血細胞分析的質(zhì)量控制

血細胞分析的質(zhì)量控制2009.10.201第一頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.202ISO15189的技術(shù)要素部分將醫(yī)學(xué)實驗室全過程分為三部分:分析前質(zhì)量管理分析中質(zhì)量管理分析后質(zhì)量管理第二頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一臨床醫(yī)師反饋信息參加室間質(zhì)評室內(nèi)質(zhì)控實驗用復(fù)檢檢查儀器設(shè)備血細胞分析儀的性能驗證配套試劑方法選擇人員五素質(zhì)思想、文化技術(shù)、心理身體。人員穩(wěn)定性工作環(huán)境安靜、整潔實驗室管理室內(nèi)復(fù)核保留標本運送報告登記填寫報告分析后質(zhì)量評估分析中質(zhì)量控制分析前質(zhì)量保證檢查病人申請化驗病人準備標本采集標本處理標本運送分析測定實驗質(zhì)量保證系統(tǒng)實驗質(zhì)量保證系統(tǒng)2009.10.203第三頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一1

分析前的質(zhì)量控制標本采集的質(zhì)量控制采血試管：目前多采用真空采血管?？鼓齽┘氨壤篍DTA－K2，l.5mg可抗凝0.5~15ml血液，抗凝劑濃度過高，易造成細胞外液高滲狀態(tài)，影響細胞的正常形態(tài)?？鼓齽舛冗^低，起不到抗凝作用，血液中易產(chǎn)生凝塊。采血：采用靜脈血。采血后標本的處理及放置時間2009.10.20第四頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.205儀器工作環(huán)境無塵無磁場靜電干繞15~30度第五頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2分析中的質(zhì)量控制試劑儀器室內(nèi)質(zhì)量控制儀器運行狀態(tài)糾正病理因素對結(jié)果干擾2009.10.206第六頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一血細胞分析儀的校準血液分析儀校準的一般要求血細胞分析儀的性能驗證校準物校準方法多臺血細胞分析儀校準多臺血細胞分析儀比對2009.10.207第七頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一血液分析儀校準的要求為了保證檢測結(jié)果的準確性，要求對每一臺血液分析儀進行校準。儀器安裝時必須由廠家進行校準并提供校準記錄，否則不能用于臨床標本的檢測。建立適合本實驗室使用的血液分析校準程序并寫成文件。內(nèi)容包括：使用校準物的溯源性、來源、名稱及其保存方法；校準的具體方法和步驟；何時要求進行校準、由何人負責實施等。半年內(nèi)至少進行一次校準。若儀器發(fā)生故障，大修或大保養(yǎng)后儀后、室間室內(nèi)質(zhì)控超出范圍提示有系統(tǒng)誤差時應(yīng)及時進行校準。2009.10.208第八頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一血細胞分析儀的性能驗證精密度

指重復(fù)測定中個次試驗結(jié)果彼此接近程度。常用

不精密度即標準差（SD）或變異系數(shù)（CV）來表示，

評價時應(yīng)注意用高、中、低新鮮全血進行評價。攜帶污染率

指含量高的標本對含量低的樣本所產(chǎn)生的影響。

總重復(fù)性隨機取樣本20份，分即刻、2小時及4小時測定，統(tǒng)計學(xué)分析。2009.10.20第九頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2010線性范圍測定定值與稀釋倍數(shù)成線性關(guān)系。范圍越廣越理想，至少涵蓋正常范圍及常見的病理范圍。儀器的參考范圍驗證靜脈與手指血、自動與手動模式驗證第十頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一白細胞分類評價重復(fù)性：多次測定同一份血液標本是否得到非常近似的結(jié)果。取一份抗凝靜脈血，重復(fù)測定11次，棄去第一次，計算CV值。準確性：即與“金標準”顯微鏡下分類結(jié)果的相關(guān)程度。取靜脈血10份進行儀器測定，重復(fù)2次，取均值。同時推4張血片，選4個素質(zhì)好技術(shù)水平高的技師，每人每片油鏡分類200個細胞，共計800個白細胞，計算均值，與儀器進行相關(guān)性比較。2009.10.2011第十一頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一校準物

