使用。有輸血史或妊娠史的患者，應(yīng)抽取48小時(shí)內(nèi)的標(biāo)本。①可選擇EDTA-K2抗凝，用血清做試驗(yàn)效果更好。②本法對Kell血型系統(tǒng)的抗體檢測不理想。③凝聚胺只能使正常紅細(xì)胞發(fā)生凝集，對缺乏唾液酸的細(xì)胞無作用。④主要用于急診搶救患者的交叉配血?？谷饲虻鞍自囼?yàn)?zāi)郯方橘|(zhì)法鹽水介質(zhì)法方法學(xué)評價(jià):方法評價(jià)鹽水介質(zhì)法適用于ABO血型交叉配血，操作簡便、快速，不能檢出不相配合的IgG類的抗體抗人球蛋白試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確，檢查不完全抗體最可靠的方法，操作煩瑣費(fèi)時(shí)，試劑較貴凝集胺介質(zhì)法應(yīng)用廣泛，快速、靈敏、準(zhǔn)確，可檢測IgM、IgG抗體，需特殊試劑，操作復(fù)雜發(fā)現(xiàn)ABO血型鑒定的錯(cuò)誤臨床應(yīng)用：123發(fā)現(xiàn)亞型不合的情況發(fā)現(xiàn)其他的血型抗體或不規(guī)則抗體四、紅細(xì)胞抗體篩查及鑒定（一）不規(guī)則抗體篩查標(biāo)本待檢者血清、2%～5%待檢者紅細(xì)胞生理鹽水懸液試劑抗體篩選標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）方法鹽水介質(zhì)法、凝聚胺法、抗人球蛋白法等結(jié)果判斷血清與自身紅細(xì)胞和3個(gè)篩查紅細(xì)胞均無凝集者，為不規(guī)則抗體篩查陰性；血清與自身紅細(xì)胞和3個(gè)篩查紅細(xì)胞均凝集者，待檢者血清中存在自身冷抗體或同種免疫性紅細(xì)胞不規(guī)則抗體；血清與自身紅細(xì)胞無凝集，與3個(gè)篩查紅細(xì)胞至少有1個(gè)出現(xiàn)凝集，為不規(guī)則抗體篩查陽性，表明待檢者血清中含同種免疫性紅細(xì)胞不規(guī)則抗體待檢者血清+譜紅細(xì)胞紅細(xì)胞凝集反應(yīng)四、紅細(xì)胞抗體篩查及鑒定（二）不規(guī)則抗體鑒定五、血型鑒定和交叉配血自動(dòng)分析自動(dòng)化血型分析技術(shù)可應(yīng)用于：①ABO血型鑒定。②Rh血型鑒定。③交叉配血。④抗體篩選。⑤抗體鑒別。1．U型微孔板法

為96孔U型PVC板，在中心血站進(jìn)行獻(xiàn)血員大批量的ABO血型鑒定時(shí)，與全自動(dòng)加樣儀器、酶標(biāo)儀聯(lián)合使用。五、血型鑒定和交叉配血自動(dòng)分析2．V型梯度微孔板未凝集紅細(xì)胞沉降后從V型梯度微孔板孔中的梯度上滾落到孔底部，凝集紅細(xì)胞沉降后掛在V型梯度微孔板孔中的梯度上，通過攝影技術(shù)自動(dòng)判斷結(jié)果。五、血型鑒定和交叉配血自動(dòng)分析3．血型定型試劑卡法

主要應(yīng)用于大型醫(yī)院輸血科進(jìn)行交叉配血及血型鑒定等。六、吸收放散試驗(yàn)抗體與相應(yīng)抗原在適合條件下可發(fā)生凝集或致敏，但這種結(jié)合是可逆的，如改變某些物理或化學(xué)條件，抗體可以