結核感染T細胞檢測及意義

關于結核感染T細胞檢測及意義第1頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月2結核病現(xiàn)狀結核病(tuberculosis)是由結核分枝桿菌(tuberclebacillus)引起的一種慢性肉芽腫性炎。以肺結核最常見，死亡人數(shù)僅次于艾滋病。也可見于全身各器官。肺外結核占整個發(fā)病率的10%-20%，死亡率占結核病全部死亡率的14.1%-17.6%。全世界約三分之一的人群感染，《2014年全球結核病報告》顯示：2013年有900萬新發(fā)病例，150萬人死亡。中國是結核病高發(fā)區(qū)，發(fā)病數(shù)居全球第二，現(xiàn)有600萬活動性肺結核，且患者人數(shù)逐年增加，始終位居全國甲乙類傳染病的前列。電鏡下的結核桿菌第2頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月WorldHealthOrganization.Globaltuberculosiscontrol:epidemiology,strategy,financing:WHOreport2011(WHO/HTM/TB/2011.16).Geneva:WHO,20112010年新發(fā)880萬例結核患者，59%在亞洲，26%在非洲第3頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)病人群前五位的國家India(2.0million–2.5million)(26%)China(0.9million–1.2million)SouthAfrica(0.40million–0.59million)Indonesia(0.37million–0.54million)Pakistan(0.33million–0.48million).38%第4頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月結核病現(xiàn)狀及危害-傳播范圍廣第5頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月WorldHealthOrganization.Multidrugandextensivelydrug-resistantTB(M/XDR-TB):2010globalreportonsurveillanceandresponse.

WHO/HTM/TB/2010.3.逐年增加全球27個MDR-TB流行嚴重的國家之一，中國尤其嚴重第6頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月

HIV感染和艾滋病破壞了機體的免疫系統(tǒng)，加劇了結核的發(fā)病，

1/3HIV病人死于結核多菌耐藥的結核菌感染率增加貧困、移民等

細菌學涂片率低，2/3TB病人菌陰性原因第7頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月結核發(fā)病機理LTBI結核分枝桿菌（MTB）暴露感染自愈90%不發(fā)展為結核病Latency2-5%疾病進展1%活動性結核病細菌全部被清除一直存在活菌需預防性服藥不需要預防性服藥Latency潛伏9%復燃注：感染后發(fā)病與否和機體易感性有關！5-10%HIV>10%活動性結核：

發(fā)病狀態(tài)潛伏性結核感染（LTBI）：是宿主感染結核桿菌后尚未發(fā)病的一種特殊狀態(tài)未根治第8頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月結核病的免疫主要是細胞免疫DhedaK,etal.Theimmunologyoftuberculoisis:Frombenchtobeside.Respirogy,2010,15:433-450第9頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月10耗時長4-8周檢出率低50%涂陰檢出低22%-38%肺外結核難結核檢測的方法比較結核診斷X射線分子診斷涂片鏡檢細菌培養(yǎng)特異性差誤診肺炎、肺癌肺外結核難操作復雜技術要求高涂陰檢出低34%肺外結核難不能區(qū)分NTM檢出率低20%肺外結核難假陽/假陰多；（涂陰45%/35%）WHO建議禁用抗體檢測TST（結核菌素皮試）不能區(qū)分卡介苗接種者不能區(qū)分NTM48-72小時復診取樣操作簡便檢出率高（活動結核和潛伏結核）區(qū)分BCG、NTM檢測肺外結核IGRA方法接觸史臨床癥狀病原/病理第10頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月11TB-IGRATuberculosis（結核TB）Interferon（干擾素）Gamma（

γ）Release（釋放）Assay（測定）原理:感染者體內被結核菌（TB）抗原致敏的效應T細胞，在體外受到相同抗原的刺激（在APC輔助下）后，會分泌大量IFN-

