流式細(xì)胞術(shù)在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用

流式細(xì)胞術(shù)在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用第一頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日內(nèi)容流式細(xì)胞儀概念、原理及應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)優(yōu)勢流式細(xì)胞術(shù)在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用第二頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日

流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry）是利用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞或其它顆粒性物質(zhì)的物理、化學(xué)特性。同時(shí)利用熒光染料,激光技術(shù),單抗技術(shù)以及計(jì)算機(jī)技術(shù)的發(fā)展,大大提高了檢測速度與統(tǒng)計(jì)精確性,而且從同一個(gè)細(xì)胞中可以同時(shí)測得多種參數(shù),為生物醫(yī)學(xué)與臨床檢驗(yàn)學(xué)發(fā)展提供了一個(gè)全新的視角和強(qiáng)有力的手段。

流式細(xì)胞術(shù)第三頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日流式細(xì)胞儀檢測流程第四頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日流式細(xì)胞術(shù)優(yōu)勢（分析型）高速測定細(xì)胞，大樣本計(jì)數(shù)檢測稀有細(xì)胞多參數(shù)分析第五頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日FC500流式細(xì)胞儀第六頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用檢測特性：大小、顆粒度、細(xì)胞受體/分子、核酸(DNA/RNA)、蛋白……第七頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日腫瘤學(xué)中的應(yīng)用腫瘤免疫腫瘤細(xì)胞周期和凋亡腫瘤干細(xì)胞的研究血液中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的研究第八頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日腫瘤免疫學(xué)

天然免疫中性粒細(xì)胞嗜酸性細(xì)胞嗜堿性細(xì)胞單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞樹突細(xì)胞:mDC-pDCNK細(xì)胞NKT細(xì)胞T淋巴細(xì)胞CD5+B細(xì)胞獲得性免疫B細(xì)胞輔助性T細(xì)胞 Th1 Th2細(xì)胞毒T細(xì)胞調(diào)節(jié)性T細(xì)胞第九頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日淋巴細(xì)胞免疫分型

T細(xì)胞：CD3+CD4+(Th，Treg)CD8+(Tc)B細(xì)胞：CD19+NK細(xì)胞：CD3-CD56+第十頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日腫瘤細(xì)胞免疫特點(diǎn)CD3CD4CD8CD4/CD8NKCIK正常正常正常正常正常正常正常正常正常正常正常第十一頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日Th1Th2細(xì)胞因子分泌細(xì)胞測定Th1細(xì)胞：介導(dǎo)細(xì)胞免疫、細(xì)胞毒性T細(xì)胞的生長和活化、巨噬細(xì)胞的活化、介導(dǎo)遲發(fā)型過敏反應(yīng)。其功能亢進(jìn)將導(dǎo)致炎癥慢性遷延，器官特異性自身免疫病，急性排異反應(yīng)和接觸性皮炎等的發(fā)病和免疫病理損傷。Th2細(xì)胞：介導(dǎo)體液免疫，促進(jìn)B細(xì)胞的生長、活化和分化，是IgG1和IgE類抗體的轉(zhuǎn)換因子，其功能亢進(jìn)將導(dǎo)致特異性過敏反應(yīng)，參與高IgE綜合癥和嗜酸性粒細(xì)胞增多癥。第十二頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日Th1/Th2漂移與腫瘤免疫腫瘤可使Th1/Th2平衡向Th2偏移,而Th1/Th2偏移又會(huì)促進(jìn)腫瘤的發(fā)展,故探討Th1/Th2功能狀況以判斷腫瘤患者的免疫狀態(tài)可為腫瘤生物治療提供有效的理論依據(jù)。第十三頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞調(diào)節(jié)性T細(xì)胞具有免疫抑制功能，在多種免疫性疾病中起重要的調(diào)節(jié)作用，成為近年來免疫學(xué)領(lǐng)域研究的重要內(nèi)容。第十四頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日

許多研究表明：在實(shí)體腫瘤和血液惡性腫瘤患者中Treg數(shù)目增多。在乳腺癌、卵巢癌、肺癌以及肝癌等多種實(shí)體腫瘤患者外周血和腫瘤局部微環(huán)境中,Treg比例增高,且數(shù)目與患者腫瘤進(jìn)展程度和預(yù)后、生存率呈負(fù)相關(guān)。血液惡性腫瘤患者中Treg數(shù)目呈腫瘤發(fā)展階段相關(guān)性增長。但是,Treg增高的機(jī)制尚不清楚。去除Treg或封閉其抑制功能，可以增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)。第十五頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日化療作為一種重要的治療腫瘤的方法,對腫瘤患者外周血中的Treg數(shù)目可產(chǎn)生一定影響?；熕幬锟赡芡ㄟ^抑制腫瘤微環(huán)境中血管生成,促進(jìn)Treg凋亡,從而起到有效控制腫瘤的作用。但也有報(bào)道證明腫瘤患者接受化療后,外周血中Treg數(shù)目增多。第十六頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日化療究竟對Treg會(huì)產(chǎn)生怎樣的影響,目前尚無定論,有待于進(jìn)一步研究。因此,Treg在腫瘤治療方面的應(yīng)用成為研究的熱點(diǎn)。如何清除或逆轉(zhuǎn)Treg的抑制作用是腫瘤免疫治療的一個(gè)關(guān)鍵問題。第十七頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日樹突狀細(xì)胞(DC)

