實驗動物的基本技術和方法

第一節(jié)動物實驗前的準備第二節(jié)實驗動物的分組和標記第三節(jié)實驗動物的抓取與固定第四節(jié)實驗動物麻醉方法第五節(jié)實驗動物的給藥、采血方法目前一頁\總數(shù)九十一頁\編于二點第一節(jié)動物實驗前的準備

動物實驗前要進行一系列的準備工作，包括理論準備、條件準備、預備實驗。理論準備主要指了解動物實驗的基礎理論知識，選題立項和設定假設、研究計劃和方案的制定、實驗方法及實驗動物的選擇、參考文獻的查閱等。條件準備指儀器設備的備置和校準、藥品的配制、器械的準備、實驗動物的購入、實驗場所消毒與器具配套等。預備實驗是正式實驗的預演。目前二頁\總數(shù)九十一頁\編于二點動物實驗前的理論準備有關理論知識的學習查找有關動物實驗的基礎知識常用實驗動物的生物學特點及其應用實驗動物的選擇原則目前三頁\總數(shù)九十一頁\編于二點動物實驗前的條件準備

動物飼養(yǎng)室、動物實驗室及飼養(yǎng)器具的準備應檢查動物籠器具的數(shù)量、飼養(yǎng)室衛(wèi)生及消毒情況。環(huán)境控制：理化因素、居住因素、營養(yǎng)因素、生物因素。目前四頁\總數(shù)九十一頁\編于二點動物實驗室及相關設施

動物實驗設施是指以研究、試驗、教學、生物制品和藥品生產等為目的，進行實驗動物飼養(yǎng)、試驗的建筑物、設備以及運營管理在內的總和，包括：一般動物實驗環(huán)境設施、特殊動物實驗設施、實驗儀器設備。用于一般動物實驗的環(huán)境根據(jù)對飼養(yǎng)動物的微生物控制程度和空氣凈化程度，分為：

普通環(huán)境（Conventionalcondition）普通級動物實驗屏障環(huán)境（BarrierCondition）SPF級動物實驗隔離環(huán)境（Isolationcondition)

悉生和無菌動物實驗目前五頁\總數(shù)九十一頁\編于二點（一）普通動物實驗觀察室環(huán)境設施條件要求1．

環(huán)境特點①普通環(huán)境設施符合動物飼養(yǎng)的基本要求，不能完全控制傳染因子；②沒有進行嚴格的環(huán)境控制和微生物控制，但也應達到普通動物環(huán)境條件的基本要求；③普通環(huán)境室內空氣與外界直接相通；④適用于普通動物實驗的飼養(yǎng)觀察2．飼養(yǎng)觀察室內需要的基本設備目前六頁\總數(shù)九十一頁\編于二點（二）清潔動物實驗觀察室環(huán)境設施條件要求

1、清潔級動物實驗要求飼養(yǎng)在溫濕度恒定的（半）屏障系統(tǒng)中。其特點是：

①與外界隔離，有緩沖間。②物品經滅菌處理后進入屏障系統(tǒng)中。③實驗人員進出要嚴格按屏障系統(tǒng)操作規(guī)程操作2、屏障系統(tǒng)飼養(yǎng)觀察室內的基本設備必需設備：超凈工作臺目前七頁\總數(shù)九十一頁\編于二點

(三）SPF級以上動物實驗觀察室環(huán)境設施條件要求1.SPF級以上的動物觀察飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)或隔離系統(tǒng)中其特點是：

①空氣、飼料、水、墊料和實驗器具均應無菌.②實驗人員要嚴格按隔離系統(tǒng)操作規(guī)程操作。2．隔離環(huán)境觀察室內的基本設備必需設備：超凈工作臺目前八頁\總數(shù)九十一頁\編于二點

空氣層流架的操作規(guī)程

使用前，

清潔層流架的內環(huán)境，消毒，滅菌。進入層流架的一切物品必須經過滅菌處理。打開層流架門之前，應加大層流架內的送風量，以避免架內環(huán)境污染。實驗操作時，須在超凈工作臺內進行。目前九頁\總數(shù)九十一頁\編于二點目前十頁\總數(shù)九十一頁\編于二點

