糖化血紅蛋白測(cè)定方法與其在臨床中應(yīng)用課件

糖化血紅蛋白的測(cè)定方法及其在臨床中的應(yīng)用價(jià)值1、糖化血紅蛋白的定義糖化血紅蛋白（GHb）是紅細(xì)胞在生存期間HbA與己糖（主要是葡萄糖）緩慢、持續(xù)且不可逆地進(jìn)行非酶促反應(yīng)的產(chǎn)物。由于HbA所結(jié)合的成分不同，又分為HbA1a（與磷酰葡萄糖結(jié)合）、HbA1b（與果糖結(jié)合）、HbA1c（與葡萄糖結(jié)合），其中HbA1c含量最高，占60%-80%，是目前臨床最常檢測(cè)的部分。

糖化血紅蛋白的測(cè)定結(jié)果以百分率表示，指的是和葡萄糖結(jié)合的血紅蛋白（HbA1c）占全部血紅蛋白的比例。非糖尿病患者的糖化血紅蛋白的水平為4%-6%。

正常成人體內(nèi)的血紅蛋白

HbHbA0HbA1HbA1aHbA1bHbA1cHbA(??)HbA2()HbF()97%0.5%2.5%成人Hb胎兒Hb未糖化糖化6%94%-主要的糖化血紅蛋白

80%A1a和A1b含量極低HbA1c由蛋白的非酶法糖化形成不穩(wěn)定的Schiff（醛亞胺結(jié)構(gòu)）可逆快速穩(wěn)定的HbA1c（醛酮結(jié)構(gòu)）不可逆慢速葡萄糖進(jìn)入紅細(xì)胞后與HBA的?鏈N端纈氨酸殘基縮合?再經(jīng)Amadori

分子重排后2、糖化血紅蛋白的特性（1）糖化血紅蛋白比例高低的決定因素取決于血糖的濃度血糖與血紅蛋白的接觸時(shí)間紅細(xì)胞的存活時(shí)間血糖濃度越高，接觸時(shí)間越長(zhǎng)，HbA1c的比例越大（2）反應(yīng)近2-3個(gè)月的平均血糖水平人體內(nèi)紅細(xì)胞的壽命一般為120天，在紅細(xì)胞死亡前，血液中糖化血紅蛋白含量也會(huì)保持相對(duì)不變。因此糖化血紅蛋白水平反映的是在檢測(cè)前2-3個(gè)月內(nèi)的平均血糖水平。穩(wěn)定性好。糖化血紅蛋白是逐漸生成的，且不易分解，短期內(nèi)的血糖升高或降低，不會(huì)引起糖化血紅蛋白的波動(dòng)，能更好地反映較長(zhǎng)時(shí)間的血糖控制程度。（3）可以隨機(jī)抽血進(jìn)行檢測(cè)，簡(jiǎn)便易行，可重復(fù)性好。

HbA1c的測(cè)定方法通常分為兩大類：一類是基于GHb和Hb的電荷不同，如離子交換層析法、電泳法。另一類是基于Hb上糖化基團(tuán)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，如親和層析法、免疫法和酶法等。電泳法與離子交換層析法一樣也是基于糖化和非糖化的Hb所帶的電荷不同進(jìn)行分離。此法精密度高，但分析時(shí)間較長(zhǎng)。親和層析法基于糖化和非糖化Hb結(jié)構(gòu)不同進(jìn)行分析的。除外HbA1c外，血液中的其他糖化的Hb也可與親和物結(jié)合，因此該方法的檢測(cè)結(jié)果為GHb總量，而不是HbA1C含量免疫法可在全自動(dòng)生化分析儀上用免疫抑制比濁法測(cè)定HbAlc水平。具有良好的精密度和抗干擾能力。酶法原理是在蛋白酶的作用下，切斷HbAlc的β鏈N末端的糖化二肽，糖化二肽在果糖基肽氧化酶的作用下生成過氧化氫，在過氧化氫酶的作用下與顯色劑產(chǎn)生顯色反應(yīng)，通過測(cè)定吸光度求出定HbAlc的百分?jǐn)?shù)。床旁檢驗(yàn)或快速檢驗(yàn)（POCT）有2種方法，一種是利用硼酸親和原理在顏色反射計(jì)上進(jìn)行檢測(cè)。HbAlc特異性地與硼酸復(fù)合物結(jié)合呈藍(lán)色，而未糖化Hb呈紅色，通過兩者光強(qiáng)度的比例計(jì)算。另一種是基于免疫反應(yīng)原理在熒光分析儀上檢測(cè)含HbAlc的熒光染料分子的斑點(diǎn)數(shù)，換算成HbAlc的數(shù)值。此方法便攜、快速，但精密度較其他方法要差。離子交換色譜法

葡萄糖與血紅蛋白?鏈N端纈氨結(jié)合后等電點(diǎn)降低，導(dǎo)致糖化的Hb所帶的正電荷比未糖化的Hb少，與樹脂的附著力小，可分別用不同離子強(qiáng)度的緩沖液在不同時(shí)間將Hb從陽離子交換柱中洗脫下來，再根據(jù)峰值下面積來計(jì)算HbAlc占總Hb的比例。目前臨床上較常采用高效液相色譜法（HPLC）和低壓液相色譜（LPLC），HPLC被國際上列為測(cè)定HbAlc的參考方法。干擾因素1.

