淺論從細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)探討中醫(yī)方證的規(guī)律性

淺論從細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)探討中醫(yī)方證的規(guī)律性【摘要】細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)理論與中醫(yī)證候理論存在相互印證的關(guān)系，從細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)探索中醫(yī)方證的規(guī)律性具有較強(qiáng)的可能性，有助于中醫(yī)方證規(guī)律性的研究和中醫(yī)臨床辨證論證的客觀化和標(biāo)準(zhǔn)化可能。

【關(guān)鍵詞】信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo);方證;規(guī)律

中醫(yī)方證的現(xiàn)代化研究多從代謝組學(xué)、蛋白組學(xué)、基因組學(xué)、化學(xué)、系統(tǒng)生物學(xué)等多種學(xué)科方向進(jìn)行研究，盡管取得了很多喜人的成績(jī)，但由于方證規(guī)律的復(fù)雜性和多樣性，目前的方證研究仍然沒有形成一個(gè)統(tǒng)一規(guī)范的系統(tǒng)，仍然處于百家爭(zhēng)鳴、缺乏共識(shí)的階段，方證間的規(guī)律性探索還有待于根據(jù)中醫(yī)方證間的理論特點(diǎn)，選擇合理的角度和途徑?！胺綇姆ǔ觯S證立”的方劑制定原則，指出方證是建立在證候的基礎(chǔ)上，根據(jù)不同的證候制定不同的治法，而選擇相應(yīng)的方劑。概括起來講，方證是應(yīng)用某一方劑的、反映患者綜合而特定的病理狀態(tài)的臨床指征[1]。由此可見，方證規(guī)律性的研究亦應(yīng)該以證候規(guī)律研究為基礎(chǔ)展開。筆者認(rèn)為，方證規(guī)律性的研究應(yīng)立足大樣本揭示證候規(guī)律性，然后以方來檢驗(yàn)其規(guī)律性。

1證候本質(zhì)體現(xiàn)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)

細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)指胞間通訊的激素等以及外界環(huán)境因子作用于細(xì)胞表面(或胞內(nèi)受體)后，跨膜形成胞內(nèi)第二信使和其后的信息分子級(jí)聯(lián)傳遞、誘導(dǎo)基因表達(dá)與引起生理反應(yīng)的過程，生命現(xiàn)象的發(fā)生實(shí)際上都是機(jī)體內(nèi)外信號(hào)傳遞的結(jié)果。證候是指機(jī)體在疾病發(fā)展過程中的某一階段的病理概括，包括病位、病因、病性、以及邪正關(guān)系，反映疾病發(fā)展過程中某一階段的病理變化的本質(zhì)，具有整體性、定型性、定系性、制約性、時(shí)相性的特點(diǎn)，是在致病因素作用下,機(jī)體內(nèi)外環(huán)境各系統(tǒng)之間相互關(guān)系發(fā)生紊亂所產(chǎn)生的病理要素的綜合性診斷概念。作為概括生命活動(dòng)異?，F(xiàn)象的證候，我們可以理解為，在某些原因的作用下，發(fā)病部位細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)程度和方向發(fā)生改變，導(dǎo)致性質(zhì)迥異的生命現(xiàn)象即疾病的發(fā)生。而證候的本質(zhì)就是對(duì)這種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)程度和方向發(fā)生改變后所產(chǎn)生的異常表現(xiàn)的高度概括和總結(jié)。

