胃癌Her2的檢測(cè)南京軍區(qū)總醫(yī)院周曉軍主任

胃癌HER2的標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)周曉軍南京軍區(qū)南京總醫(yī)院當(dāng)前第1頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)當(dāng)前第2頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)當(dāng)前第3頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)當(dāng)前第4頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)HER2，又名HER2/neu，c-erbB-2，表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）家族成員；原癌基因，位于17q21，編碼相對(duì)分子量185KD的跨膜糖蛋白（跨膜酪氨酸激酶受體，表皮生長(zhǎng)因子樣分子），在細(xì)胞表面表達(dá)；通過(guò)參與信號(hào)傳道通路的一系列活動(dòng)影響細(xì)胞的增殖與分化。HER2基因當(dāng)前第5頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)信號(hào)傳導(dǎo)至細(xì)胞核細(xì)胞核接合部酪氨酸激酶活性部分細(xì)胞漿細(xì)胞膜生長(zhǎng)因子（配體）癌基因活化細(xì)胞分裂

HER2受體跨膜二聚體的信號(hào)傳導(dǎo)途徑當(dāng)前第6頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)1=-基因拷貝數(shù)2=-

mRNA轉(zhuǎn)錄3=-細(xì)胞表面受體蛋白表達(dá)4=-細(xì)胞外受體功能域釋放A=HER2DNAB=HER2mRNAC=HER2receptorprotein正常擴(kuò)增/過(guò)度表達(dá)細(xì)胞核細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞膜1234CBAHER2過(guò)度表達(dá)：正常狀態(tài)的10-100倍當(dāng)前第7頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)

HER2癌基因的致瘤機(jī)制：抑制凋亡，促進(jìn)增殖；增加腫瘤細(xì)胞的侵襲力；促進(jìn)腫瘤血管新生和淋巴管新生。研究表明：30％以上的人類腫瘤中存在HER2基因的擴(kuò)增/過(guò)度表達(dá)（如乳腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、輸卵管癌、胃癌和前列腺癌等);

胃癌中HER-2/neu基因的過(guò)表達(dá)率為7%-27%(-45%)，通過(guò)FISH檢測(cè)基因擴(kuò)增率為10%-20%當(dāng)前第8頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)胃癌組織學(xué)類型(WHO2000)：

1．管狀腺癌（adenocarcinoma）最多見(jiàn)。分高、中、低分化，此型癌多為高分化，惡性度較低，轉(zhuǎn)移較晚。2．乳頭狀腺癌（papillaryform）：腺腔內(nèi)出現(xiàn)許多乳頭。3．印戒細(xì)胞癌（signet-ringcell）：癌細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量偏酸性粘液，常將胞核擠壓于癌細(xì)胞漿之一側(cè)，形似戒指，故稱之為印戒細(xì)胞癌。4…….

當(dāng)前第9頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)Lauren分型(1965):根據(jù)胃癌細(xì)胞形態(tài)和胃癌組織中粘液性質(zhì)將胃癌分為腸型和彌漫型兩大類。腸型胃癌中唾液酸粘液及硫酸粘液多見(jiàn)，發(fā)生于腸化生上皮；腸型胃癌多見(jiàn)于老年患者，惡性度較低，分化程度差別大，與腫瘤大小反比，組織學(xué)上多為乳頭狀腺癌或腺管狀腺癌。彌漫型胃癌中中性粘液多見(jiàn)。彌漫型胃癌多見(jiàn)于青年人，惡性度較高，肉眼類型多為皮革胃，組織學(xué)上多為粘液細(xì)胞癌（印戒細(xì)胞癌）及未分化癌。Ming（1977）：膨脹型VS浸潤(rùn)型當(dāng)前第10頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)當(dāng)前第11頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)當(dāng)前第12頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)胃癌HER2檢測(cè)當(dāng)前第13頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)當(dāng)前第14頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)當(dāng)前第15頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)當(dāng)前第16頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)當(dāng)前第17頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)HER2geneHER2geneHER2gene雙鏈靶基因變性的單鏈DNA與熒光標(biāo)記探針復(fù)性\產(chǎn)生熒光信號(hào)熒光原位雜交法原理FluorescenceinsituHybridisation(FISH)當(dāng)前第18頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)當(dāng)前第19頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)HER2probeCEP17probeHER2/CEP17ratio=1HER2/CEP17ratio=1HER2/CEP17ratio=7NoamplificationNoamplification;tetraploidyHER2geneamplification(ratio>2.2)當(dāng)前第20頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)比值<2.2提示Her-2無(wú)擴(kuò)增當(dāng)前第21頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)比值>2.2提示Her-2有擴(kuò)增當(dāng)前第22頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)比值介于1.8～2.2臨界值當(dāng)前第23頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)Aneusomy,Notamplified當(dāng)前第24頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)當(dāng)前第25頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)DenaturetargetDNA

andhybridiseprobePrimaryantibodybindstotheprobeSecondaryantibody

(withunactivated

visualisationagent)

bindstoprimaryantibody色素原位雜交法原理

chromogenicinsituhybridization(CISH)當(dāng)前第26頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)

