吸光光度法的靈敏度與準(zhǔn)確度

吸光光度法的靈敏度與準(zhǔn)確度1第一頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二例1鄰二氮菲光度法測鐵

(Fe)=1.0mg/L,b=2cm,A=0.38

計(jì)算和解：c(Fe)=1.0mg/L=1.0×10-3/55.85=1.8×10-5mol/L2第二頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二c=1.0mg/L=1.0×10-3g/1000mL=1.0×10-4g/100mL3第三頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二二.準(zhǔn)確度—儀器測量誤差光度計(jì)的讀數(shù)誤差一般為0.2～2％(ΔT),由于T與濃度c不是線性關(guān)系，故不同濃度時的ΔT引起的誤差不同。100806040200T%

c1

c2

c3

T

T

T-透光率讀數(shù)誤差

cc1c1c2c2c3c3><4第四頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二1086420204060800.70.40.20.1AT%Er(36.8)0.434濃度測量的相對誤差與T(或A)的關(guān)系實(shí)際工作中，應(yīng)控制T在10～70％,

A在0.15～1.0之間(調(diào)c,b,)5第五頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二8.4顯色反應(yīng)與分析條件的選擇：：：：助色團(tuán)－NH2，－OH，－X（孤對電子）ne8.4.1顯色劑與顯色反應(yīng)O生色團(tuán)：－N＝N－，－N＝O，OC=S,－N（共軛雙鍵）πe無機(jī)顯色劑:SCN-

[Fe(SCN)]2+H2O2

[TiO·H2O2]2+有機(jī)顯色劑:6第六頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二有機(jī)顯色劑

CH3－C－C－CH3HO－NN－OH＝＝NNOHCOOHSO3HOO型：NNNOH

OHON型：PARNHNHNSNS型：雙硫腙NN型：丁二酮肟鄰二氮菲磺基水楊酸7第七頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二顯色反應(yīng)的選擇*靈敏度高，一般ε>104*選擇性好*顯色劑在測定波長處無明顯吸收。

對照性好,λmax>60nm.*反應(yīng)生成的有色化合物組成恒定，穩(wěn)定。*顯色條件易于控制，重現(xiàn)性好。8第八頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二8.4.2顯色條件的確定c(R)c(R)c(R)1.顯色劑用量（c(M)、pH一定）Mo(SCN)32+淺紅Mo(SCN)5橙紅Mo(SCN)6-淺紅Fe(SCN)n3-n9第九頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二2.顯色反應(yīng)酸度（c(M)、c(R)一定）pH1<pH<pH2pH10第十頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二鄰二氮菲－亞鐵反應(yīng)完全度與pH的關(guān)系Fe2++3RH＋H＋A檸檬酸c(R)≈[R′]=10-4mol·L-1β3＝1021.3β3FeR311第十一頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二pH3～8為適宜的酸度范圍12第十二頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二3.顯色溫度及顯色時間另外，還有介質(zhì)條件、有機(jī)溶劑、表面活性劑等T1(℃)T2(℃)t(min)A13第十三頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二8.4.3干擾及消除Co2＋,Fe3+Co2+FeF63-Co(SCN)2(藍(lán))⑴NaFSCN－Co2+Fe2+,Sn4+(2)Sn2+Co(SCN)2SCN－測Co2＋(含F(xiàn)e3+):(掩蔽法)1.化學(xué)法14第十四頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二Co2+,Zn2+,Ni2+,Fe2+

CoR,ZnRNiR,FeRCoR,Zn2+

,Ni2+

,Fe2+

鈷試劑RH+測Co2＋:(生成絡(luò)合物性質(zhì)不同)如不能通過控制酸度和掩蔽的辦法消除干擾，則需采取分離法。測Fe3＋:(控制pH)Fe3+,Cu2+FeSS（紫紅）Cu2+pH2.5SS15第十五頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二2.物理法—選擇適當(dāng)?shù)臏y定波長515655415500釷-偶氮砷III

鈷-亞硝基紅鹽

AA絡(luò)合物絡(luò)合物試劑試劑16第十六頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二1.僅絡(luò)合物有吸收，溶劑作參比。

如phen—Fe2+標(biāo)準(zhǔn)曲線2.待測液也有吸收，被測液作參比。

如測汽水中的Fe3.顯色劑或其他試劑也有吸收，空白溶液作參比

例:鄰二氮菲光度法測Li2CO3中的Fe，參比溶液為不含Li2CO3樣品的所有試劑。4.干擾組分與顯色劑有反應(yīng),又無法掩蔽消除時：1）掩蔽被測組分，再加入顯色劑，作參比.2）加入等量干擾組分到空白溶液中,作參比.