γ(細胞因子)。通過IFN-

γ的檢測，判斷結核感染情況。第11頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月contents目錄1.結核病的診斷現(xiàn)狀2.TB-IGRA介紹3.TB-IGRA的臨床應用4.TB-IGRA檢測方法及結果解釋第12頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月APCTcellTB-IGRA方法介紹細胞因子活化/細胞因子細胞因子ELISAELISPOT流式細胞術細胞因子活化標志物IGRAsIFN-greleaseassayTNFaIFNgCK體外刺激：RD1抗原原理:機體內被結核菌抗原致敏的效應T細胞，在體外受到相同抗原的刺激（在APC輔助下）后，會分泌大量IFN-γ(細胞因子)。通過IFN-γ的檢測，判斷結核感染情況。第13頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月兩種TB-IGRA比較高孟秋,劉菲,紀濱英等.兩種γ-干擾素釋放分析在結核病臨床診斷中的比較研究.中華結核和呼吸雜志，2012，35（10）：762-765第14頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月TB-IGRA產(chǎn)品特性高靈敏度，檢出率85%以上高特異性RD1區(qū)編碼的ESAT-6和CFP-10兩個特異性抗原該抗原具有較強的Thl細胞免疫原性，且在所有制備卡介苗的菌株及環(huán)境中絕大多數(shù)非結核分枝桿菌中均不存在該抗原，不受卡介苗和非分支桿菌影響TNFaIFNgCK第15頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月國內外相關研究TB-IGRA快速簡便，是一種值得推廣的檢測方法：張華，黃圣文，羅振元.結核分枝桿菌r-干擾素體外釋放定量試驗診斷結核感染的臨床應用.中華醫(yī)學院感染學雜志2009年第19卷第14期第16頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月國內外相關研究國內文章sensitivity結核分枝桿菌γ-干擾素體外釋放定量試驗診斷結核感染的臨床應用90.24%（74/82）TB-IGRA與TST檢測菌培陽性肺結核患者比較80.3%（118/147)γ-干擾素釋放試驗診斷結核分枝桿菌感染的臨床意義88.64%（39/45）結核分枝桿菌相關γ-干擾素體外釋放試驗在結核病診斷中的應用價值90.7%（243/268）兩種結核分枝桿菌相關γ-干擾素定量檢測試劑盒檢測結核分枝桿菌感染結果比較研究90.9%（290/319）體外釋放酶聯(lián)免疫法檢測結核桿菌γ-干擾素的實驗研究89.11%（90/101）干擾素釋放酶聯(lián)免疫法（TB-IGRA）用于檢測結核分枝桿菌的優(yōu)越性96.12%(99/103)體外γ-干擾素檢測結核分枝桿菌不同方法的應用價值比較90.1%(308/342干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫法在結核潛伏感染診斷中的價值88.6%(39/44)國外同類試劑優(yōu)勢AThree-WayComparisonofTuberculinSkinTesting,QuantiFERON-TBGoldandT-SPOT.TBinChildrenLatentTB檢出高PositiveTuberculinSkinTestorInterferon-GammaReleaseAssayinPatientswithRadiographicLesionsSuggestingOldHealedTuberculosisLatentTB檢出高Estimatingdiagnosticaccuracyoftestsforlatenttuberculosisinfectionwithoutagoldstandardamonghealthcareworkers特異性93.6%ClinicalUtilityofInterferonGammaAssayintheDiagnosisofTuberculosis靈敏度>90%,特異性>97%第17頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月contents目錄1.結核病的診斷現(xiàn)狀2.TB-IGRA介紹3.TB-IGRA的臨床應用4.TB-IGRA檢測方法及結果解釋第18頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月臨床應用案例肺結核輔助診斷：某院呼吸科病人，男臨床癥狀：發(fā)熱1周，咳嗽檢測結果：TB-IgG(-)，TB-IGRA（+）T-N的值是21.5pg/ml結果分析：TB-IgG靈敏度低，易漏檢。臨床診斷：肺結核備注：2011年，WHO建議不再使用結核抗體檢測結核感染第19頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月臨床應用案例肺外結核輔助診斷：某院感染科，女，75歲

