浮游菌測定操作規(guī)程

目的：對不同潔凈區(qū)環(huán)境浮游菌進行監(jiān)測并規(guī)范管理以確保生產(chǎn)環(huán)境符合GMP的要求，依據(jù)《中國藥典》2020年版及《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》等法規(guī)，制定本規(guī)程。適用范圍：適用于生產(chǎn)車間、檢驗部潔凈室（區(qū)）的浮游菌監(jiān)測和潔凈度等級的確認。依據(jù)：《中國藥典》2020年版四部通則9205《藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原則》《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（2010年修訂）《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（2010年修訂）附錄GB/T16293—2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測試方法》責(zé)任：質(zhì)量部（檢驗）檢驗員負責(zé)監(jiān)測；質(zhì)量部（質(zhì)監(jiān)）質(zhì)監(jiān)員負責(zé)監(jiān)督；內(nèi)容：所用的儀器、設(shè)備和培養(yǎng)基：浮游菌采樣器、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、生化培養(yǎng)箱。培養(yǎng)皿制備：2.1培養(yǎng)皿的處理：將培養(yǎng)皿置于121°C濕熱法滅菌20分鐘或180°C干熱滅菌至少2小時（或取一次性培養(yǎng)皿）。2.2胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)皿的制備：根據(jù)監(jiān)測點的個數(shù)，領(lǐng)用所需培養(yǎng)基的量，將培養(yǎng)基置于100C水浴加熱至熔化（注意：時刻觀察水浴鍋的水量，防止水燒干，導(dǎo)致玻璃炸裂，發(fā)生意外），冷卻至45C（不能急速冷卻，將水浴鍋設(shè)置45C左右，使其自然冷卻，以免發(fā)生意外）。在微生物檢查室內(nèi)，用剪刀將培養(yǎng)基瓶口打開，將瓶口放在點燃的酒精燈外焰，旋轉(zhuǎn)360°，目的使瓶口周圍處于無菌狀態(tài)，將培養(yǎng)皿蓋打開1/3后，將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿中，每皿約15ml?20ml，（注意：培養(yǎng)基應(yīng)均勻鋪開，不得有氣泡）。倒好后馬上蓋上培養(yǎng)皿蓋，使其自然凝固，以備用。2.3胰胳大豆胨瓊脂培養(yǎng)皿的預(yù)培養(yǎng)：將制備好的培養(yǎng)皿，倒置于30C?35C的生化培養(yǎng)箱內(nèi)，預(yù)培養(yǎng)2天，若培養(yǎng)基平皿上無菌落生長，即可供使用。2.4培養(yǎng)皿的盛裝、存放：預(yù)培養(yǎng)結(jié)束后，用不銹鋼桶在培養(yǎng)箱內(nèi)，將培養(yǎng)皿裝好（11?14個/桶），并保證桶上的小孔保持關(guān)閉，將平皿置冰箱內(nèi)，2-8°C保存，并在七日內(nèi)用畢（使用前檢查有無干裂等情況）。測試狀態(tài)及說明：3.1有空態(tài)測試、動態(tài)測試和靜態(tài)測試，空態(tài)：潔凈室（區(qū)）在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已安裝完畢且功能完備的情況下，但是沒有生產(chǎn)工藝設(shè)備、原材料或人員的狀態(tài)；靜態(tài)A：潔凈室（區(qū)）在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已安裝完畢且功能完備的情況下，生產(chǎn)工藝設(shè)備已安裝，潔凈室（區(qū)）內(nèi)沒有生產(chǎn)人員的狀態(tài)；靜態(tài)B：潔凈室（區(qū)）在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20min自凈后。動態(tài)：指潔凈室（區(qū)）處于正常生產(chǎn)狀態(tài)，設(shè)備在指定的方式下進行，并且有指定的人員按照規(guī)范操作。