IVC系統(tǒng)的操作規(guī)程

1、

IVC系統(tǒng)的安裝和消毒2、IVC系統(tǒng)上的動物飼養(yǎng)盒必須在超凈工作臺內打開，無菌操作。3、實驗完畢，動物飼養(yǎng)盒必須在超凈工作臺內蓋好上蓋后，方能離開超凈工作臺，放在IVC系統(tǒng)上。4、檢查進氣孔和排氣孔是否成功對接目前十一頁\總數(shù)九十一頁\編于二點目前十二頁\總數(shù)九十一頁\編于二點二.實驗藥品、試劑的準備三.實驗器械的準備實驗器械準備得充分、適當，有助于實驗的順利完成。不同類型、部位的實驗使用的實驗器械種類、數(shù)量不盡一致。實驗器械包括完成實驗所需要的檢測儀器、實驗時動物的固定器械、動物外科手術器械。目前十三頁\總數(shù)九十一頁\編于二點(一)

常用動物外科手術器械（二）手術器械的消毒手術器械常用的消毒方法有：煮沸滅菌法、高壓蒸氣滅菌法和化學藥品滅菌法。（三）敷料、手術巾、手術衣、帽、口罩的消毒.目前十四頁\總數(shù)九十一頁\編于二點

四.

手術人員的準備為了保證無菌手術的進行,手術人員應作一系列的無菌的準備。雖然實驗動物有不同的微生物控制等級，但手術人員不管做什么等級動物的手術，都應該遵循無菌手術的基本原則。因此手術人員在術前應作下列準備:（(一）手術所需人數(shù)（二）

更衣（三）

手、臂的清潔和消毒目前十五頁\總數(shù)九十一頁\編于二點

特殊實驗動物設施包括三類：感染（生物危害）實驗設施、化學污染動物實驗設施、放射性污染設施。生物危害特殊動物實驗設施是指用病原體對動物進行實驗感染的一種特殊屏障設施。目前，國內外根據(jù)病原微生物對人和動物的危害程度把感染動物實驗設施分：BSL1(P1)、BSL2(P2)、BSL3(P3)、BSL4(P4)級。目前十六頁\總數(shù)九十一頁\編于二點

動物設施的防護水平：實驗操作和安全設備匯總

危險度等級防護水平實驗操作和安全設備1級ABSL-1限制出入，穿戴防護服和手套2級ABSL-2ABSL-1的操作加：危險警告標志?？僧a生氣溶膠的操作應使用Ⅰ級或Ⅱ級BSC。廢物和飼養(yǎng)籠舍在清洗前先清除污染。3級ABSL-3ABSL-2的操作加：準入控制。所有操作均在BSC內進行，并穿著特殊防護服。4級ABSL-4ABSL-3的操作加：嚴格限制出入。進入前更衣。配備Ⅲ級BSC或正壓服所有廢物在清除設施前需先清除污染。ABSL：動物生物安全水平；BSC：生物安全柜。目前十七頁\總數(shù)九十一頁\編于二點動物的引進在動物實驗的各項準備工作中，動物的引進是一個重要的環(huán)節(jié)。在引進動物前，應確定引進動物的種類、品系、規(guī)格、數(shù)量及動物微生物控制等級等。引進動物前，應檢查各項準備工作是否就緒，如飼養(yǎng)動物的器具、器材是否準備好，飼養(yǎng)室的衛(wèi)生和消毒情況；此外，還應檢查動物的籠卡、實驗記錄本、墊料、飼料、秤等實驗必須品是否準備好。目前十八頁\總數(shù)九十一頁\編于二點購入動物時應注意以下幾個方面的問題:1.購買動物時應向供應部門索取動物的相關資料，如動物的遺傳背景和微生物資料（動物質量合格證），以及動物品系、年齡、體重、胎次等。2.購買動物時應仔細觀察動物的狀態(tài)，對動物進行外觀的健康檢查：皮毛是否有光澤、眼有沒有眼屎、四肢有無腫脹潰爛、肛門周圍有無臟物等。同時要核對動物的數(shù)量等是否符合實驗要求。3.根據(jù)試驗觀察時間長短的需要，同時購入或領取相應數(shù)量的飼料和墊料。目前十九頁\總數(shù)九十一頁\編于二點動物的運輸若是從外地購入動物購入動物時，無論運輸距離的遠近，都應考慮運輸環(huán)境的溫度、濕度、飲食以及途中污染和窒息死亡等問題。需若是購入或領取清潔級以上的實驗動物，應注意運輸工具。應采取帶有空氣過濾膜的無菌運輸罐或帶過濾帽的籠盒運輸，嚴格檢查其密封狀況。新購進的動物最好不要立刻進行動物實驗，應將動物雌雄分開，并分籠在隔離區(qū)飼養(yǎng)一段時間，以便動物得以恢復體能并適應新的環(huán)境。目前二十頁\總數(shù)九十一頁\編于二點第二節(jié)實驗動物的分組和標記在實驗前對動物進行隨機分組和編號標記。