CISH：無(wú)HER2基因擴(kuò)增當(dāng)前第27頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)CISH：HER2基因低擴(kuò)增

當(dāng)前第28頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)CISH：HER2基因高拷貝擴(kuò)增

當(dāng)前第29頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)當(dāng)前第30頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)IHC檢測(cè):抗原修復(fù)有/無(wú)組織固定方法抗體選擇評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)變異性當(dāng)前第31頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)當(dāng)前第32頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)IHCvsFISHC-erbB2scoreGeneamplificationbyFISH04%17%210-35%3>90%當(dāng)前第33頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)Fig.1HER-2proteinexpressionevaluatedbyimmunohistochemistry(A-C)(originalmagnification200)andHER-2geneamplificationassessedbyFISH(D-F)(originalmagnification1000)ingastriccarcinomatissue.AandD,3+byimmunohistochemicalstainingwithHER-2amplification.BandE,2+byimmunohistochemicalstainingwithHER-2amplification.CandF,1+byimmunohistochemicalstainingwithHER-2amplification.當(dāng)前第34頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)胃癌HER2檢測(cè)當(dāng)前第35頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)胃癌HER2檢測(cè)當(dāng)前第36頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)HER2檢測(cè)流程組織采集組織形態(tài)檢測(cè)耗時(shí)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)足夠數(shù)量的有代表性的活檢標(biāo)本（推薦6–8個(gè)）有代表性的手術(shù)標(biāo)本胃癌HER2檢測(cè)的流程

當(dāng)前第37頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)多處活檢的必要性ImagecourtesyofProf.GViale當(dāng)前第38頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)HER2檢測(cè)流程組織采集檢測(cè)耗時(shí)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)足夠數(shù)量的有代表性的活檢標(biāo)本（推薦6–8個(gè)）有代表性的手術(shù)標(biāo)本胃癌HER2檢測(cè)的特性

腫瘤異質(zhì)性高(HER2-陽(yáng)性位點(diǎn)范圍小)FISH檢測(cè)應(yīng)篩查整個(gè)切片組織形態(tài)當(dāng)前第39頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)HER2檢測(cè)流程和乳腺癌相似首先采用免疫組化法（IHC）檢測(cè)HER2-陽(yáng)性:IHC3+或IHC2+/FISH+明視野方法優(yōu)先足夠數(shù)量的有代表性的活檢標(biāo)本（推薦6–8個(gè)）有代表性的手術(shù)標(biāo)本腫瘤異質(zhì)性高(HER2-陽(yáng)性位點(diǎn)范圍小)FISH檢測(cè)應(yīng)篩查整個(gè)切片檢測(cè)耗時(shí)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)組織采集組織形態(tài)胃癌HER2檢測(cè)的特性

當(dāng)前第40頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)明視野技術(shù)有利于發(fā)現(xiàn)HER2陽(yáng)性腫瘤區(qū)域相比乳腺癌，著色異質(zhì)性在胃癌和胃食管結(jié)合部癌更常見(jiàn)1胃癌中，5–30%病例會(huì)出現(xiàn)腫瘤異質(zhì)性1-3HofmannM,etal.Histopathology2008;52:797–805.RüschoffJ,etal.derpathologe2010;31:208–17.RüschoffJ,etal.VirchovsArchive2010;acceptedforpublication.ImagecourtesyofProf.GViale當(dāng)前第41頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)HER2檢測(cè)流程和乳腺癌相似首先采用免疫組化法（IHC）檢測(cè)HER2-陽(yáng)性:IHC3+或IHC2+/FISH+明視野方法優(yōu)先足夠數(shù)量的有代表性的活檢標(biāo)本（推薦6–8個(gè)）有代表性的手術(shù)標(biāo)本腫瘤異質(zhì)性高(HER2-陽(yáng)性位點(diǎn)范圍小)FISH檢測(cè)應(yīng)篩查整個(gè)切片檢測(cè)耗時(shí)組織采集組織形態(tài)胃癌HER2檢測(cè)的特性

