高效液相色譜儀2

高效液相色譜儀演示文稿目前一頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)高效液相色譜儀目前二頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)一、高效液相色譜儀Agilent1100目前三頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)Waters2487目前四頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)借助氣相色譜的理論演變二、高效液相色譜法的特點(diǎn)經(jīng)典的柱色譜高效液相色譜的模塊目前五頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)20世紀(jì)70年代后發(fā)展迅速，它在技術(shù)上采用高壓泵，高效固定相和高靈敏度的檢測(cè)器，實(shí)現(xiàn)了分析速度快，分離效率高和操作自動(dòng)化。特點(diǎn)：高壓、高效、高速分離對(duì)象：適用高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣分離分析（與GC區(qū)分）目前六頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)三、流程及主要部件流程目前七頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)2.主要部件

(1)高壓輸液泵單元泵雙元泵目前八頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)

高壓泵作用：輸送流動(dòng)相。也即是貯液瓶中的有機(jī)溶劑或緩沖溶液靠高壓泵送入色譜柱。由于色譜柱的阻力很大，高壓泵必須克服阻力以恒定流速輸送流動(dòng)相，這是保證色譜儀精確度的前提。

常用的壓力范圍：150～350×105Pa歐美等國(guó)家習(xí)慣使用psi作單位

PSI英文全稱為Poundspersquareinch。定義為英鎊/平方英寸，它們之間的換算關(guān)系為：1bar≈14.5psi=105Pa，

145psi=1Mpa

1psi=6.895kPa=0.06895bar目前九頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)高壓泵應(yīng)具有以下性能流量穩(wěn)定，精度在1%左右輸出壓力高，通常20~30MPa，最高50MPa流量范圍寬，一般在0.01~10mL/min范圍內(nèi)能抗溶劑腐蝕壓力波動(dòng)小、更換溶劑方便、容易清洗、具梯度洗脫操作方便、容易維修

目前十頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)根據(jù)泵的操作原理不同，分為恒壓泵和恒流泵

氣動(dòng)放大泵（恒壓泵）

往復(fù)泵（恒流泵）是目前液相色譜使用最普遍的一種高壓泵。其中又分單頭往復(fù)泵和雙頭往復(fù)泵。往復(fù)泵的優(yōu)點(diǎn)是泵頭內(nèi)腔體積小，容易洗凈，故更換溶劑十分方便，尤其適合做色譜條件試驗(yàn)時(shí)使用。

氣動(dòng)放大泵往復(fù)柱塞泵目前十一頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)(2)進(jìn)樣裝置

手動(dòng)進(jìn)樣閥通常使用耐高壓的六通閥(美國(guó)Rheodyne公司專利技術(shù))，其結(jié)構(gòu)如圖所示：

進(jìn)樣裝置（正面）

進(jìn)樣裝置（背面）目前十二頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)圖中a為進(jìn)樣閥處于“裝樣load”位置的情況，此時(shí)流動(dòng)相直接進(jìn)入色譜柱，樣品注入口與樣品環(huán)連接，用微量進(jìn)樣針將一定體積的樣品溶液從樣品注入口注入，裝于樣品管內(nèi)。當(dāng)將扳手扳至“進(jìn)樣inject”位時(shí)，進(jìn)樣閥的流路發(fā)生了改變，流動(dòng)相通過(guò)樣品管，將注入的樣品帶入色譜柱進(jìn)行分析。六通進(jìn)樣閥具有使用方便，進(jìn)樣量準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。目前十三頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)

樣品環(huán)(Loop)規(guī)格：有10μL、20μL、50μL等不同容積，可以根據(jù)需要選配。作用：用來(lái)貯液，也用來(lái)測(cè)量樣品溶液的體積。將樣品環(huán)裝滿后進(jìn)樣，進(jìn)樣量即為樣品環(huán)的容積，此種進(jìn)樣方式稱為“滿環(huán)進(jìn)樣”或“定量環(huán)進(jìn)樣”。用定量環(huán)進(jìn)樣精密度好，在使用外標(biāo)法時(shí)，應(yīng)使用此種操作方式。

目前十四頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)自動(dòng)進(jìn)樣器目前十五頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)

色譜柱是高效液相色譜的心臟，在HPLC的使用中，保持色譜柱的柱效，延長(zhǎng)柱子的使用壽命非常重要。

（3）色譜柱色譜柱流速方向色譜柱的參數(shù)目前十六頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)色譜柱（Column）結(jié)構(gòu)：柱管多用不銹鋼制成，色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板，目的是防止填料漏出。填料：多以硅膠為基質(zhì)，適用PH2～8粒度多為0.2～20μm(以5～10μm居多)。