DC控制體內(nèi)免疫和耐受的平衡控制T,B細(xì)胞對可溶性抗原的反應(yīng)影響產(chǎn)生免疫球蛋白的分類DC亞群分為MDC和PDCMDC誘導(dǎo)免疫應(yīng)答PDC誘導(dǎo)免疫耐受第十八頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日樹突狀細(xì)胞流式分析陰性表達(dá)抗原設(shè)門Lin(CD3,14,19,20,56)/HLADR組合DC:Lin-/HLADR+DC亞群分析骨髓DC:CD11c+外周血DC:CD123+(IL3Ra)陽性表達(dá)抗原設(shè)門CD85k(ILT3)陽性設(shè)門僅在單核巨噬細(xì)胞及DC細(xì)胞表達(dá)比HLADR表達(dá)更具特異性

避免陰性設(shè)門DifferentiationofDCsubsets:外周血DC:CD123+(IL3Ra)骨髓DC:CD33+第十九頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日ILT3-PEILT3-PECD14+CD16-FITCCD33-PC5CD33-PC51234骨髓DC:CD14CD16/CD85K（ILT3）/CD33第二十頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日ILT3-PEILT3-PECD14+CD16-FITCCD123-PC5CD123-PC5外周血DC:CD14CD16/CD85K（ILT3）/CD123第二十一頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日生物免疫治療

CIK細(xì)胞(cytokine-inducedkiller)是一群以CD3+T細(xì)胞為主的異質(zhì)性細(xì)胞群體，包括CD3+CD56-、CD3-CD56+及CD3+CD56+三種亞群,主要效應(yīng)細(xì)胞為CD3+CD56+細(xì)胞。

CIK細(xì)胞來源于外周血中的CD4-CD8+及CD4-CD8-T細(xì)胞。因其同時(shí)表達(dá)CD3和CD56兩種膜蛋白分子，故兼有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性和NK細(xì)胞非MHC限制性殺瘤特點(diǎn)，是目前所知?dú)钚宰顝?qiáng)的一種免疫效應(yīng)細(xì)胞。第二十二頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日CIK細(xì)胞治療過程的評價(jià)治療前病人免疫狀況評價(jià)T亞群、NK、CIK、細(xì)胞因子是否適合做、能否能培養(yǎng)、值得做CIK采集MNCMNC數(shù)目、純度、T亞群、NK、CIK數(shù)目及比例是否達(dá)到培養(yǎng)要求、調(diào)節(jié)細(xì)胞數(shù)MNC數(shù)目、T亞群、NK、CIK數(shù)目及比例、CD3、CD8活化狀況培養(yǎng)培養(yǎng)是否達(dá)標(biāo)、回輸時(shí)機(jī)回輸后T亞群、NK、CIK、細(xì)胞因子療效評價(jià)、監(jiān)測、下次治療的時(shí)機(jī)CIK治療程序FCM檢測項(xiàng)目意義第二十三頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日CIK治療前患者的免疫功能評價(jià)評價(jià)的項(xiàng)目免疫功能六項(xiàng)：CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、NK、CIKTh1/Th2細(xì)胞因子

第二十四頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日FCM檢測的方法

免疫功能六項(xiàng)試劑：CD45/CD4/CD8/CD3、CD3/CD56/CD45

標(biāo)本類型：外周抗凝血評價(jià)的指標(biāo)：CD3%、CD4%、CD8%、NK%、CIK%（也可以做絕對計(jì)數(shù)）第二十五頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日評價(jià)的意義1、CIK治療的適應(yīng)癥：除外T細(xì)胞相關(guān)腫瘤、有可見包塊2、是否適合做3、能否培養(yǎng)4、值不值得做第二十六頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日腫瘤細(xì)胞免疫特點(diǎn)CD3CD4CD8CD4/CD8NKCIK正常正常正常正常正常正常正常正常正常正常正常第二十七頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日采集物評價(jià)（培養(yǎng)體系）評價(jià)的項(xiàng)目

MNC數(shù)目、純度、T亞群、NK、CIK數(shù)目及比例FCM方法評價(jià)評價(jià)的意義是否達(dá)到培養(yǎng)要求、調(diào)節(jié)細(xì)胞數(shù)第二十八頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日培養(yǎng)中的監(jiān)測評價(jià)的項(xiàng)目1.MNC數(shù)目、T亞群、NK、CIK數(shù)目及比例、CD3、CD8活化狀況2.培養(yǎng)體系中的細(xì)胞因子水平3.CIK細(xì)胞質(zhì)量：壞死、凋亡狀況評價(jià)方法：FCM評價(jià)的意義：培養(yǎng)是否達(dá)標(biāo)、回輸時(shí)機(jī)第二十九頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期日確定回輸時(shí)間及培養(yǎng)物是否達(dá)到要求:CIK細(xì)胞一般在7-9天要求:

CD3細(xì)胞大于90%

CD8細(xì)胞大于60%

CIK細(xì)胞0.5