臨床癥狀：發(fā)熱數(shù)日，胸痛，干咳檢測結果：X射線胸腔積液影像，積液涂片（-）、積液培養(yǎng)（-）、TB-IGRA

T-N

350pg/ml，積液單核細胞增多，血沉快結果分析：對于肺外結核的診斷，涂片與培養(yǎng)的陽性率極低，TB-IGRA（+），結合其他非特異輔助指標可明確診斷肺外結核。臨床診斷：結核性胸膜炎第20頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月臨床應用案例肺炎與肺結核的鑒別診斷：某醫(yī)院呼吸內科，男，59歲臨床癥狀：肺部有胸水，高燒發(fā)熱，初步認定肺炎，抗生素治療1周不見效果，高度懷疑結核。檢測結果：痰涂片（-），結核抗體（-），TB-IGRA（-）結果分析：傳統(tǒng)結核檢測檢出率在20%-40%，靈敏度低。IGRA檢出率在90％以上，陰性排除意義高于涂片和抗體?；颊呃^續(xù)用藥3周，病情好轉。臨床診斷：肺炎第21頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月22MTB與其他桿菌感染的鑒別診斷：某院呼吸內科病人，男臨床癥狀：發(fā)熱、咳嗽、咳痰、呼吸困難，乏力，多汗，關節(jié)疼痛檢測結果：痰涂片（-），菌培（-），肺部X射線可見肺結節(jié)，胸腔積液診斷過程：該院診斷為結核但治療無好轉，患者轉院檢測IGRAs（-），試管凝集實驗++，布病抗體++，確診布氏桿菌感染，與該院打官司勝訴。結果分析：由于痰涂片和菌培檢出率低，陰性也未能引起重視，只憑X片和癥狀診斷為結核并治療。治療無效后，病人轉院，檢測IGRAs陰性，考慮排除結核，且病人為牧民，確診布氏桿菌病。官司敗訴后，該院才開始重視IGRAs檢測。最終確診：布氏桿菌病臨床應用案例第22頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月MTB與NTM的鑒別診斷：某院感染科病人，男臨床癥狀：發(fā)熱1周，咳嗽，少量痰檢測結果：兩次痰涂片（+），兩次TB-IGRA（-），肺部X射線無異常，后經(jīng)菌培鑒定為菌培（-）結果分析：痰涂片不能區(qū)分非結核分枝桿菌，造成假陽性，而TB-IGRA與菌培結果相符，對結核分枝桿菌有很好的特異性。臨床診斷：鳥型分枝桿菌感染臨床應用案例第23頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月NTM（非結核分枝桿菌）比例增高2000年全國流調分離的抗酸桿菌菌株中，NTM菌株占11.1%，其中90%為非結核分枝桿菌肺病。NTM肺病的臨床表現(xiàn)與結核病相似，

既可有全身中毒癥狀，亦有局部損害表現(xiàn)。但癥狀和體征缺乏特異性，20%-50%的病人無明顯癥狀，除非做菌型鑒定，憑臨床表現(xiàn)難與肺結核病相鑒別。PPD試驗：弱陽性多見，但不能鑒別MTB和NTM感染。

細菌學檢查：常規(guī)痰涂片無法鑒別MTB和NTM。培養(yǎng)特性：固體培養(yǎng)基上，NTM菌落常光滑，部分菌落有色素產(chǎn)生，生長迅速，且在含PNB(對硝基苯甲酸)和含TCH(噻吩二羧酸肼)選擇性培養(yǎng)基上均可生長，而結核分枝桿菌只在TCH選擇性培養(yǎng)基上生長。第24頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月06.16.201125