分組方法隨機化分組方法單純隨機抽樣均衡隨機抽樣隨機化方法抽簽法：用帶數(shù)字的卡片（如紙牌）隨機抽取。若分兩組，可用奇偶數(shù)為代表；若分四組，可用4種花色為代表隨機分組

目前二十一頁\總數(shù)九十一頁\編于二點抽卡片法隨機分組

動物編號隨機分組123456789101112131415抽卡數(shù)字8647101377621142129除以3的余數(shù)201112110221200初步分組cabbbcbbaccbcaa表中b組為6只，a組為4只，需再調整。再重新抽一卡片，將其數(shù)字除以6得余數(shù)為幾即挑第幾只放入第三組。隨機數(shù)字表法：基本同上目前二十二頁\總數(shù)九十一頁\編于二點動物的標記

良好的標記方法應保證號碼清楚，簡便易認、耐久適用，對動物無毒性，操作簡便且長時間能夠識別。染色法：大、小鼠、豚鼠常用3.5-5％苦味酸溶液涂成黃色；兔、貓、犬用2％硝酸銀溶液涂成咖啡色。烙印法：大、中型動物針刺法：兔號牌法：犬、猴、貓等大動物穿耳孔法（耳緣剪孔）：小鼠斷趾編號：小鼠剪尾編號：大、小鼠，僅限與兩組動物區(qū)分被毛剪號：大動物籠子標號：目前二十三頁\總數(shù)九十一頁\編于二點小鼠的標記目前二十四頁\總數(shù)九十一頁\編于二點目前二十五頁\總數(shù)九十一頁\編于二點213456789102030407050806090目前二十六頁\總數(shù)九十一頁\編于二點動物的管理經常性管理：保證動物正常飼養(yǎng)所必須的一切條件。每天觀察動物的狀態(tài)并認真做好記錄，搞好動物的飲食衛(wèi)生（每日添加新鮮的飼料和飲水，每周更換兩次干凈的墊料，做好常規(guī)消毒工作），防止動物的非正常死亡或意外損傷。特殊管理：在給動物施加一定的實驗因素時，如麻醉、手術等，要對動物進行特殊管理。“三分治，七分養(yǎng)”，對動物也一樣。防止動物窒息，控制傷口感染，消毒實驗環(huán)境，麻醉過程中實施保溫等措施在不同的情況下都需要進行

。目前二十七頁\總數(shù)九十一頁\編于二點動物的性別判定判斷方法根據(jù)動物的生殖器與肛門之間的距離遠近進行判斷，距離長的是雄性，短的為雌性。雄

雌目前二十八頁\總數(shù)九十一頁\編于二點小鼠的性別判定目前二十九頁\總數(shù)九十一頁\編于二點第三節(jié)實驗動物的抓取與固定

注意自我防護動物在保定過程中如果逃逸，要及時抓捕。避免損傷動物。目前三十頁\總數(shù)九十一頁\編于二點小鼠的抓取與固定手固定-----灌胃、腹腔給藥、取血等固定器固定-----靜脈給藥、尾靜脈取血固定板固定------外科手術等目前三十一頁\總數(shù)九十一頁\編于二點小鼠的抓取目前三十二頁\總數(shù)九十一頁\編于二點小鼠的固定目前三十三頁\總數(shù)九十一頁\編于二點目前三十四頁\總數(shù)九十一頁\編于二點目前三十五頁\總數(shù)九十一頁\編于二點大鼠

