微生物方法學(xué)驗(yàn)證范本

編碼：VP-C01-MM-01XXXX軟膏微生物限度檢查

方法學(xué)驗(yàn)證方案起草人：年 月日TOC\o"1-5"\h\z審核人：年 月 日年 月 日年 月 日批準(zhǔn)人：年 月 日目錄.驗(yàn)證立項(xiàng)表.驗(yàn)證內(nèi)容驗(yàn)證目的驗(yàn)證范圍驗(yàn)證要求驗(yàn)證方法.試驗(yàn)原料、稀釋劑和標(biāo)準(zhǔn)微生物細(xì)菌、霉菌及酵母菌驗(yàn)證內(nèi)容金黃色葡萄球菌驗(yàn)證內(nèi)容銅綠假單胞菌驗(yàn)證內(nèi)容.驗(yàn)證報(bào)告驗(yàn)證立項(xiàng)表（REC）立項(xiàng)題目立項(xiàng)部門申請(qǐng)人

申請(qǐng)日期要求完成日期驗(yàn)證類別負(fù)責(zé)部門參與部門及人員驗(yàn)證原因質(zhì)量部審核意見審核人： 日期：驗(yàn)證領(lǐng)導(dǎo)小組審批意見審批人： 日期：備注XXXX軟膏微生物限度檢查方法學(xué)驗(yàn)證方案編碼：VP-C01-MM-01品名驗(yàn)證依據(jù)2005版藥典規(guī)格驗(yàn)證日期年月日數(shù)量報(bào)告日期年月日驗(yàn)證項(xiàng)目細(xì)菌、霉菌及酵母菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌.驗(yàn)證目的XXXX軟膏配方中含水楊酸、硼酸，該兩種物質(zhì)具有一定的抑菌性。根據(jù)《中國(guó)藥典》（2005年版）微生物限度檢查標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，對(duì)XXXX軟膏進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌檢查方法的驗(yàn)證試驗(yàn)，以確認(rèn)供試品的抑菌活性及測(cè)定方法的可靠性。.驗(yàn)證范圍本公司XXXX軟膏的微生物限度檢測(cè)。.判定標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證小組成員姓名職務(wù)職責(zé)組長(zhǎng)負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案、報(bào)告的批準(zhǔn)項(xiàng)目負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案、報(bào)告的起草與具體實(shí)施驗(yàn)證小組成員負(fù)責(zé)驗(yàn)證試驗(yàn)及填寫記錄細(xì)菌、霉菌及酵母菌在3次平行試驗(yàn)中，稀釋劑對(duì)照組的菌回收率（稀釋劑對(duì)照組的平均菌落數(shù)占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）應(yīng)均不低于70%，試驗(yàn)組的菌回收率（試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)的值占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）均不低于70%；產(chǎn)品的試驗(yàn)組與陽(yáng)性菌組的菌落數(shù)差異不超過30%,假定產(chǎn)品試驗(yàn)組的平均值與陽(yáng)性菌組的平均值之比為Q,則0.7WQW1.3。金黃色葡萄球菌在3次平行試驗(yàn)中，供試品組：結(jié)果應(yīng)為陰性，未檢出金黃色葡萄球菌；試驗(yàn)組：結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性，檢出金黃色葡萄球菌；陰性對(duì)照組：結(jié)果應(yīng)為陰性，未檢出陰性對(duì)照菌；陽(yáng)性對(duì)照組：結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性，檢出金黃色葡萄球菌。銅綠假單胞菌在3次平行試驗(yàn)中，供試品組：結(jié)果應(yīng)為陰性，未檢出銅綠假單胞菌；試驗(yàn)組：結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性，檢出銅綠假單胞菌；陰性對(duì)照組：結(jié)果應(yīng)為陰性，未檢出陰性對(duì)照菌；陽(yáng)性對(duì)照組：結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性，檢出銅綠假單胞菌。.