發(fā)展趨勢(shì)是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。

規(guī)格：常規(guī)分析柱(常量柱)內(nèi)徑2～5mm(常用4.6mm，3.9mm)，柱長(zhǎng)10～30cm(15cm，25cm居多）制備柱（21.2mm、30mm、50mm）半制備柱（〉5mm，7.8mm、9.8mm、10mm）目前十七頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)C18柱（C8柱）主要是由于修飾到硅膠上的硅烷化試劑不同。C8是修飾的帶8個(gè)碳原子的硅烷，C18是修飾的帶18個(gè)碳原子的硅烷。C18較C8極性小，C18更適合分析中等到小極性的化合物，C8更適合中等偏大極性化合物。目前十八頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)C18柱（C8柱）性能影響因素物理性質(zhì)硅膠純度色譜柱尺寸顆粒形狀粒徑表面積孔徑鍵合類(lèi)型碳覆蓋率封端化學(xué)性質(zhì)目前十九頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)正相柱：固定相通常為硅膠以及其他具有極性官能團(tuán)，如胺基(NH2)和氰基(CN)的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其他極性基團(tuán)極性較強(qiáng)，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小，即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱；正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對(duì)比固定相低，如正已烷、氯仿、二氯甲烷等。

反相柱：固定相通常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對(duì)較弱官能團(tuán)的鍵合相。反向色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖液與甲醇，乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分最先被沖洗出，而極性弱的組分會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。正相柱和反相柱目前二十頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)

預(yù)柱和保護(hù)柱從泵來(lái)的流動(dòng)相預(yù)柱進(jìn)樣口保護(hù)柱分析柱檢測(cè)器預(yù)柱是針對(duì)流動(dòng)相來(lái)保護(hù)色譜柱保護(hù)柱是針對(duì)樣品來(lái)保護(hù)色譜柱precolumn——預(yù)柱，guardcolumn——保護(hù)柱

安裝位置不同：預(yù)柱是泵后進(jìn)樣口前，途經(jīng)流動(dòng)相；保護(hù)柱是進(jìn)樣口后分析柱前，途經(jīng)樣品和流動(dòng)相。

作用不同：預(yù)柱則只能起到過(guò)濾顆粒物作用，防止顆粒物堵塞色譜柱篩板引起柱壓升高。保護(hù)柱除了可以過(guò)濾顆粒物外，因?yàn)閹?厘米長(zhǎng)的填料，強(qiáng)保留物質(zhì)就先留在保護(hù)柱的柱芯填料里面，這樣可以避免色譜柱被強(qiáng)保留物質(zhì)污染。目前二十一頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)

(4)液相色譜檢測(cè)器分類(lèi)

按檢測(cè)原理：光學(xué)檢測(cè)器（如紫外、熒光、示差折光、蒸發(fā)光散射）熱學(xué)檢測(cè)器(如吸附熱）電化學(xué)學(xué)檢測(cè)器（如庫(kù)倫、安培）電學(xué)檢測(cè)器（電導(dǎo)、介電常數(shù)）按測(cè)量性質(zhì)：通用型檢測(cè)器（如示差折光、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器）專屬型檢測(cè)器（如紫外、熒光檢測(cè)器）按檢測(cè)方式：濃度型檢測(cè)器質(zhì)量型檢測(cè)器著重介紹四種檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器（光電二極管陣列檢測(cè)器）、示差折光檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器目前二十二頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)工作原理：基于朗伯-比爾定律。即用特定波長(zhǎng)的紫外光照射樣品池，通過(guò)檢測(cè)透光率的變化來(lái)測(cè)定樣品濃度的檢測(cè)器。它具有波長(zhǎng)固定，波長(zhǎng)可變和光電二極管陣列三種類(lèi)型。紫外檢測(cè)器(UVD)：應(yīng)用最廣泛的選擇性檢測(cè)器。

雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器2487目前二十三頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)特點(diǎn)：選擇性檢測(cè)器，靈敏度較高（10-9g），噪音低。線性范圍寬，對(duì)流速和溫度波動(dòng)不靈敏，適用于梯度洗脫。光電二極管檢測(cè)器（PDA）缺點(diǎn)：只能檢測(cè)有紫外吸收的物質(zhì)。而且對(duì)流動(dòng)相也有一定的限制，即流動(dòng)相的截止波長(zhǎng)應(yīng)小于檢測(cè)波長(zhǎng)。目前二十四頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)溶劑UV截止波長(zhǎng)（nm）乙腈190水190環(huán)己烷195己烷200甲醇210乙醇210乙醚220二氯甲烷220氯仿240四氯化碳265四氫呋喃280（220）甲苯285在使用紫外檢測(cè)器時(shí)，檢測(cè)波長(zhǎng)與所用溶劑的截止波長(zhǎng)接近（或低于截止波長(zhǎng)）時(shí)，容易產(chǎn)生噪音干擾，從而影響檢測(cè)結(jié)果。所以在使用紫外檢測(cè)器時(shí)，檢測(cè)波長(zhǎng)應(yīng)至少比所用溶劑的截止波長(zhǎng)大20nm以上。截止波長(zhǎng)目前二十五頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)

原理：監(jiān)測(cè)參比池和測(cè)量池中溶液的折射率之差來(lái)測(cè)量試樣濃度的檢測(cè)器。特點(diǎn)：通用性檢測(cè)器；對(duì)溫度變化比較敏感，要保持在±0.001℃（需配柱溫箱使用）；靈敏度低(10-6g)；不能用于梯度洗脫。b.示差折光檢測(cè)器(RID)目前二十六頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)

原理:利用某些溶質(zhì)在紫外光激發(fā)后能發(fā)射可見(jiàn)光(熒光)的性質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。許多藥物和生命活性物質(zhì)(多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類(lèi)化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、甾類(lèi)化合物等)具有天然熒光，能直接檢測(cè)。

c.熒光檢測(cè)器(FLD)目前二十七頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)特點(diǎn):選擇性檢測(cè)器，靈敏度比紫外檢測(cè)器高2-3個(gè)數(shù)量級(jí)，可達(dá)到10-12g；選擇性好，對(duì)流量和溫度敏感性低。缺點(diǎn)：只適合于能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)的檢測(cè)。

通過(guò)熒光衍生化可以使本來(lái)沒(méi)有熒光的化合物轉(zhuǎn)變成熒光衍生物，從而擴(kuò)大了熒光檢測(cè)器的應(yīng)用范圍。目前二十八頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)工作原理:通過(guò)檢測(cè)光散射程度而測(cè)定溶質(zhì)濃度的檢測(cè)器。色譜柱后流出物在通向檢測(cè)器途中，被高速載氣(氮?dú)?噴成霧狀液滴，再進(jìn)入蒸發(fā)漂移管中，流動(dòng)相不斷蒸發(fā)，含溶質(zhì)的霧狀液滴形成不揮發(fā)的微小顆粒，被載氣載帶通過(guò)檢測(cè)器。在檢測(cè)器中，光被散射的程度取決于溶質(zhì)顆粒的大小與數(shù)量。d.蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(evaporativelight-scattingdetector,ELSD)目前二十九頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)適用范圍：適用檢測(cè)揮發(fā)性低于流動(dòng)相的組分，主要用于檢測(cè)糖類(lèi)，高級(jí)脂肪酸，磷脂，維生素，氨基酸，甘油三酯及甾體等。特點(diǎn)：通用型檢測(cè)器，對(duì)各物質(zhì)有幾乎相同的響應(yīng)。消除溶劑的干擾，不受溫度變化影響，靈敏度比較低（尤其對(duì)有紫外吸收的組分）流動(dòng)相必須是揮發(fā)性的，不能含有緩沖鹽等。目前三十頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)四、液相色譜的流動(dòng)相流動(dòng)相特性液相色譜的流動(dòng)相又稱為：淋洗液，洗脫劑。流動(dòng)相組成改變，極性改變，可顯著改變各組分分離狀況。親水性固定液常采用疏水性流動(dòng)相，即流動(dòng)相的極性小于固定相的極性，稱為正相液液色譜法，極性柱也稱正相柱。若流動(dòng)相的極性大于固定液的極性，則稱為反相液液色譜，非極性柱也稱為反相柱。組分在兩種類(lèi)型分離柱上的出峰順序相反。

目前三十一頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)2.流動(dòng)相類(lèi)別按流動(dòng)相組成成分：?jiǎn)谓M分和多組分；

按極性分：極性、弱極性、非極性；

按使用方式分：固定組成淋洗和梯度淋洗。

常用溶劑：正己烷、四氫呋喃、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、異丙醇、乙腈、水。采用二元或多元組合溶劑作為流動(dòng)相可以靈活調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性或增加選擇性，以改進(jìn)分離或調(diào)整出峰時(shí)間。目前三十二頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)

在選擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。

采用正相液-液分配分離時(shí)：首先選擇中等極性溶劑，若組分的保留時(shí)間短，降低溶劑極性，反之增加。也可在低極性溶劑中，逐漸增加其中的極性溶劑，使保留時(shí)間縮短。

常用溶劑的極性順序：

水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六環(huán)>四氫呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>異丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>環(huán)己烷>己烷>煤油(最小)3.流動(dòng)相選擇

目前三十三頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)4.