的固定目前三十六頁\總數(shù)九十一頁\編于二點家兔的抓取與固定手固定固定器固定手術固定臺固定目前三十七頁\總數(shù)九十一頁\編于二點兔的

抓取目前三十八頁\總數(shù)九十一頁\編于二點目前三十九頁\總數(shù)九十一頁\編于二點兔的固定目前四十頁\總數(shù)九十一頁\編于二點豚鼠的抓取與固定目前四十一頁\總數(shù)九十一頁\編于二點豚鼠的抓取目前四十二頁\總數(shù)九十一頁\編于二點目前四十三頁\總數(shù)九十一頁\編于二點犬的抓取與固定犬的捉拿保定方法較多。未經訓練和調教的犬性情兇惡，為防止在保定時被其咬傷，應對其頭部進行保定。捉拿犬時可用鐵鉗固定犬的頸部，用長一米左右的繃帶，打一個豬蹄扣套在鼻面部，使繃帶兩端位于下頜處并向后引至頸部打結固定。還有一種使用網(wǎng)口的方法也較簡單，即用皮革、金屬絲或棉麻制成的口網(wǎng)，套在犬口部，并將其附帶結于耳后頸部防止脫落。

如實驗需要麻醉時，可麻醉后去除鐵鉗仰臥于"V"型犬實驗臺上，拉出犬舌，最好用一塑料棒閂于犬上下臼齒之間并用繃帶固定好。拉出的犬舌上應放一塊沾有生理鹽水的紗布，以免損傷犬舌。頭部和四肢的保定與兔相似，可根據(jù)具體實驗條件而定。

目前四十四頁\總數(shù)九十一頁\編于二點獼猴的抓取與固定目前四十五頁\總數(shù)九十一頁\編于二點其它動物的抓取與固定目前四十六頁\總數(shù)九十一頁\編于二點羊的固定目前四十七頁\總數(shù)九十一頁\編于二點兩棲類動物的抓取與固定目前四十八頁\總數(shù)九十一頁\編于二點AB目前四十九頁\總數(shù)九十一頁\編于二點鳥類的抓取與固定目前五十頁\總數(shù)九十一頁\編于二點第四節(jié)實驗動物麻醉方法

恰當?shù)穆樽矸椒▽ΡＷC動物試驗的順利進行和獲得滿意的試驗結果有著非常重要的作用。有全身麻醉和局部麻醉，局麻僅適用大、小鼠，沙鼠，且對豚鼠和兔也很少使用，在這里就不述。全身麻醉分為藥物麻醉和氣體吸入麻醉兩種。藥物麻醉雖可以長時間保持深麻醉期，但如不精確的考慮動物的種類、品系、年齡、性別以及健康狀況而給藥，就會導致動物的死亡；吸入麻醉保持深麻醉期較短，還必須輔以其它輔助麻醉方法，比較繁雜。

目前五十一頁\總數(shù)九十一頁\編于二點麻醉前的準備在麻醉前幾天要注意觀察動物的采食情況。對貓、犬、豬或非人靈長類大動物，在麻醉前8-12h應禁食，以免麻醉或手術過程中發(fā)生嘔吐，家兔和嚙齒類動物無嘔吐反射，術前無需禁食。動物在麻醉前給予一定量的飲水。大動物實驗前要給予一定量的安定劑和阿脫品類藥物，減輕動物的過度緊張和減少唾液分泌以利于氣管插管操作。根據(jù)實驗部位和種類，給予動物脫毛等。目前五十二頁\總數(shù)九十一頁\編于二點常用麻醉藥物全身麻醉藥：

乙醚戊巴比妥鈉水合氯醛氯安酮局部麻醉劑：

普魯卡因/利多卡因目前五十三頁\總數(shù)九十一頁\編于二點麻醉方法全身麻醉：吸入麻醉腹腔或靜脈麻醉局部麻醉目前五十四頁\總數(shù)九十一頁\編于二點注意事項乙醚為易燃物品，要注意防火；準確計算麻醉劑量，避免麻醉過量致使動物中毒死亡，有些動物存在個體差異，應具體對待。注射時，一般要求緩慢，隨時觀察動物的反應，適可而止，當動物肌肉松弛，角膜反射消失，足爪緊張性下降時，應慢速或停止注射藥物。麻醉時需注意保溫。作慢性實驗時，在寒冷季節(jié)，要將麻醉劑加溫至動物體溫水平。麻醉過量時應采取立即搶救措施。注意人員安全