驗(yàn)證方法試驗(yàn)原料、稀釋劑和標(biāo)準(zhǔn)微生物試驗(yàn)樣品：XXXX軟膏三批，批號(hào)為、、。稀釋劑：PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液。配法：照（05版藥典附錄XIIIC）配制；0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液的配制：取氯化鈉9.0g,加1000ml使完全溶解，分裝，滅菌。實(shí)驗(yàn)儀器：無(wú)菌培養(yǎng)皿（直徑9.0cm）、凈化室、滅菌鍋、無(wú)菌刻度吸管（10ml、1ml）,水浴鍋，試管（18X180），具塞三角瓶。驗(yàn)證用培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、澳化十六烷基三甲銨培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉培養(yǎng)基。4.1.5驗(yàn)證用微生物名稱及編號(hào)菌珠名稱傳代次數(shù)大腸埃希菌MCC（B）44102金黃色葡萄球菌CMCC（B）26003枯草芽抱桿菌CMCC（B）63501白色念珠菌霉CMCC（F）98001菌液制備接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)18?24小時(shí)；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24?48小時(shí)；上述培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為50?100cfu的菌懸液。供試品溶液的制備 稱取XXXX軟膏10g,置滅菌三角瓶中，加入PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml,45℃下使之全部溶化，搖勻，作為1：10的供試品溶液。4.2細(xì)菌、霉菌及酵母菌驗(yàn)證內(nèi)容試驗(yàn)組：分別取1:10供試品溶液0.2ml注入兩個(gè)平皿，接種50-100個(gè)挑戰(zhàn)微生物，每株試驗(yàn)菌平兩行制備兩個(gè)平皿（分別注入以上四種菌懸液），向平皿內(nèi)倒冷卻至45℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（細(xì)菌）或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（白色念珠菌霉）15?20ml：并混合均勻凝固后，置于所需溫度下培養(yǎng)。2菌液組：不加供試液，直接將試驗(yàn)菌株接種于2個(gè)平皿中，其余操作步驟同樣品試驗(yàn)組操作。供試品對(duì)照組：取1:10供試品溶液0.2ml分別注入兩個(gè)平皿，向平皿內(nèi)倒冷卻到45℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（細(xì)菌）或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（白色念珠菌霉）15?20ml,并混合均勻凝固后，置于所需溫度下培養(yǎng)。上述操作，應(yīng)做三次平行試驗(yàn)，分別計(jì)算各次試驗(yàn)的菌的回收率。試驗(yàn)組的菌回收率二［（試驗(yàn)組平均菌落數(shù)一供試品對(duì)照組平均菌落數(shù)）/菌液組平均菌落數(shù)］義100%。培養(yǎng)：營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平皿倒置于30-35℃下培養(yǎng)48h,玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基倒置于23-27℃下培養(yǎng)72h。觀察和計(jì)數(shù)：對(duì)每個(gè)平皿逐日檢查計(jì)數(shù)，結(jié)果以培養(yǎng)終至的計(jì)數(shù)為準(zhǔn)，并將每組試驗(yàn)中接有相同試驗(yàn)菌株的兩個(gè)平皿計(jì)數(shù)進(jìn)行平均，取平均值。觀察微生物的菌落形態(tài)并做革蘭氏染色，以確認(rèn)生長(zhǎng)菌與接入的微生物相同。4.2.7驗(yàn)證用微生物的稀釋度和接種量菌珠名稱濃度（CFU）/ml稀釋度接種量大腸埃希菌約50-100cfu10-60.1ml金黃色葡萄球菌約50-100cfu10-60.1ml枯草芽抱桿菌約50-100cfu10-50.3ml白色念珠菌霉約50-100cfu10-40.1ml4.2.8試驗(yàn)結(jié)果