校準物的來源

來自本儀器的配套校準物。來自正常人新鮮血，但定值要求直接或間接地

溯源至國際標準。

新鮮血作為校準物的定值

直接溯源至國際標準的定值方法：可使用血細

胞分析的參考方法定，但要求建立參考方法的

難度較大，在臨床實驗室難以實施。間接溯源至國際標準的定值方法：取新鮮血用

二級標準檢測系統(tǒng)或規(guī)范操作的檢測系統(tǒng)。2009.10.20第十二頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2013二級標準檢測系統(tǒng)：直接溯源至參考方法；具備較完善的質(zhì)量保證措施；與國外具有權(quán)威性的參考實驗室定期進行比對的檢測系統(tǒng)。規(guī)范操作的檢測系統(tǒng)：使用配套試劑；用配套校準物定期進行儀器校準；規(guī)范地開展室內(nèi)質(zhì)量控制；參加室間質(zhì)量評價成績優(yōu)良；人員經(jīng)過培訓(xùn)。第十三頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2014校準物的選擇有證標準物質(zhì)儀器配套校準物新鮮血作為校準物無配套校準物檢測系統(tǒng)的實驗室必須使用新鮮全血進行儀器校準第十四頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一校準方法儀器的準備清洗儀器內(nèi)部各通道及測試室。確認儀器的背景計數(shù)、精密度及攜帶污染在說明書規(guī)定的范圍內(nèi)時，才可進行校準，否則須查找原因，必要時請維修人員進行檢修。2009.10.2015第十五頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2016校準物的準備配套校準物

①將校準物從冰箱內(nèi)（2-8℃）取出后，要求在室溫（18-25℃）條件下放置15分鐘，使其溫度恢復(fù)至室溫。②檢查校準物是否超出效期，是否有變質(zhì)或污染。③輕輕地將校準物反復(fù)顛倒混勻，并置于兩手掌慢慢

搓動，使校準物充分混勻。④將兩瓶校準物合一起，混勻后再分裝于2個瓶內(nèi)。

第十六頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一新鮮全血①用EDTA-K2為抗凝劑的真空采血管取健康人新鮮血10ml，每ml血需抗凝劑的濃度為1.5-2.2mg/ml。要求新鮮全血的Hb、WBC、RBC、Hct和Plt檢測結(jié)果在參考范圍內(nèi)。將新鮮血混勻后分裝于3個管內(nèi)，每管的血量為3ml。②取其中1管，用二級標準檢測系統(tǒng)或規(guī)范操作的檢測系統(tǒng)連續(xù)檢測11次，計算第2-11次檢測結(jié)果的均值，以此均值為新鮮血的定值。③其他2管新鮮血作為定值的校準物，用于儀器的校準。2009.10.2017第十七頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2018對校準物進行檢測取1瓶校準物，連續(xù)檢測11次，第1次檢測結(jié)果不用，以防止攜帶污染。儀器若無自動校準的功能，則將第2~11次的各項檢測結(jié)果用手工記錄在工作表格中，計算出均值，均值的小數(shù)點后數(shù)字保留位數(shù)較日常報告結(jié)果多一位。有自動校準功能的儀器可直接得出均值。第十八頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2019調(diào)整儀器計算各參數(shù)的均值與定值相差的百分數(shù)（不計正負號），計算公式：（均值-定值）/定值×100%參數(shù)百分數(shù)差異一列二列WBC

1.5%

10%RBC1.0%10%Hb1.0%

10%Hct

2.0%10%MCV

1.0%10%Plt3.0%15%第十九頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2020各參數(shù)均值與定值的差異全部等于或小于表中的第一列數(shù)值時，不需對儀器進行調(diào)整；各參數(shù)均值與定值的差異大于表中的第二列數(shù)值時，需請維修人員核查原因并進行處理；各參數(shù)均值與定值的差異在表中第一列與第二列數(shù)值之間時，需對儀器進行調(diào)整；若儀器無自動校準功能，則將定值除以所測均值，求出校準系數(shù)，將儀器原來的系數(shù)乘以校準系數(shù)即為校準后的系數(shù)，將校準后的系數(shù)辦事入儀器更換原來的系數(shù)。第二十頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2021校準結(jié)果的驗證將第2管未用的校準物充分混勻，在儀器上重得檢測11次，去除第1次結(jié)果，計算第2-11次檢測結(jié)果的均值，再次與表中的數(shù)值對照。如各參數(shù)的差異全部等于或小于第一列數(shù)值，證明校準合格。如達不到要求，須請維修人員進行檢修。第二十一頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一血液分析儀校準品定值完成比較一致偏倚校準不一致2009.10.2022第二十二頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一多臺血細胞分析儀校準

標本取健康人靜脈血，用EDTA-K2抗凝，其在血液中的終濃度為1.5~2.0mg/ml全血。將血液在一容器中混勻后分裝成三份。

第一份用于定值

第二份用于校準

第三份用于校準后驗證

標本室溫存放并于四小時內(nèi)完成。2009.10.2023新鮮全血的定值第二十三頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2024方法參比儀器