2細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)程度與水平異常變化奠定不同證候間差異性

細(xì)胞信號(hào)的正常轉(zhuǎn)導(dǎo)保證著新陳代謝的正常運(yùn)轉(zhuǎn)，而不同的細(xì)胞信號(hào)產(chǎn)生不同的生理病理現(xiàn)象，造成在某一階段產(chǎn)生證候的特異性，而這種特異性隨著刺激因子性質(zhì)或強(qiáng)度改變，或者機(jī)體抵抗力的強(qiáng)弱變化而發(fā)生改變，決定著證候的時(shí)間性。因此，我們可以看到中醫(yī)證候一方面具有特異性，另一方面又不是固定不變的，以狼瘡性腎炎(LN)為例，其中醫(yī)主要病機(jī)特點(diǎn)是陰陽(yáng)失調(diào)為本，熱毒瘀血為標(biāo);病變涉及五臟六腑，而其中以腎臟病變最為常見。陽(yáng)曉等以確診并辨證分型為陰虛內(nèi)熱證的13例、氣陰兩虛證的26例、脾腎陽(yáng)虛的12例LN患者為研究對(duì)象，并設(shè)17例健康志愿者為正常組，探討狼瘡腎炎(LN)不同本虛證候患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)內(nèi)TNF-α信號(hào)通路主要受體銜接蛋白-TNF相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白(TRADD)、Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白(FADD)、受體相互作用蛋白-1(RIP-1)和TNF受體相關(guān)因子-2(TRAF-2)表達(dá)變化情況，發(fā)現(xiàn)各虛證患者PBMCs中TRADD、FADD、RIP-1和TRAF-2mRNA表達(dá)均不同程度低于正常組，其中氣陰兩虛組、脾腎陽(yáng)虛組降低幅度較陰虛內(nèi)熱組相對(duì)較小，這些信號(hào)蛋白介導(dǎo)的凋亡信號(hào)可能參與了LN本虛證候的形成。脾為后天之本，脾虛證為臨床常見病證，其與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方面的研究十分活躍，其研究主要集中在胞間信號(hào)分子(第一信使)上如：胃腸激素(胃泌素、P物質(zhì)、胃動(dòng)素、血管活性腸肽等)、以及環(huán)核苷酸信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，磷脂酶介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，Ca2+/CaM-PK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，以及酪氨酸激酶介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，神經(jīng)遞質(zhì)有經(jīng)典遞質(zhì)，膽堿類遞質(zhì),單胺類遞質(zhì),神經(jīng)肽類遞質(zhì)涉及腦腸肽、阿片肽等方面的研究,可見脾虛證時(shí)，胃泌素含量下降，P物質(zhì)升高，胃動(dòng)素升高，血管活性腸肽增多，細(xì)胞表面受體酪氨酸蛋白激酶(PTK)和胞內(nèi)第二信使(蛋白激酶C，PKC)表達(dá)降低等等信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的異常改變，甚至以胃泌素和蛋白激酶C的表達(dá)異常區(qū)分出脾陽(yáng)虛。不過脾氣虛證、脾陽(yáng)虛證、脾陰虛證間以及與其他臟腑證候間在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方面的多部位、多系統(tǒng)、多層面的同步、動(dòng)態(tài)比照研究相對(duì)較少，部分研究停留在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是其原因之一[6~9]。也有從信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因表達(dá)上探討方證規(guī)律的，如丁漢榮等[10]以基因芯片技術(shù)從差異基因表達(dá)角度分析8名骨關(guān)節(jié)炎腎陽(yáng)虛證與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)差異表達(dá)基因，本次試驗(yàn)結(jié)果差異表達(dá)基因中與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)元件相關(guān)的基因有28條，其中調(diào)節(jié)蛋白酪氨酸激酶的8條、絲氨酸/蘇氨酸磷酸化激酶9條,與G蛋白相關(guān)的最多，共11條，而且大部分表現(xiàn)為下調(diào)。提示細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)異常可能在腎陽(yáng)虛證骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用。在外邪致病方面，同樣也和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)之間關(guān)系密切，如濕熱證多與內(nèi)毒素轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)有關(guān)，程方平等[11]觀察濕熱證大鼠內(nèi)毒素特異性受體LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA發(fā)現(xiàn)隨著病程的發(fā)展，濕熱證大鼠三者表達(dá)逐漸增強(qiáng)，提示濕熱證的發(fā)生是機(jī)體各種原因?qū)е掳屑?xì)胞內(nèi)毒素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路適量表達(dá)，并認(rèn)為靶細(xì)胞LBP、CD14、TLR4等內(nèi)毒素轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)適量表達(dá)及NF-κB激活既是中醫(yī)濕熱病證的主要致病機(jī)理，又是濕熱病證的特異性指標(biāo)，而量的差異可作為溫病濕熱與內(nèi)傷濕熱的重要參考指標(biāo)。由此可見，特定的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)異常不僅可以造就特定的證候，而其程度和水平的改變程度也就體現(xiàn)不同階段的證候變化，只不過與特定證候相適應(yīng)的特征性的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中心方面的研究還較少。

3以細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)為中心探索中醫(yī)方證規(guī)律，是方證規(guī)律研究的新策略和途徑

