細(xì)菌的分離培養(yǎng)技術(shù)（動物微生物與免疫）

細(xì)菌的分離培養(yǎng)技術(shù)（一）目錄/CONTENTS1分離培養(yǎng)的注意事項3細(xì)菌分離培養(yǎng)方法2待檢材料的處理菌落菌苔分離培養(yǎng)的目的在含有多種細(xì)菌的病料或培養(yǎng)物中挑選出某種細(xì)菌。01分離培養(yǎng)的注意事項分離培養(yǎng)的注意事項采集待檢材料時的無菌操作不論任何待檢材料(包括動物的組織、體液，分泌物、滲出物、排泄物環(huán)境，設(shè)備，飼料或飲水等)必須在無菌操作下，用滅菌的器械采取，樣品放入滅菌的容器中待檢。分離培養(yǎng)的注意事項接種培養(yǎng)基時的無菌操作接種用的器械如接種環(huán)、棉棒或其他用具，在取材料接種之前必須予以滅菌，接種培養(yǎng)基時，要盡一切可能防止外界微生物的進入。分離培養(yǎng)的注意事項選擇適宜的培養(yǎng)基如果培養(yǎng)基選用的不當(dāng)，則材料中的細(xì)菌就可能分離不出來，為此，在從待檢材料中進行性質(zhì)不明的細(xì)菌初次分離培養(yǎng)時，一般盡可能地多用幾種培養(yǎng)基。分離培養(yǎng)的注意事項考慮細(xì)菌所需的大氣條件對于性質(zhì)不明的細(xì)菌材料最好多接種幾份培養(yǎng)基，分別放在普通大氣、無氧環(huán)境內(nèi)或含有5%-10%二氧化碳的容器中培養(yǎng)。分離培養(yǎng)的注意事項考慮培養(yǎng)溫度和時間一般病原菌在37℃溫度培養(yǎng)即可，經(jīng)24-72h培養(yǎng)后大多數(shù)病原菌都可以生長出來，少數(shù)須培養(yǎng)較長時間后，可見其生長，但要注意防止培養(yǎng)基變干。02待檢材料的處理待檢材料的處理加熱處理通過革蘭氏染色鏡檢，當(dāng)懷疑病料中存在有芽胞的病原菌時，可將待檢組織加入滅菌生理鹽水中磨碎做成1:5-1:10的稀釋液，放在50-75℃水浴中加熱20-30min，以便在這樣的溫度下，將抵抗力弱的微生物殺死，而有芽胞的細(xì)菌仍存活，然后，將這種材料接種到適當(dāng)培養(yǎng)基上，即可能得到純培養(yǎng)。待檢材料的處理通過敏感試驗動物處理

在待檢材料中存在有某種可疑的病原菌時，可感染對該種病原菌最易感動物，待試驗動物發(fā)病或死亡后，取它的血液或組織器官材料接種到培養(yǎng)基上。一方面可以由混有腐生雜菌的材料中分離病菌；另一方面可以確定病原菌的病原性或毒力。待檢材料的處理化學(xué)藥品處理有些藥品對于某些細(xì)菌有極強的抑制力，而對另一些細(xì)菌則沒有。因此，可將其加入到培養(yǎng)基中分離某些細(xì)菌。03細(xì)菌分離培養(yǎng)方法細(xì)菌分離培養(yǎng)方法材料中細(xì)菌的分離最常用的方法是固體培養(yǎng)基分離法，即取少許待檢材料，在固體填養(yǎng)基表面，逐漸稀釋分散，使成單個細(xì)菌細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)后，形成單個菌落，從而得到細(xì)菌的統(tǒng)培養(yǎng)，具體操作有很多種，其中平板劃線法、稀釋平板法和菌落分純法較為多用。細(xì)菌的分離培養(yǎng)技術(shù)（二）目錄/CONTENTS1純培養(yǎng)菌的挑選方法3細(xì)菌生長表現(xiàn)的檢查法2純培養(yǎng)菌的移植接種法01純培養(yǎng)菌的挑選方法純培養(yǎng)菌的挑選方法先用肉眼觀察有無細(xì)菌菌落生長，如有，須進一步觀察長出的菌落是單一的、還是混雜的。純培養(yǎng)菌的挑選方法凡培養(yǎng)基中沿涂布劃線處長出較多的一種菌落是材料中的病原菌的可能性較大，少數(shù)零散的菌落多為在操作過程中由外界進入的雜菌。