血細胞儀開機清洗，本底通過后，取全血質(zhì)控品（非校準物）在各臺儀器上連續(xù)測定11次（第一次結(jié)果棄掉），計算儀器第2-11次WBC、RBC、HGB、MCV、PLT結(jié)果的均值，以此作為新鮮全血WBC、RBC、HGB、MCV、PLT的定值。第二十四頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2025新鮮全血的定值取第一份新鮮全血經(jīng)充分混勻后參比血細胞儀重復(fù)測定11次，計算儀器第2-11次WBC、RBC、HGB、MCV、PLT結(jié)果的均值，以此作為新鮮全血WBC、RBC、HGB、MCV、PLT的定值。待校準血細胞分析儀的校準取第二份新鮮全血經(jīng)充分混勻后，在另外待校準血細胞儀上重復(fù)測定11次，計算各儀器第2-11次WBC、RBC、HGB、MCV、PLT結(jié)果的均值及與新鮮全血的定值的偏差。第二十五頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2026計算公式為：偏差=（均值-靶值）/靶值×100%。按以下標準判斷儀器判斷儀器是否需要校準計算需要校準參數(shù)的校準系數(shù)，將新的校準系數(shù)輸入儀器替換舊校準系數(shù)。校準系數(shù)的計算公式為：新校準系數(shù)=原校準系數(shù)×(靶值/儀器檢測值)第二十六頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2027校準結(jié)果的驗證

取第三份新鮮全血，在被定值校準的血細胞儀上重復(fù)測定11次，計算第2-11次結(jié)果的均值及與定值的偏差，檢查結(jié)果其結(jié)果是否在允許范圍內(nèi)。判別儀器校準的標準參數(shù)WBCRBCHGBHCTMCVPLT百分數(shù)差異一列(%)1.5%1.0%1.0%2.0%1.0%3.0%二列(%)10%10%10%10%10%15%第二十七頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一多臺血細胞分析儀比對儀器比對的目的是通過多臺儀器同時檢測一批患者樣本，用統(tǒng)計學(xué)方法對測定結(jié)果進行統(tǒng)計分析，了解儀器對患者樣本檢測結(jié)果誤差（偏倚），并判斷誤差是否在臨床允許范圍內(nèi)。2009.10.2028第二十八頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2029儀器比對的基本要求選擇一臺性能最好的儀器作為本室的“參比儀器”確定比對頻率（至少半年一次）確定選擇新鮮全血要求確定比對測定方法確定誤差（偏倚）的允許范圍對比對數(shù)據(jù)做統(tǒng)計處理第二十九頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2030簡易比對方法：首先選擇一臺本實驗室內(nèi)技術(shù)性能較好的血球儀，該儀器應(yīng)使用配套的校準物定期校準，每天有配套質(zhì)量控制系統(tǒng)監(jiān)控，并參加室間質(zhì)評活動，各項目均在可接受性能范圍之內(nèi)。其他儀器分別與該儀器比較。隨機選擇一份新鮮全血樣同時用各儀器按常規(guī)樣本測定的方法，測定其各項參數(shù)，每份樣本測定2次。第三十頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2031計算(按PT計算方法計算偏倚)

PT計算公式：

（參比測定值-比對測定值）/參比測定值×100%統(tǒng)計做圖做散點圖，轉(zhuǎn)換成線性圖，得出斜率b；截距a。并計算比對儀器對于確定儀器預(yù)期偏差估計值（Bc）。第三十一頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2032Bc=a+(b-1)Xc。

Xc臨床參考范圍的上、下限水平處斜率b

表示兩儀器間測定標本時的比例誤差截距a

表示兩儀器間測定標本時的恒定誤差b逾接近1、a逾接近０逾好第三十二頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2033標準比對方法（按EP-9文件）選擇一臺本實驗室內(nèi)技術(shù)性能較好的血球儀，該儀器應(yīng)使用配套的校準物定期校準，每天有配套質(zhì)量控制系統(tǒng)監(jiān)控，并參加室間質(zhì)評活動，各項目均在可接受性能范圍之內(nèi)。其他儀器分別與該儀器比較。第三十三頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2034每日隨機選取8份樣品（其中應(yīng)包括高、中、低值），同時用各臺儀器按常規(guī)樣本測定的方法，測定順序為1.2.3.4.5.6.7.8.8.7.6.5.4.3.2.1。以上步連續(xù)測定5天。共40個樣本。記錄與統(tǒng)計將每日結(jié)果記錄，分別統(tǒng)計兩臺儀器40份樣本雙份測定的平均值、絕對值、兩臺儀器測定的平均值。第三十四頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2035制圖（線性相關(guān)的目測檢查）通過以上所作的圖分析，如果兩方法間的線性關(guān)系良好，則可以進行以下的分析；如果線性關(guān)系不好，則需重新進行分析。方法間離群點的檢查參照EP9-A的方法計算方法間絕對差值（Eij）、平均絕對差值（E）和相對的絕對差值（Eij’）、相對的平均絕對差值（E‘）。如果同時超過E、E’值的四倍即絕對偏差界限值和相對偏差界限值稱為離群點。大于界限2.5%的數(shù)據(jù)應(yīng)從數(shù)據(jù)系列中取消。第三十五頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2036線性回歸