目前五十五頁\總數(shù)九十一頁\編于二點實驗動物的除毛方法拔毛法：剪毛法：急性實驗常用剃毛法：脫毛法：脫毛液8%硫化鈉水溶液

目前五十六頁\總數(shù)九十一頁\編于二點第五節(jié)實驗動物的給藥、采血方法

實驗動物的給藥方法有：攝入法（用于消化道）、注射法、涂布法（用于皮膚）、吸入法（用于呼吸道）等。目前五十七頁\總數(shù)九十一頁\編于二點攝入法給藥自動口服給藥----將藥物放入飼料或飲水中使動物自由飲食。強制灌胃法-----大小鼠：用灌胃針頭直接灌入胃中，小鼠0.2~1ml，大鼠1~4ml，豚鼠1~5ml。犬、兔、貓：動物被固定后使用開口器固定在動物口中，再用灌胃管插入胃中，推入藥液即可。實驗過程中要注意別將灌胃管誤入氣管。目前五十八頁\總數(shù)九十一頁\編于二點小鼠胃內給藥目前五十九頁\總數(shù)九十一頁\編于二點家兔胃管給藥目前六十頁\總數(shù)九十一頁\編于二點犬的胃管給藥目前六十一頁\總數(shù)九十一頁\編于二點豬的胃管給藥目前六十二頁\總數(shù)九十一頁\編于二點注射法給藥皮下注射：一般選擇在動物的背部進行皮內注射：局部脫毛消毒后用結核菌素注射器注射肌肉注射：一般選擇肌肉發(fā)達、無大血管的部位，多選臀部腹腔注射：靜脈注射：大、小鼠常采用尾靜脈注射豚鼠采用前肢皮下頭靜脈或后肢股靜脈兔----耳緣靜脈犬-----前肢皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈目前六十三頁\總數(shù)九十一頁\編于二點小鼠尾靜脈給藥目前六十四頁\總數(shù)九十一頁\編于二點小鼠尾靜脈注射方法目前六十五頁\總數(shù)九十一頁\編于二點小鼠皮下注射目前六十六頁\總數(shù)九十一頁\編于二點目前六十七頁\總數(shù)九十一頁\編于二點小鼠腹腔注射目前六十八頁\總數(shù)九十一頁\編于二點兔的靜脈給藥目前六十九頁\總數(shù)九十一頁\編于二點其他給藥途徑呼吸道給藥：粉塵、氣體、蒸汽或霧狀藥物、毒氣等需要呼吸道給藥。皮膚給藥：外用藥物、致敏試驗、局部毒性等實驗需進行皮膚給藥。腦內給藥：微生物學實驗目前七十頁\總數(shù)九十一頁\編于二點動物實驗中藥物劑量的換算

動物實驗所用的藥物劑量一般按毫克/千克體重計算。若無相關資料，一般先用小鼠半數(shù)致死量的1/10－1/5進行嘗試，也可參考其他動物或人的劑量用體表面積之比來換算。一般說來，動物的耐受性比人大，因此單位體重的用藥量比人要大，可按以下比例換算：如人的用藥量為1，小鼠、大鼠為25－50，兔、豚鼠15－20，貓、狗為5－10。目前七十一頁\總數(shù)九十一頁\編于二點動物的采血方法