純培養(yǎng)菌的挑選方法將長出的各種菌落各選一二個，用蠟筆在平皿底加以標(biāo)記，置低倍顯微鏡下觀察菌落的結(jié)構(gòu)。02純培養(yǎng)菌的移植接種法純培養(yǎng)菌的移植接種法移植于固體平板培養(yǎng)基方法同平板劃線分離培養(yǎng)法純培養(yǎng)菌的移植接種法移植于斜面培養(yǎng)基中(1)用左手握住菌種管和斜面培養(yǎng)管底部，右手持接種針(環(huán))。(2)用右手小指與手掌，小指與無名指分別拔出兩管的棉塞，將管口通過火焰滅菌。(3)用接種針(環(huán))伸入菌種管內(nèi)挑取移種之菌落。(4)伸入斜面培養(yǎng)管內(nèi)，從斜面底部到頂端直接自下而上地“Z”字形劃線。(5)將接種針垂直插入半固體培養(yǎng)基的中央，穿刺至培養(yǎng)基底部然后沿原穿刺線退出接種針。(6)接種完火焰滅菌管口塞上棉塞，置于37℃培養(yǎng)。純培養(yǎng)菌的移植接種法移植于半固體培養(yǎng)基中(1)以接種針挑取細(xì)菌培養(yǎng)物，插入半固體培養(yǎng)基的中央，穿刺至培養(yǎng)基底部，然后沿原穿刺線退出接種針。(2)其他操作與斜面接種類似。純培養(yǎng)菌的移植接種法移植于液體培養(yǎng)基(1)用滅菌接種環(huán)挑取菌落或標(biāo)本。(2)在試管內(nèi)壁與液面交界處輕輕研磨，使細(xì)菌混勻在液體培養(yǎng)基中。純培養(yǎng)菌的移植接種法移植于液體培養(yǎng)基(1)用滅菌接種環(huán)挑取菌落或標(biāo)本。(2)在試管內(nèi)壁與液面交界處輕輕研磨，使細(xì)菌混勻在液體培養(yǎng)基中。純培養(yǎng)菌的移植接種法移植于皰肉培養(yǎng)基接種時將皰肉培養(yǎng)基表面凡士林加熱熔化，斜持試管片刻，使凡士林黏附于管壁側(cè)，然后以接種環(huán)取培養(yǎng)物或用滅菌毛細(xì)管取液體培養(yǎng)物種入凡士林層下面的培養(yǎng)基內(nèi)再將凡土林塊稍加熱熔化覆蓋于培養(yǎng)基表面，置于37℃培養(yǎng)后，觀察結(jié)果。03細(xì)菌生長表現(xiàn)的檢查法細(xì)菌生長表現(xiàn)的檢查法瓊脂平板表面上菌落特征肉眼觀察有無單獨菌落形成，進而觀察菌落的形狀大小、顏色、濕潤度、隆起度及透明度，并用接種環(huán)輕輕觸及菌落，以檢查其質(zhì)度。細(xì)菌生長表現(xiàn)的檢查法菌落特征的描述可參考用以下術(shù)語(1)形狀：圓形、針尖狀(直徑在1.0mm以內(nèi)者)、不規(guī)則根狀。(2)大?。阂院撩?mm)計算。(3)隆起度：扁平、高起、隆起，圓頂狀。(4)表面：光滑、粗糙同心圓狀、放射狀、乳突形、臍形。(5)構(gòu)造：顆粒狀(細(xì)、中、粗)、絲狀、卷曲狀等。(6)邊緣：整齊、波狀、鋸齒狀、卷發(fā)狀等。(7)顏色：無色、灰白色及產(chǎn)生各種色素。(8)透明度：透明、半透明、不透明。(9)質(zhì)度：奶油狀、黏性、質(zhì)脆等。(10)乳化性：易、難。液體培養(yǎng)基中的生長表現(xiàn)肉眼觀察細(xì)菌的生長量培養(yǎng)物的混濁度、表面生長情況、有無沉淀物等。細(xì)菌生長表現(xiàn)的檢查法細(xì)菌生長表現(xiàn)的檢查法液體培養(yǎng)物特征的描述可參考以下術(shù)語(1)生長量：無生長、貧瘠、中等、豐盛。(2)混濁度：是否混濁，輕度、中等或強度混濁，混濁情況為全管均勻一致還是混有顆粒、絮片或絲狀生長物。(3)表面生長：培養(yǎng)基表面是否形成菌膜，菌膜的厚度(薄膜、厚膜)，菌膜表面的情況(光滑、粗糙、顆粒狀)。(4)沉淀：有無、