選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。流動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外，如配位色譜等)流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便降低柱壓，延長(zhǎng)色譜柱使用的壽命避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。

目前三十四頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器，最好使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法正常進(jìn)行。在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。盡量使用高純度試劑作流動(dòng)相，防止微量雜質(zhì)長(zhǎng)期累積損壞色譜柱和使檢測(cè)器噪聲增加。目前三十五頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)

溶劑和樣品過(guò)濾非常重要，它會(huì)對(duì)色譜柱、儀器起到作用，消除由于污染對(duì)分析結(jié)果的影響。對(duì)色譜柱：由于填料顆粒很細(xì)，色譜柱內(nèi)腔很小，溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)使色譜柱和毛細(xì)管容易堵塞。對(duì)儀器：溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)增加進(jìn)樣閥的堵塞和磨損，同時(shí)也會(huì)增加泵頭內(nèi)的藍(lán)寶石活塞桿和活塞的磨損。5.流動(dòng)相過(guò)濾

流動(dòng)相在混合前分別濾過(guò)，特別要注意分清有機(jī)相濾膜和水相濾膜。有機(jī)相濾膜一般用于過(guò)濾有機(jī)溶劑，過(guò)濾水溶液時(shí)流速低或?yàn)V不動(dòng)。水相濾膜只能用于過(guò)濾水溶液，嚴(yán)禁用于有機(jī)溶劑，否則濾膜會(huì)被溶解！溶有濾膜的溶劑不得用于HPLC。

目前三十六頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)流動(dòng)相脫氣的目的使色譜泵的輸液準(zhǔn)確輸液均勻準(zhǔn)確，并且脈動(dòng)減小保留時(shí)間及色譜峰面積的重現(xiàn)性提高提高檢測(cè)的性能防止氣泡引起的尖峰基線穩(wěn)定，信噪比增加溶劑的紫外吸收本底降低保護(hù)色譜柱減少死體積防止填料的氧化6.流動(dòng)相的脫氣目前三十七頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)常用的脫氣方法

氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。加熱回流法：效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染。抽真空脫氣法：易抽走有機(jī)相。超聲脫氣法：流動(dòng)相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩10-15min。在線真空脫氣法（實(shí)時(shí)在線脫氣，效果好）目前三十八頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)五、HPLC應(yīng)用1.分析方法如何建立？色譜柱和檢測(cè)器的選擇

根據(jù)被分離物質(zhì)性質(zhì)選擇；參考文獻(xiàn)類(lèi)似物質(zhì)疏水性的樣品——反相鍵合色譜；親水性的樣品——正相鍵合色譜；流動(dòng)相組成,配比,流量,梯度洗脫的選擇

根據(jù)分析樣品的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)，并查閱相關(guān)文獻(xiàn)確定流動(dòng)相組成。為達(dá)到較好的分離效果，確定流動(dòng)相配比。當(dāng)樣品中溶質(zhì)組分較多及不同溶質(zhì)的性質(zhì)差別較大時(shí)，考慮梯度洗脫。當(dāng)分析弱酸，弱堿性化合物時(shí)，可通過(guò)采用緩沖溶液及加醋酸、三乙胺等調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值來(lái)改善峰型。目前三十九頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)樣品組分保留值和容量因子的選擇分析時(shí)間最好控制在10～30min容量因子控制在1～10；對(duì)于容量因子范圍較寬的通常使用梯度洗脫技術(shù)。相鄰組分分離度的要求：對(duì)于難分離的樣品，要求分離度R≥1.0樣品分析方法流動(dòng)相的準(zhǔn)備過(guò)濾：用孔徑為0.22μm（0.45μm)濾膜過(guò)濾除去固體顆粒雜質(zhì)。