--選擇適當(dāng)?shù)膮⒈热芤?7第十七頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二8.5吸光光度法的應(yīng)用1.單一組分測定1)金屬離子:Fe-phen,Ni-丁二酮肟,Co-鈷試劑2)磷的測定:DNA中含P～9.2%,RNA中含P～9.5%,可得核酸量.H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3=(NH4)3PO4·12MoO3+12NH4NO3+12H2O磷鉬黃(小)磷鉬(V)藍(lán)(大)Sn2+18第十八頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二3)蛋白質(zhì)測定—溴甲酚綠、考馬司亮藍(lán)等4)氨基酸測定—茚三酮(紫色化合物)5)水質(zhì)檢測:NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+----6)藥物含量測定—比吸光系數(shù)定量；荷移光譜法測定.7)紫外吸收(UV):NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白質(zhì)等。19第十九頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二2.多組分的測定

xl1,eyl1,exl2,eyl2由x,y標(biāo)液在1,2處分別測得在1處測組分x,在2處測組分yb)在1處測組分x;在2處測總吸收,扣除x吸收,可求yc)x,y組分不能直接測定

A1=exl1bcx+eyl1bcy(在1處測得A1)

A2=exl2bcx+eyl2bcy(在2處測得A2)20第二十頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二3.光度滴定NaOH滴定對硝基酚pKa=7.15 間硝基酚pKa=8.39pKa=1.24V1V2V(NaOH)/mL對硝基酚間硝基酚酸形均無色.堿形均黃色21第二十一頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二典型的光度滴定曲線依據(jù)滴定過程中溶液吸光度變化來確定終點(diǎn)的滴定分析方法。Vsp滴定劑吸收Vsp被滴物吸收Vsp滴定劑與待測物均吸收Vsp產(chǎn)物吸收22第二十二頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二4.絡(luò)合物組成的測定(1)摩爾比法:固定cM,改變cR

1:13:1c(R)/c(M)A1.02.03,0

23第二十三頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二(2)等摩爾連續(xù)變化法:M:R=1:10.50.33cM/ccM/cM:R=1:224第二十四頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二表觀形成常數(shù)的測定(設(shè)M、R均無吸收)0.5cM/cM:R=1:1A0Ac(M)=c(R)=cMmRn型?25第二十五頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二5.一元弱酸離解常數(shù)的測定p330HLH＋＋LKa＝[H+][L]/[HL]高酸度下，幾乎全部以HL存在，可測得AHL＝εHL·c(HL)；低酸度下，幾乎全部以L存在，可測得AL＝εL·c(HL).代入整理：[HL][L]或配制一系列c相同,pH不同的溶液,測A.26第二十六頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二MO吸收曲線Aa(HL)Ab(L)123456Ab654321Aa350400450500550600/nmA曲線pH11.10,1.3822.6533.0643.4853.9865.53,6.80由每份溶液的一對pH、A，可求得一個Ka,取平均值即可.27第二十七頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二MO離解常數(shù)的測定

作圖法AHL3.32(pKa)123456ApH=pKapHAL0.60.40.20-0.2-0.4-0.63.04.0pH3.3428第二十八頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二6.雙波長分光光度法消除干擾(不要求)在2，A2

=

Ax2+Ay2在1，A1=

Ax1+Ay1A=A2

-

A1

=

Ax2+Ay2

–(Ax1+Ay1)

=

Ax2–Ax1

=AxAy2

＝Ay1Ax=(x2－x1)bcx消除了y的干擾X被測Y干擾211Ay1AX1Ay2AX2A/nm′29第二十九頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二雙波長分光光度法消除渾濁背景干擾12AA

1-A

2=△A

△A∝c例牛奶中微量Fe的測定30第三十頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二7.導(dǎo)數(shù)分光光度法(不要求)A~圖混合物導(dǎo)數(shù)光譜0123431第三十一頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二常藥降壓片中氫氯噻嗪含量的測定1.氫氯噻嗪.2.硫酸雙肼肽嗪3.鹽酸可樂定4.常藥降壓片250290330412312A32第三十二頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二肝中茚滿二酮類抗凝血?dú)⑹髣┑墓滔噍腿》椒ǎ焊蝿驖{用乙腈浸提，浸提液用6％的HClO4稀釋，然后用GDX100大孔樹脂萃取，用二氯甲烷5mL洗脫殺鼠劑，40℃揮干，剩余物用0.1mol·L-1NaOH4mL溶解后，紫外導(dǎo)數(shù)光譜測定。A0.0cdabDa.空白肝普通光譜b.2.5mg/L敵鼠溶液的普通光譜c.空白肝二階導(dǎo)數(shù)光譜d.2.5mg/L敵鼠溶液的二階導(dǎo)數(shù)光譜33第三十三頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期二8.1了解分子對光的吸收與溶液顏色的關(guān)系.吸收曲線—定性分析的基礎(chǔ)。定量分析的基礎(chǔ)—朗