根據(jù)采血量的不同應選擇不同的采血方法。采血部位及采血量

采血部位

血量（ml）部小鼠大鼠采血前置分尾靜脈0.03-0.050.3-0.5采尾動脈0.1-0.30.5-1.0血眼窩靜脈叢0.05-0.10.5-1.0麻醉（不麻醉也可）目前七十二頁\總數(shù)九十一頁\編于二點實驗動物的采血方法采全血采血部位 采血 量（ml）小鼠大鼠 采血前置頸靜脈0.5~1.03~5麻醉手術頸動脈0.5~1.0麻醉手術斷頭 0.5~1.05~10麻醉（不麻醉也可）心臟0.5~0.83~5麻醉手術后大靜脈0.5~1.02~4麻醉手術腹大動脈5~8麻醉手術目前七十三頁\總數(shù)九十一頁\編于二點采血方法采血部位采血量（ml）采血前處理豚鼠耳動脈（部分）〈0.5耳靜脈（部分）〈0.5心臟（全）5-10全采血時也有麻醉、手術后開胸直接采血家兔耳靜脈（部分）2-5耳動脈（部分）5-15頸動脈（部分）80-120麻醉、手術心臟（全）80-100犬小隱靜脈10-20股動脈30-80目前七十四頁\總數(shù)九十一頁\編于二點小鼠的取血

目前七十五頁\總數(shù)九十一頁\編于二點小鼠眼眶靜脈叢取血方法目前七十六頁\總數(shù)九十一頁\編于二點小鼠眼眶靜脈叢取血方法目前七十七頁\總數(shù)九十一頁\編于二點目前七十八頁\總數(shù)九十一頁\編于二點實驗動物的處死方法

實驗動物的安樂死是指在必需處死動物時，使動物在最短的時間內快速無痛苦的死亡。處死方法:頸椎脫臼：小動物過量麻醉空氣栓塞急性大失血毒氣吸入法：CO2、CO、乙醚等目前七十九頁\總數(shù)九十一頁\編于二點小鼠頸椎脫臼處死法目前八十頁\總數(shù)九十一頁\編于二點

動物實驗報告或論文的寫作方法

一、動物實驗報告的基本格式與要求

動物實驗報告是對實驗目的、內容、方法及實驗結果的描述，是對實驗的總結、評價材料。動物實驗報告一般包括實驗名稱、實驗目的、實驗器材、實驗步驟、實驗結果和實驗結論等。目前八十一頁\總數(shù)九十一頁\編于二點1.實驗名稱：能夠明確表達實驗的內容，使人一看就能明確實驗內容2.實驗目的：實驗目的要直截了當?shù)卣f明為什么要作此實驗，解決什么問題，具有什么意義。目前八十二頁\總數(shù)九十一頁\編于二點

3、

實驗器材：對實驗用的所有儀器、材料的種類、名稱、型號、規(guī)格、數(shù)量等介紹清楚。4、實驗步驟：一般按實驗時間順序，說明實驗的操作過程，是實驗技術問題最集中的部分?？捎眯蛱柫谐雒恳徊讲僮鳎部勺鞑僮髁鞒虉D，總之，實驗步驟應表達詳細，使他人能按表達重復實驗過程。目前八十三頁\總數(shù)九十一頁\編于二點5、實驗結果：實驗結果是在實驗過程產生的現(xiàn)象和數(shù)據(jù)的原始記錄的基礎上，經過科學加工而成的資料。在實驗結束后，應對原始資料進行認真核對，系統(tǒng)分析，對數(shù)據(jù)進行科學的處理，形成的結果，正式寫進實驗報告中。6、實驗結論：實驗結論是是根據(jù)實驗過程觀察到的現(xiàn)象和測得的數(shù)據(jù)等感性材料進行理論上的分析、推理而產生的理性認識的客觀表述。實驗結論不是實驗結果的簡單重復。如果實驗結果不能說明問題，就不能勉強下結論。目前八十四頁\總數(shù)九十一頁\編于二點二.動物實驗論文的撰寫及注意事項

涉及動物實驗的論文撰寫，除了要按照其他實驗性研究論文撰寫的要求外，還有一定的特定要求。主要表現(xiàn)在對實驗動物和動物實驗方面的描述，描述是否規(guī)范一定程度上影響論文的質量。目前八十五頁\總數(shù)九十一頁\編于二點有關動物實驗的描述

與實驗動物或動物實驗有關的學術論文中應記載和描述的主要內容有：標題中實驗動物的種名描述要準確動物的品種（系）表述要正確、書寫要完整動物的來源、遺傳背景等詳細資料要標明對動物的性別、年齡、體重表述要清楚、一致說明動物的飼養(yǎng)方式甚至飼料配方記錄完整的飼養(yǎng)或實驗環(huán)境指標標明實驗動物許可證號（生