品名：批號(hào)：（供試品注入量:每皿注入0.2ml）菌珠名稱試驗(yàn)組菌液組供試品對(duì)照組試驗(yàn)組菌回收率％碟1碟2平均碟1碟2平均碟1碟2平均大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌驗(yàn)證結(jié)果:復(fù)核人： 檢驗(yàn)人:品名： 批匕號(hào)：（供試品注入量:每皿注入0.2ml）菌珠名稱試驗(yàn)組菌液組供試品對(duì)照組試驗(yàn)組菌回收率％碟1碟2平均碟1碟2平均碟1碟2平均大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌驗(yàn)證結(jié)果：復(fù)核人： 檢驗(yàn)人：品名：批匕號(hào)：（供試品注入量:每皿注入0.2ml）菌珠名稱試驗(yàn)組菌液組供試品對(duì)照組試驗(yàn)組菌回收率％碟1碟2平均碟1碟2平均碟1碟2平均大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌驗(yàn)證結(jié)果:復(fù)核人： 檢驗(yàn)人：銅綠假單胞菌驗(yàn)證內(nèi)容供試品組取1：10的供試品液10ml加入100ml無(wú)菌膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，35-37℃培養(yǎng)24小時(shí)后取培養(yǎng)物劃線接種于澳化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24小時(shí)，按中國(guó)藥典2005版二部附錄XJ微生物限度檢查法中控制菌檢查項(xiàng)下（銅綠假單胞菌）進(jìn)行檢查，結(jié)果應(yīng)為陰性，未檢出銅綠假單胞菌。試驗(yàn)組取1：10的供試品液10ml加入100ml無(wú)菌膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，加入銅綠假單胞菌對(duì)照菌液1ml，35-37℃培養(yǎng)24小時(shí)后取培養(yǎng)物劃線接種于澳化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24小時(shí)，其余同供試品組。結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性，檢出銅綠假單胞菌。陰性對(duì)照菌組取1：10的供試品液10ml加入100ml無(wú)菌膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，加入大腸埃希菌菌液1ml,35-37℃培養(yǎng)24小時(shí)后取培養(yǎng)物劃線接種于澳化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24小時(shí)，其余同供試品組。結(jié)果應(yīng)為陰性，未檢出大腸埃希菌。陽(yáng)性對(duì)照菌組 取銅綠假單胞菌對(duì)照菌液1ml加入100ml無(wú)菌膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，35-37℃培養(yǎng)24小時(shí)后取培養(yǎng)物劃線接種于澳化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24小時(shí)，其余同供試品組。結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性，檢出銅綠假單胞菌。驗(yàn)證結(jié)果4.3.5.1品名： 批號(hào)：試驗(yàn)組陰性對(duì)照組供試品組陽(yáng)性對(duì)照組澳化十六烷基三甲銨革蘭氏染色氧化酶試驗(yàn)單項(xiàng)結(jié)論驗(yàn)證結(jié)果：復(fù)核人： 檢驗(yàn)人：4.3.5.2品名：批號(hào)：試驗(yàn)組陰性對(duì)照組供試品組陽(yáng)性對(duì)照組澳化十六烷基三甲銨革蘭氏染色氧化酶試驗(yàn)單項(xiàng)結(jié)論驗(yàn)證結(jié)果:復(fù)核人： 檢驗(yàn)人:4.3.5.3品名：批號(hào)：試驗(yàn)組陰性對(duì)照組供試品組陽(yáng)性對(duì)照菌組澳化十六烷基三甲銨革蘭氏染色氧化酶試驗(yàn)單項(xiàng)結(jié)論驗(yàn)證結(jié)果：復(fù)核人： 檢驗(yàn)人：金黃色葡萄球菌驗(yàn)證內(nèi)容供試品組供試品組取1：10的供試品液10ml加入100ml無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，35-37℃培養(yǎng)24小時(shí)后取培養(yǎng)物劃線接種于甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24?72小時(shí)，按中國(guó)藥典2005版二部附錄XJ微生物限度檢查法中控制菌檢查項(xiàng)下（金黃色葡萄球菌）進(jìn)行檢查，結(jié)果應(yīng)為陰性，未檢出金黃色葡萄球菌。試驗(yàn)組取1：10的供試品液10ml加入100ml無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，加入金黃色葡萄球菌對(duì)照菌液1ml,35-37℃培養(yǎng)24小時(shí)后取培養(yǎng)物劃線接種于甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24?72小時(shí)，其余同供試品組。結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性，檢出金黃色葡萄球菌。陰性對(duì)照組取1：10的供試品液10ml加入100ml無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，加入大腸埃希菌對(duì)照菌液1ml,35-37℃培養(yǎng)24小時(shí)后取培養(yǎng)物劃線接種于甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24?72小時(shí)，其余同供試品組。結(jié)果應(yīng)為陰性，未檢出大腸埃希菌。陽(yáng)性對(duì)照菌組取金黃色葡萄球菌對(duì)照菌液1ml加入100ml無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，35-37℃培養(yǎng)24小時(shí)后取培養(yǎng)物劃線接種于甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24?72小時(shí)，其余同供試品組。結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性，檢出金黃色葡萄球菌。

檢驗(yàn)結(jié)果品名： 撲匕號(hào)：試驗(yàn)組陰性對(duì)照組供試品組陽(yáng)性對(duì)照菌組甘露醇氯化鈉瓊脂革蘭氏染色血漿凝固酶單項(xiàng)結(jié)論驗(yàn)證結(jié)果:復(fù)核人： 檢驗(yàn)人:品名： 批匕號(hào)：試驗(yàn)組陰性對(duì)照組供試品組陽(yáng)性對(duì)照菌組甘露醇氯化鈉瓊脂革蘭氏染色血漿凝