大豆胞囊線蟲種群動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程

PAGE1大豆胞囊線蟲種群動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了大豆胞囊線蟲（HeteroderaglycinesIchinohe.）生理小種鑒定和種群動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)方法，包括田間取樣點(diǎn)選取、大豆胞囊線蟲病土盆栽鑒定技術(shù)的術(shù)語(yǔ)和定義、大豆胞囊線蟲的繁殖以及大豆胞囊線蟲病土的保存本標(biāo)準(zhǔn)適用于大豆胞囊線蟲生理小種鑒定和種群動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T3543農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程GB/T4404.2糧食作物種子第2部分：豆類NT/T3114.1大豆抗蟲性鑒定技術(shù)規(guī)范第1部分NY/T3059-2016大豆抗胞囊線蟲鑒定技術(shù)規(guī)程DB14/T1613-2018大豆種質(zhì)資源抗胞囊線蟲鑒定技術(shù)規(guī)程DB23/T018大豆生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程術(shù)語(yǔ)和定義NY/T3059-2016界定的及下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。雌蟲指數(shù)（Femaleindex，F(xiàn)I）：FI=各鑒別寄主根上雌蟲數(shù)/對(duì)照品種Lee根上雌蟲數(shù)×1003.2出現(xiàn)頻率（occurrencefrequency）大豆胞囊線蟲種群內(nèi)各生理小種出現(xiàn)的頻率。計(jì)算公式：生理小種的出現(xiàn)頻率=該生理小種出現(xiàn)的樣本數(shù)/調(diào)查總樣本數(shù)×100%3.3優(yōu)勢(shì)小種（dominantrace）田間為害的大豆胞囊線蟲多小種混合發(fā)生的種群內(nèi)出現(xiàn)頻率最高的生理小種。3.4種群動(dòng)態(tài)（populationdynamics）大豆胞囊線蟲種群內(nèi)生理小種組成及各小種出現(xiàn)頻率的變化、優(yōu)勢(shì)小種的更迭。3.5種群監(jiān)測(cè)（populationmonitoring）以春播作物生產(chǎn)年為單位，逐年統(tǒng)計(jì)地域性生產(chǎn)區(qū)內(nèi)每年大豆胞囊線蟲各生理小種出現(xiàn)的類別和頻率。3.6鑒別寄主（differentialhosts）采用AMGolden（1971）使用的國(guó)際通用標(biāo)準(zhǔn)大豆胞囊線蟲生理小種鑒定的鑒別寄主大豆品種：Lee、Peking、Pickett、PI88788和PI90763。3.7生理小種鑒定標(biāo)準(zhǔn)待測(cè)的土壤中線蟲小種的判斷，按照Riggs（1991）給出的大豆胞囊線蟲生理小種鑒定表進(jìn)行確定，按照平均單株根系形成的胞囊數(shù)占對(duì)照大豆品種Lee根系上形成的胞囊數(shù)的百分率，來確定鑒別寄主上的反應(yīng)，大于等于10%的記作“+”，小于10%的記作“-”。試劑、材料和儀器設(shè)備NY/T3059-2016界定的及下列材料和設(shè)備適用于本文件。4.1體式顯微鏡用于觀察病土樣本中的胞囊、孵化出的2齡幼蟲。4.2標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)篩標(biāo)準(zhǔn)篩一套，用于線蟲胞囊的過濾。田間取樣5.1田間取樣點(diǎn)選擇在目標(biāo)采樣地區(qū)，按行政區(qū)劃，每縣（市）選擇5個(gè)或5個(gè)以上有代表性的鄉(xiāng)鎮(zhèn)，每鄉(xiāng)鎮(zhèn)采集5-7個(gè)當(dāng)年或者上一年發(fā)過病的地塊，每地塊間隔在3km以上。5.2田間取樣時(shí)期病土取樣可選擇春播前或秋收后。春播前取土的有效土樣可立即進(jìn)行生理小種鑒定；秋收后取土的有效土樣則需要室外低溫保存。對(duì)于胞囊量不達(dá)標(biāo)的土樣可以采取人工淘取部分土樣的胞囊，回接至該土樣，以達(dá)到有效土樣標(biāo)準(zhǔn)。5.3田間取樣方法每地塊采用“Z”字形取樣法，取樣10-20點(diǎn)。先剝離5cm地表層土壤，在大豆根際向下層取土15cm深，每點(diǎn)取土量為1000g，所有點(diǎn)取土樣后混合均勻，記作1份土樣，總樣本重量要>10kg，并標(biāo)記好采集樣本相關(guān)信息（見附錄1）。5.4檢驗(yàn)取樣土的有效性土樣取回后，每樣品均稱取100g風(fēng)干土，在室內(nèi)統(tǒng)計(jì)土樣的胞囊檢出率。其中，胞囊檢出率≥35的土樣為有效土樣；胞囊檢出率≥50的土樣，鑒定效果更佳。5.5取樣土保存對(duì)于秋收后取回的胞囊量不達(dá)標(biāo)的土樣，可以采取兩種方式進(jìn)行補(bǔ)充胞囊。一種方式是人工淘取部分土樣的胞囊，回接至該土樣，以達(dá)到有效土樣標(biāo)準(zhǔn)；另一種方式是在溫室里向其內(nèi)播種感病大豆，促進(jìn)大豆胞囊線蟲的繁殖世代，增加取樣土的胞囊存有量，為春季生理小種鑒定做準(zhǔn)備。病土鑒定圃設(shè)置6.1病土鑒定圃基質(zhì)配置按照接種土：沙子=4:1的比例混合均勻。細(xì)沙子過20目，使用之前需高壓滅菌處理。6.2播種將混合好的病土平均分裝到15個(gè)接種盆內(nèi)（直徑12cm，高15cm），病土填裝深度為12cm，播種后，覆土2cm，播種后澆足水，并實(shí)時(shí)觀察種子萌發(fā)破土情況。6.3病土鑒定圃的小區(qū)設(shè)置每份土樣、每鑒別寄主播種5盆。每盆播種5粒鑒別寄主種子，出苗后，選取長(zhǎng)勢(shì)一致的大豆苗，留苗3株。說明：矩形框表示每份土樣試驗(yàn)區(qū)；實(shí)線表示同一份土樣、同一個(gè)鑒別寄主的3次重復(fù)；圓圈圖形表示每個(gè)盆栽處理。圖1病土盆栽鑒定圃配置示意圖6.3播種后管理播種在室外盆栽場(chǎng)的鑒定圃，采用和XX一致的田間管理方式，根據(jù)不同天氣，適時(shí)人工補(bǔ)水，三出復(fù)葉長(zhǎng)出后，適當(dāng)控水；播種在溫度、濕度以及光照等條件可控的溫室里，則按照濕度50-60%、溫度26-28℃、光照16h的條件智能管理。6.4調(diào)查播種28～35d后，在第一代發(fā)病的顯囊盛期扣盆，調(diào)查鑒別寄主根上寄生的雌蟲數(shù)，計(jì)算出雌蟲指數(shù)（FI），F(xiàn)I≥l0，則為“+”級(jí)；FI<10，則為“一”級(jí)。將各種群的反應(yīng)型與Riggs等的標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)照確定其生理小種。對(duì)照生理小種在各鑒別寄主上的反應(yīng)（附錄1），