疾病的發(fā)生往往與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的異常相關(guān)，細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)介導(dǎo)著疾病發(fā)生發(fā)展的方向，盡管目前中醫(yī)方證與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)關(guān)聯(lián)性的研究較多，但相應(yīng)特異性的證屬信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中心方面研究較少，因此中醫(yī)方證研究多集中在用是方治療是病的模式上，即在已經(jīng)明確某一信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在某一疾病發(fā)病過程中的可能作用的基礎(chǔ)上，采用中藥對(duì)其進(jìn)行干預(yù)治療，看其在保證療效的同時(shí)，能否對(duì)該信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行調(diào)節(jié)的模式，如：楊志云等[12]探索清肝化瘀方對(duì)大鼠肝癌前病變模型Notch信號(hào)系統(tǒng)的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，Notch1及其配體Jagged表達(dá)明顯下調(diào),說明該藥阻斷肝癌前病變作用機(jī)制可能與其下調(diào)Notch信號(hào)系統(tǒng)表達(dá)有關(guān);陳希等[13]隨機(jī)抽取用補(bǔ)腎健脾活血方治療效佳的10例原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥，應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢測(cè)補(bǔ)腎健脾活血方治療骨質(zhì)疏松癥前后外周靜脈血信號(hào)傳導(dǎo)基因的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)腎健脾活血方調(diào)控18個(gè)基因介導(dǎo)的條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,其中11個(gè)基因上調(diào)，7個(gè)基因下調(diào)，有8個(gè)基因共表達(dá)調(diào)控大于、等于4套信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。提示補(bǔ)腎健脾活血方抗骨質(zhì)疏松的作用效應(yīng)是多信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因共同調(diào)控的結(jié)果。司富春等[14]證明啟隔散通過不同程度的抑制食管癌細(xì)胞PLC-γ1介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。喬小燕等[15]通過觀察養(yǎng)陰清熱祛濕方及其拆方對(duì)肺腺癌細(xì)胞A549增殖抑制和PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響，發(fā)現(xiàn)養(yǎng)陰清熱祛濕全方及其拆方均能下調(diào)A549細(xì)胞PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信號(hào)通路各蛋白表達(dá)水平，表明養(yǎng)陰、清熱、祛濕及三法聯(lián)用正是通過抑制PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑而抑制肺腺癌細(xì)胞增殖。

盡管現(xiàn)代大部分的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是用某方治療某一疾病而非某一證型疾病，雖然從一定層面上說，該病可能存在有是證用是方的邏輯關(guān)系在其中，但這樣的研究，尤其是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在一定程度上已經(jīng)脫離了中醫(yī)辨證論治的理論基礎(chǔ)。因此，立足于以細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)為中心探索中醫(yī)方證規(guī)律，無論臨床型研究還是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，必須建立在中醫(yī)基礎(chǔ)理論的基礎(chǔ)上，首先明確與證候相關(guān)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中心，然后用與證候相對(duì)應(yīng)的方劑進(jìn)行治療，將是方證規(guī)律研究的新策略和途徑。

4尋找與證候相對(duì)應(yīng)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中心是從細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)探索中醫(yī)方證規(guī)律的關(guān)鍵所在

盡管從細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)探討中醫(yī)證候的規(guī)律性的研究取得了長(zhǎng)足進(jìn)展，但畢竟中醫(yī)證候的多樣性、復(fù)雜性和交叉性，造成了目前仍然缺乏與證候相對(duì)性的特定的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中心方面報(bào)道，嚴(yán)重制約了中醫(yī)方證規(guī)律的研究。因此，我們主張，以疾病為對(duì)象，采取大樣本，按照國(guó)家制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行辨證分型，將證與病作為一個(gè)整體，而不是以證候描述的要素為重心，然后尋找與證候相對(duì)應(yīng)的特定的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中心或者是組合，甚至按照其表達(dá)與否及量之間的關(guān)系，來明確證與證之間的差異性，確立以細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)為中心的證候分類依據(jù)，再通過選擇特定的方劑進(jìn)行干預(yù)治療，從而形成以細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)為中心探索中醫(yī)方證規(guī)律的方法體系。這樣以疾病的證候分類為基礎(chǔ)，研究某一疾病的證候分類與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)之間的關(guān)系，甚至是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因表達(dá)的關(guān)系，其優(yōu)點(diǎn)在于可以避免不同的疾病出現(xiàn)相同的證候而引起的研究復(fù)雜性，和不同疾病發(fā)生與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)之間的差異性。不足之處在于，不同疾病相同證候，其細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中心是否一致，我們就不得而知，當(dāng)然我們也可以研究，但那將是更加巨大的工程。值得一提的就是要防止陷入的誤區(qū)是將致病因素孤立起來，尋找致病因素與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)之間的關(guān)系，然后推導(dǎo)證與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)之間的關(guān)系。

細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)理論在揭示復(fù)雜的生命現(xiàn)象中所發(fā)揮的重要作用，其本身就具有多靶點(diǎn)、多途徑等特點(diǎn)，同時(shí)受到個(gè)體因素、疾病類型等諸多因素的影響，因此，從細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)探索中醫(yī)方證規(guī)律，還必須立足中醫(yī)基礎(chǔ)理論，大樣本，多角度、全方位的同步動(dòng)態(tài)進(jìn)行研究。同時(shí)，匯集成相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫(kù)，集合各病各證候與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)之間關(guān)系，確定相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，中醫(yī)方證研究將走得更遠(yuǎn)。

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