蛋白質的性質實驗

關于蛋白質的性質實驗第1頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月

1.加深理解所學有關的蛋白質性質的理論知識

2.掌握氨基酸和蛋白質常用的定性、定量分析的方法及原理

【實驗目的】第2頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月一、蛋白質呈色反應蛋白質的呈色反應是指蛋白質所含的某些氨基酸及其特殊結構，在一定條件下可與某些試劑發(fā)生了生成有色物質的反應。不同蛋白質分子所含的氨基酸殘基不完全相同，因此所發(fā)生的成色反應也不完全一樣。呈色反應并不是蛋白質的專一反應。因此，不能僅僅根據呈色反應的結果為陽性就來判斷被測物質一定是蛋白質，至少要用2種以上的方法來鑒別。第3頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）雙縮脲反應【實驗原理】當尿素經加熱至180℃左右時，兩分子尿素脫去一分子氨，進而縮合成一分子雙縮脲。其在堿性條件下雙縮脲與銅離子結合成紅紫色絡合物，此反應稱為雙縮脲反應。其反應過程如下：第4頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月多肽及蛋白質分子結構中均含有許多肽鍵，其結構與雙縮脲分子中的亞酰胺鍵相同。因此，在堿性條件下與銅離子也能呈現出類似于雙縮脲的呈色反應。其反應過程如下：第5頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月【試劑】蛋白質溶液（雞蛋清用蒸餾水稀釋10倍，通過2-3層紗布濾去不溶物）2.0.1%的甘氨酸溶液3.0.01%精氨酸溶液4.10%NaOH溶液5.1%CuSO4溶液6.尿素結晶第6頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月【實驗流程】雙縮脲的制備少許尿素結晶于干燥試管中微火加熱尿素熔解至硬化停止加熱看到有白色氣體冷卻加10%氫氧化鈉溶液約1ml震蕩加入1%硫酸銅溶液2滴震蕩觀察顏色的變化如圖所示第7頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月注意：(1)尿素結晶不要取多，約火柴頭大小。(2)在操作過程中試管不能沖向他人以防止燙傷。(3)控制加熱的時間既不能過長也不能過短。(4)加熱時火不能太大，防止碳化。(5)銅離子不能多加，否則與氫氧化鈉形成藍色的氫氧化銅，干擾試驗結果。第8頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）茚三酮反應【實驗原理】

在弱酸條件下（pH5-7），蛋白質或氨基酸與茚三酮共熱，可生成藍紫色縮合物。此反應為一切蛋白質和α—氨基酸所共有(亞氨基酸如脯氨酸和羥脯氨酸產生黃色化合物)，含有氨基的其他化合物亦可發(fā)生此反應。第9頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月【試劑】1.蛋白質樣液（與雙縮脲反應相同）2.0.1%的甘氨酸溶液3.0.2%茚三酮溶液第10頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月【實驗流程】取試管2支，分別加入蛋白質樣液及0．1％甘氨酸溶液1ml，然后各加入茚三酮溶液0.5ml，混勻后于沸水浴中加熱數分鐘，觀察顏色變化如圖所示：第11頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）黃色反應【實驗原理】

在蛋白質分子中，具有芳香環(huán)的氨基酸(如酪氨酸，色氨酸等)殘基上的苯環(huán)經硝酸作用可生成黃色的硝基化合物，在堿性條件下生成物可轉變?yōu)榻埸S色的硝醌衍生物,反應為:第12頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月

多數蛋白質分子含有帶苯環(huán)的氨基酸，所以都會發(fā)生黃色反應。苯丙氨酸不易硝化，需加少量濃硫酸后才能夠發(fā)生黃色反應。第13頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月【試劑】1.蛋白質樣液（與雙縮脲反應相同）2.濃硝酸3.20%NaOH4.0.1%石炭酸溶液第14頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月【實驗流程】1.取0.1%石炭酸溶液約1ml放在試管內，加濃硝酸5滴（注意不要弄到手上），水浴加熱，觀察結果如右圖所示：2.取潔凈試管1支，加蛋白質樣液1ml和濃硝酸5滴，出現沉淀，加熱，不必至沸騰，沸騰比較危險，則沉淀變成黃色，待試管冷卻后，向兩管各加20％NaOH溶液使成堿性，觀察顏色變化如圖所示：第15頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月（四）考馬斯亮藍反應【實驗原理】

考馬斯亮藍具有紅色和藍色兩種色調。在酸性溶液中，其以游離態(tài)存在呈棕紅色；當它與蛋白質通過疏水作用結合后變成為藍色。它染色靈敏度高，比氨基黑高3倍。反應速度快，約在2分鐘左右時間達到平衡，在室一小時內穩(wěn)定。在0.01~1.0mg蛋白質范圍內，蛋白質濃度與A595nm值成正比。所以常用來測定蛋白質含量。第16頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月【