EP9-A文件提供了成對數(shù)據(jù)系列（Yij-Xij）斜率b、截距a的計算。本室在實際計算時將數(shù)據(jù)錄入EXCEL

軟件進行自動處理計算。計算預(yù)期偏差第三十六頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2037結(jié)果分析如果兩儀器間的結(jié)果比對符合要求則可以正常的發(fā)出實驗結(jié)果，如果比對結(jié)果不符合，則應(yīng)采取相應(yīng)的措施來調(diào)整。第三十七頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一血細胞分析儀的室內(nèi)質(zhì)控室內(nèi)質(zhì)控的目的

維持校準后儀器的準確性控制儀器的精密度適時監(jiān)控判斷常規(guī)結(jié)果能否發(fā)出2009.10.2038第三十八頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2039室內(nèi)質(zhì)控的要求確定所用質(zhì)控物；質(zhì)控物保存和處理方法；確定質(zhì)控物使用頻率；確定質(zhì)控物的靶值和允許范圍；記錄質(zhì)控數(shù)據(jù)并繪制質(zhì)控圖；分析失控原因采取糾正措施；回顧性分析；記錄和保存質(zhì)控數(shù)據(jù)。第三十九頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2040質(zhì)控物的選擇最好選擇配套質(zhì)控物。無配套質(zhì)控物的可用國產(chǎn)質(zhì)控物。有多臺儀器實驗室可選擇一臺儀器用配套質(zhì)控品進行質(zhì)控，其他儀器通過每天新鮮血比對達到質(zhì)量控制的目的。利用臨床樣本開展浮動均值法的質(zhì)控。第四十頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2041質(zhì)控物的保存和處理方法質(zhì)控物應(yīng)置2~8℃保存（冰箱溫度應(yīng)監(jiān)控）。用時從冰箱中取出，在室溫下放置15分鐘。測定前用正確手法充分混勻。測定后盡快放回冰箱冷藏。均值的確定質(zhì)控物的廠家定值不可以作為靶值，使用新批號質(zhì)控物時，應(yīng)在3天內(nèi)的不同時間與現(xiàn)批號質(zhì)控物平行3天對質(zhì)控物測定20次，在舊批號質(zhì)控物每日測定均在控情況下，計算測定結(jié)果的均值作為靶值。第四十一頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2042允許范圍的確定允許范圍的確定根據(jù)使用的質(zhì)控物不同而略有不同。配套質(zhì)控物開展室內(nèi)質(zhì)控初期，實驗室可暫定允許范圍。第2個月用第1個月相應(yīng)水平的CV值乘以質(zhì)控物的靶值，可得出SD值；以后用幾個月相應(yīng)水平的平均CV乘以質(zhì)控物的靶值，則可得出平均SD，以此來確定質(zhì)控的允許范圍。第四十二頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2043國產(chǎn)質(zhì)控物，第1個月用定靶值測定的SD，以后用前1月SD或前2月平均SD。以±2SD作為警告限，±3SD為失控限。不能用說明書上的質(zhì)控物測定范圍。第四十三頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2044失控結(jié)果的判定如果測定結(jié)果在失控線（±3SD）以外，則為失控，應(yīng)立即查找原因，必要時復(fù)查標本方可發(fā)出報告。如果測定結(jié)果在警告線（±2SD）外，提示警告，應(yīng)引起注意繼續(xù)觀察。如5個測定結(jié)果在X的一側(cè)，提示存在系統(tǒng)誤差，應(yīng)積極查找原因，但當天報告一般可以發(fā)出。第四十四頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一失控后的處理措施當?shù)玫绞Э匦盘枙r首先應(yīng)分析造成失控的誤差類型是隨機誤差還是系統(tǒng)誤差，然后再找出誤差產(chǎn)生的原因，造成系統(tǒng)誤差的因素如更換試劑批號，環(huán)境溫度影響，儀器半堵孔，Hb燈電壓低等等；造成隨機誤差的因素如氣泡產(chǎn)生、電壓不穩(wěn)、質(zhì)控物未混勻等。不是所有失控都具有相同的誤差原因，有些問題在某系統(tǒng)上常見，在其他系統(tǒng)上很少出現(xiàn)，每個實驗室應(yīng)依據(jù)不同儀器的特性和使用經(jīng)驗按照由常見至少見，由易至難的原則制定出失控處理程序，并不斷修改完善。2009.10.2045第四十五頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2046找出問題并糾正后重新測定質(zhì)控品確認問題是否解決，必要時重新測定病人標本。填寫失控報告并存檔。第四十六頁，共五十頁，編輯于2023年，星期一2009.10.2047室內(nèi)質(zhì)控的回顧性分析室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)的回顧分析可以幫助我們判斷誤差的來源，然后根據(jù)它們不同的特點采取相應(yīng)的措施加以糾正