在空態(tài)或靜態(tài)A測試時，對單向流潔凈室（區(qū)）而言，測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于10min后開始；對非單向流潔凈室（區(qū)），測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于30min后開始；在靜態(tài)B測試時，對單向流潔凈室（區(qū)），測試宜在生產(chǎn)人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過10min自凈后開始；對非單向流潔凈室（區(qū)），測試宜在生產(chǎn)人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20min自凈后開始；3.2采樣點數(shù)目：面積（m2）潔凈度級別A級C級D級<102?322N10?<20422N20?<40822N40?<1001642N100?<20040103N200?<40080206N400?<10001604013N1000?<200040010032200080020063注：表中的面積，對于單向流潔凈工作臺，是指送風(fēng)面口表面積。對于非單向流潔凈室是指房間的面積。3.3采樣點的位置：采樣點一般在離地面0.8m?1.5m左右布置（略高于工作面）;送風(fēng)口測點位置離開送風(fēng)面30cm左右。在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍內(nèi)可增加測點。3.4采樣量設(shè)置：潔凈度級別采樣量L/次A級1000C級500D級100監(jiān)測程序：4.1檢測人員進入潔凈區(qū)檢測（人員與物料可通過“人員、物料的緩沖間”進入潔凈區(qū)）應(yīng)用消毒劑消毒采樣器外表面。4.2監(jiān)測順序宜由高級別區(qū)域到低級別區(qū)域進行，進出入相同級別區(qū)域無特殊規(guī)定。4.3測試時房間門（區(qū)域）應(yīng)封閉，空態(tài)或靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2人。動態(tài)測試時，除檢測人員外，禁止其余人員在測試點1E范圍內(nèi)活動，防止采樣過程的污染。采樣：5.1用蘸有濃度為75%乙醇的棉球擦拭采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及轉(zhuǎn)盤周邊，以消毒，開啟采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時間不少于5分鐘，然后快速放入除去外蓋的平皿，蓋上頂蓋，設(shè)置采樣量，再將采樣器置于采樣點，開始采樣（對于單向流或送風(fēng)口，使采樣管口朝向應(yīng)正對氣流方向，離開送風(fēng)面30cm左右；對于非單向流，安裝好三角架，調(diào)節(jié)高度至少0.8m?1.5m裝采樣器，調(diào)節(jié)傾斜度，使采樣口向上），采樣后打開采樣器頂蓋，立即蓋上平皿玻璃外蓋密閉同時注明標(biāo)記。5.2采樣結(jié)束后返回。培養(yǎng)：6.1全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。6.2在30°C?35°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，逐日觀察結(jié)果，時間不少于2天6.3每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。同時每次檢測均取1個平皿做陰性對照試驗.菌落計數(shù)及濃度計算：7.1菌落計數(shù)方法：7.1.1用肉眼直接計數(shù)、標(biāo)記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用5?10倍放大鏡檢查，有否遺漏。7.1.2若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。7.2浮游菌濃度計算：7.2.1用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。7.2.2每個測點的浮游菌平均濃度的計算：見式（1）平均濃度（個/m3）=菌落數(shù)：采樣量 式（1）例1.某測點采樣時為400L，菌落數(shù)為1,則：平均濃度=1：0.4=2.5個/m3例2.某測點采樣量為2m3，菌落數(shù)為3，則平均濃度=3：2=1.5個/m3結(jié)果判定與處理：8.1每個采樣點的單個菌落和平均菌落濃度必須低于所選定的評定標(biāo)準(zhǔn)中的界限。8.2在靜態(tài)測試時，若某采樣點的平均菌落濃度超過評定標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)重新采樣兩次，兩次測試結(jié)果均合格才能判為合格。8.3監(jiān)測報告于檢驗完成（或培養(yǎng)到期）當(dāng)日發(fā)至質(zhì)量管理部（檢驗），超過警戒限度或糾偏限度應(yīng)在備注欄中說明并注明檢測位置。米樣注意事項：9.1應(yīng)使用檢定合格，且在使用有效期內(nèi)的