脫氣：超聲脫氣，吹氦脫氣，抽真空脫氣法，在線真空脫氣法樣品的準(zhǔn)備

稱量，用流動(dòng)相超聲溶解，過(guò)濾或高速離心目前四十頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)2.應(yīng)用領(lǐng)域目前，HPLC在有機(jī)化學(xué)、生化、醫(yī)學(xué)、藥物臨床、化工、食品衛(wèi)生、環(huán)保監(jiān)測(cè)、商檢和法檢等方面都有廣泛的用途，而在生物和高分子試樣的分離和分析中更是有明顯優(yōu)勢(shì)。在目前已知的有機(jī)化合物中，若事先不進(jìn)行化學(xué)改性，只有20％的化合物用氣相色譜法可以得到較好的分離，而80％的有機(jī)化合物需HPLC分析。因此，HPLC具有非常廣闊的應(yīng)用前景。

目前四十一頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)作為人工合成藥物的精制手段，用于除去少量雜質(zhì)(手性色譜柱以及配位色譜法)從一些復(fù)雜的混合物中排除干擾物質(zhì)，并分析其中微量成分中草藥有效成分的制備和分析環(huán)境監(jiān)測(cè)和污染物的分析食品中營(yíng)養(yǎng)成分和物質(zhì)的分析手性分離技術(shù)目前已成為高效液相色譜十分重要和熱門(mén)的應(yīng)用領(lǐng)域目前四十二頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)例1.環(huán)境中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量分析

固定相：薄殼型硅膠(37～50m)流動(dòng)相：正己烷流速：1.5mL/min色譜柱：50cm2.5mm(內(nèi)徑)檢測(cè)器：差示折光檢測(cè)器

可對(duì)水果、蔬菜中的農(nóng)藥殘留量進(jìn)行分析。目前四十三頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)例2．稠環(huán)芳烴的分析固定相：十八烷基硅烷化鍵合相流動(dòng)相：20%甲醇-水～100%甲醇線性梯度淋洗，2%/min流速：1mL/min柱溫：50oC柱壓：7105Pa

檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器稠環(huán)芳烴多為致癌物質(zhì)。目前四十四頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)六、儀器保養(yǎng)（1）手柄處于Load和Inject之間時(shí)，由于暫時(shí)堵住了流路，流路中壓力驟增，再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位，過(guò)高的壓力引起柱頭損壞，所以應(yīng)盡快轉(zhuǎn)動(dòng)閥，不能停留在中途。（2）在HPLC系統(tǒng)中使用的注射器針頭有別于氣相色譜，是平頭注射器。一方面，針頭外側(cè)緊貼進(jìn)樣器密封管內(nèi)側(cè)，密封性能好，不漏液，不引入空氣；另一方面，也防止了針頭刺壞密封組件及定子。1.六通閥進(jìn)樣器的保養(yǎng)目前四十五頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)（3）使用定量環(huán)的定量：六通閥進(jìn)樣器的進(jìn)樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。使用部分裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量最多為定量環(huán)體積的75%，如20μL的定量環(huán)最多進(jìn)樣15μL的樣品，并且要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同；使用完全裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量最少為定量環(huán)體積的3至5倍，即20μL的定量環(huán)最少進(jìn)樣60至100μL的樣品，這樣才能完全置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液，達(dá)到所要求的精密度及重現(xiàn)性。目前四十六頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)（4）進(jìn)樣樣品要求無(wú)微粒和能阻死針頭及進(jìn)樣閥的物質(zhì)，樣品溶液均要用0.45μm(0.22μm)

的濾膜過(guò)濾。防止微粒阻塞進(jìn)樣閥和減少對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。為防止緩沖鹽和其它殘留物質(zhì)留在進(jìn)樣系統(tǒng)中，每次結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣器，通常用不含鹽的稀釋劑、水或不含鹽的流動(dòng)相沖洗，在進(jìn)樣閥的Load和Inject位置反復(fù)沖洗，再用無(wú)纖維紙擦凈注射器針頭的外側(cè)。目前四十七頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編于十三點(diǎn)（1）色譜柱的平衡

反相色譜柱在經(jīng)過(guò)出廠測(cè)試后是保存在乙腈/水中的。一定確保所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶。由于色譜柱在儲(chǔ)存或運(yùn)輸過(guò)程中可能會(huì)干掉，因此在用流動(dòng)相分析樣品之前，應(yīng)使用10～20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果您所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水“過(guò)渡”。切忌直接用甲醇置換緩沖液

2.色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)目前四十八頁(yè)\總數(shù)五十二頁(yè)\編