使用抗TNF藥物前排查結核的意義發(fā)病率/100.000患者/年DixonWGetal.AnnRheumDis2010;69:522–528.Tubachetal.Arthritis&Rheum2009;60:1884-1894發(fā)病率/100.000患者/年第25頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月潛伏性感染監(jiān)控某中學高三年級小規(guī)模結核爆發(fā)初始病例1例（7班）6月初第一批疫情5例（7班）8-9月第二批疫情10例（8例7班）9月對師生采血進行IGRA檢測IGRA陽性者進行預防性服藥疫情控制自行住院全年級師生胸透，胸透陰影預防性服藥全年級師生PPD試驗疫情發(fā)展階段結核病例及分布疫情時間疫情初處理√一起小規(guī)模結核暴發(fā)流行的調查與控制×第26頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月潛伏性感染、抗結核治療監(jiān)控定量檢測γ干擾素釋放強度，可用于持續(xù)監(jiān)控：第27頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月抗結核治療效果輔助評估Kobashi等利用IGRA對50例結核患者的治療進行追蹤檢測：治療開始后，結核患者中IGRA的敏感性和反應強度均有明顯的下降趨勢第28頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月綜上，TB-IGRA：高特異性，高靈敏性，體外，全血，定量檢測應用方向：肺結核輔助診斷肺外結核輔助診斷結核感染排查潛伏性感染監(jiān)控，抗結核治療追蹤TB-IGRA的臨床應用第29頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月TB-IGRA應用匯總肺結核的輔助診斷，尤其是細菌學檢測陰性的肺結核的輔助診斷：TB-IGRA從細胞水平上檢測結核感染，檢出率高，早期感染即可檢出，實現(xiàn)早診斷早治療。肺外結核的輔助診斷：TB-IGRA取靜脈血進行檢測，克服肺外結核患者痰樣找不到結核菌，病灶部位取樣難的問題。呼吸系統(tǒng)疾病與結核的鑒別診斷：發(fā)熱、咳嗽、咳痰>2周；咯血；胸痛等癥狀疑似結核，胸片/CT不能明確診斷者；抗炎治療治療效果不佳患者的結核排查，陰性結果在很大程度上可以排除結核。第30頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月2周以上不明原因發(fā)熱病人的結核感染排查：有研究發(fā)現(xiàn)其中20%是結核引起的，大部分是肺外結核。高危人群的結核感染篩查：如使用生物制劑/免疫抑制劑、大劑量激素患者，HIV患者，糖尿病患者，血液病和癌癥放化療之前患者進行結核篩查，以防陳舊性結核、潛伏性結核爆發(fā)以及近期結核感染?？菇Y核治療效果跟蹤以及潛伏性結核定期監(jiān)控：TB-IGRA結果是一個定量值，活動性結核患者隨治療進行陽性強度降低甚至轉陰；潛伏感染患者若發(fā)生陽性強度明顯升高，有發(fā)展成活動性結核風險。流調顯示有85%～90%新診斷的活動性肺結核由潛伏性結核演變而來。第31頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月已有25個國家發(fā)布了IGRAs應用指南：

美國、加拿大、英國、巴西、法國、西班牙、意大利、德國、澳大利亞、葡萄牙、愛爾蘭、瑞士、丹麥、挪威、芬蘭、捷克、斯洛伐克、波蘭、保加利亞、克羅地亞、沙特、奧地利、南韓、日本、中國

潛伏性感染和活動性結核的輔助診斷（美國CDC，英國NICE，中國）

疑似結核的輔助診斷，陰性結果排除感染（中國）在所有人群中可以完全代替PPD試驗（美國CDC，日本厚生省）

接受抗TNF-a治療前必須用IGRA進行結核桿菌感染的篩查，PPD篩查不再使用（瑞士衛(wèi)生署和肺科協(xié)會）

兩個國際組織WHO、ECDC也發(fā)布了應用指南。萬泰TB-IGRA試劑是“中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準—結核分枝桿菌γ-干擾素體外檢測方法”中唯一提到的結核檢測試劑。第32頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月第33頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月contents目錄1.結核病的診斷現(xiàn)狀2.TB-IGRA產(chǎn)品介紹3.TB-IGRA的臨床應用4.TB-IGRA檢測方法及結果解釋第34頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月萬泰TB-IGRA北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司國家傳染病診斷試劑與疫苗工程技術研究中心廈門大學研制歷經(jīng)6年，2012年4月獲得SFDA認證國食藥監(jiān)械（準）字2012第3400557號第35頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月TB-IGRA檢測方法第36頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月陰性對照管N陽性對照管P檢測管T培養(yǎng)液無刺激原培養(yǎng)液刺激抗原培養(yǎng)液PHATB特異性刺激抗原（RD1區(qū)：ESAT-6、CFP-10）無刺激效應非特異性刺激抗原（PHA）評估γ-IFN升高水平評估γ-IFN本底水平評估T淋巴細胞活性ELISA定量分析第37頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月TB-IGRA結果判定T：測試培養(yǎng)管（T）含量值N：本底對照培養(yǎng)管（N）含量值P：陽性對照培養(yǎng)管（P）含量值

NP-NT-N結果判定結果解釋≤400任何值≥14且≥N/4陽性感染結核分枝桿菌（結核活動期感染、潛伏感染）≥20<14或<N/4陰性未感染結核分枝桿菌<20<14或<N/4不確定不能確定是否感染結核分枝桿菌>400任何值任何值不確定第38頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月TB-IGRA結果判定第39頁，課件共46頁，創(chuàng)作于2023年2月全自動酶免平臺系統(tǒng)第40頁，課件共46頁