≥10%的腫瘤細(xì)胞的基側(cè)膜、側(cè)膜強(qiáng)染或完全膜強(qiáng)染定義為IHC陽(yáng)性不界定活檢標(biāo)本染色的腫瘤細(xì)胞占總體腫瘤細(xì)胞的百分比：需要5個(gè)(成簇)細(xì)胞染色評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前第42頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)當(dāng)前第43頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)手術(shù)標(biāo)本–染色結(jié)果活檢標(biāo)本

–染色結(jié)果評(píng)分HER2過(guò)表達(dá)情況評(píng)估無(wú)反應(yīng)或<10%腫瘤細(xì)胞膜染色無(wú)反應(yīng)或任何腫瘤細(xì)胞無(wú)膜染色0陰性

≥10%腫瘤細(xì)胞微弱或隱約可見(jiàn)膜染色;細(xì)胞僅有部分膜染色腫瘤細(xì)胞團(tuán)微弱或隱約可見(jiàn)膜染色（不管染色的腫瘤細(xì)胞所占整體百分比）1+陰性

≥10%腫瘤細(xì)胞有弱到中度的基側(cè)膜、側(cè)膜或完全膜染腫瘤細(xì)胞團(tuán)有弱到中度的基側(cè)膜、側(cè)膜或完全膜染（不管染色的腫瘤細(xì)胞所占整體百分比）2+可疑≥10%腫瘤細(xì)胞的基側(cè)膜、側(cè)膜或完全膜的強(qiáng)染色腫瘤細(xì)胞的基側(cè)膜、側(cè)膜或完全膜的強(qiáng)染色（不管染色的腫瘤細(xì)胞所占整體百分比）3+陽(yáng)性HerceptinEUSmPC:http://www.ema.europa.eu/humandocs/PDFs/EPAR/

Herceptin/emea-combined-h278en.pdf.胃癌HER2檢測(cè)的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前第44頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)完全、基側(cè)膜或側(cè)膜染色反應(yīng)HER2陽(yáng)性胃癌和胃食管結(jié)合部癌可能表現(xiàn)為基側(cè)膜、側(cè)膜或完全膜染底側(cè)膜、側(cè)膜染色的發(fā)生通常與低分化胃腺癌細(xì)胞結(jié)構(gòu)有關(guān)HofmannM,etal.Histopathology2008;52:797–805.ImagereproducedcourtesyofTARGOSMolecularPathologyGmbH.當(dāng)前第45頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)2.5x–5x20x–40x40x10x–20x放大:x-倍評(píng)分3+2+1+0強(qiáng)染色(無(wú)放大)弱到中度染色隱約可見(jiàn)(更高放大倍數(shù))陰性染色強(qiáng)度IHC染色強(qiáng)度對(duì)應(yīng)的放大倍率為了分辨明顯的細(xì)胞間（完全、底側(cè)膜或側(cè)膜）的膜染色，所需的顯微鏡放大倍率（~工作距離）當(dāng)前第46頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)10x20x需更高的放大倍數(shù)IHC2+20x需高倍放大IHC1+40x40x5x無(wú)需放大視野可見(jiàn)膜染色I(xiàn)HC3+甚至無(wú)需顯微鏡也可見(jiàn)5x放大倍率和HER2評(píng)分當(dāng)前第47頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)腫瘤組織內(nèi)邊緣擠壓所至的假象IHC:樣本排除標(biāo)準(zhǔn)HER2檢測(cè)ICH法染色的活檢/手術(shù)標(biāo)本排除保存情況差的腫瘤組織排除非特異性染色非腫瘤組織內(nèi)腸型化生、再生（鄰近潰瘍）胞漿、核、僅底邊、腔緣部分著色當(dāng)前第48頁(yè)\共有53頁(yè)\編于星期四\8點(diǎn)評(píng)分為0無(wú)染色

(40x

放大倍率)IHC:評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)完全膜染色或基側(cè)膜、側(cè)膜染色染色強(qiáng)度

(可見(jiàn)的不可疑的膜染色)強(qiáng)染色(2.5x–5x

放大倍率)弱到中度染色(10x–20x

放大倍率)必須至少有:活檢標(biāo)本中5個(gè)(成簇)細(xì)胞染色手術(shù)標(biāo)本中10%的腫瘤細(xì)胞染色評(píng)分為2+隱約可見(jiàn)染色(40x

放大倍率)評(píng)分為1+評(píng)分為3+特異性膜染色(明顯