Hb的變異體對(duì)HbAlc測(cè)定的影響常見的變異體有HbF即Hb的?鏈由γ鏈替代：如地中海貧血、鐮狀細(xì)胞病患者。還如HbS、HbC、HbE等。Hb的變異體會(huì)隨著HbAlc一起洗脫而影響HbAlc的測(cè)定值。2.

Hb的化學(xué)修飾產(chǎn)物最常見的是氨基甲?；疕b(腎病患者)和乙酰化Hb(接受阿司匹林治療者)。氨甲酰化為高濃度尿素在體內(nèi)形成異氰酸,結(jié)合到HbN末端氨基酸上，形成氨基甲酰血紅蛋白。其與HbAlc的等電點(diǎn)相似，使得HbAlc測(cè)定結(jié)果假性升高。有關(guān)報(bào)道，此法測(cè)定HbAlc時(shí)，如果尿素濃度超過17mmol/L，每升高1mmol/L會(huì)使測(cè)定值升高0.04%。另外腎病患者常伴有貧血,紅細(xì)胞壽命縮短,在解釋檢測(cè)結(jié)果時(shí)，要綜合考慮。3.紅細(xì)胞生存期的改變當(dāng)患有溶血、失血性貧血等時(shí)，紅細(xì)胞代謝加快，HbAlc值通常下降。缺鐵性貧血時(shí)，衰老的紅細(xì)胞所占的比例增高，HbAlc值會(huì)假性增高。全自動(dòng)糖化血紅蛋白測(cè)定裝置

ADAMSTMA1c

HA-8160HA-8160的技術(shù)參數(shù)

測(cè)定對(duì)象：全血測(cè)定項(xiàng)目：

HbA1c、HbA1、HbF及圖樣測(cè)定原理：

逆相分離陽離子交換層析柱樣本使用量：

約4uL（全血樣本）樣本容器：采血管（EDTA，NaF、肝素）必須樣本量：采血管1mL

HA-8160的特點(diǎn)

HPLC法：

高速分離穩(wěn)定性HbA1c，特異性強(qiáng)、精密度高。自動(dòng)去除不穩(wěn)定性HbA1c同時(shí)測(cè)定HbA1、HbF能發(fā)現(xiàn)變異Hb，修飾Hb高速測(cè)定：90秒/樣本HbA1c的測(cè)定范圍在3～20%之間。HA-8160波形HbA1a1HbA1a2HbA1b＃CHbFHbA0HbA1cHA-8160結(jié)果樣圖測(cè)定信息測(cè)定結(jié)果波峰信息色譜圖影響測(cè)定結(jié)果的標(biāo)本因素測(cè)定前標(biāo)本的儲(chǔ)存室溫（15-25℃）下保存2周，冰箱（2-8℃）保存1個(gè)月，測(cè)定結(jié)果的變異率均低于3%，穩(wěn)定性良好。HbA1c通常用翻倒混合的血或者自然沉降血球。如用和血糖測(cè)定共用NaF抗凝采血管，也可用離心分離的血球。但要在700g(1500rpm)、5min左右溫和的離心條件下做前處理，否則HbA1c的測(cè)定值有若干偏高的情況出現(xiàn)。對(duì)于非重度溶血標(biāo)本，可進(jìn)行測(cè)定。HPLC分析圖中可出現(xiàn)變性峰形。存在未檢出結(jié)果的情況貧血患者當(dāng)Hb濃度太低時(shí)＜65g左右，低于最低檢出量，可采取低速離心后適當(dāng)棄去部分血漿調(diào)節(jié)Hb濃度至正常水平。HbA1c的臨床應(yīng)用主要有三方面

糖尿病的診斷監(jiān)測(cè)糖尿病患者長(zhǎng)期血糖的控制狀況HbA1C的監(jiān)測(cè)目的在于消除血糖波動(dòng)對(duì)病情控制的影響。是國際公認(rèn)的糖尿病監(jiān)控“金標(biāo)準(zhǔn)”。糖尿病并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估其水平高低與糖尿病并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)一糖尿病診斷DM的診斷標(biāo)準(zhǔn)：DM(1)具有糖尿病的癥狀，F(xiàn)PG＞7.0mmol/L（2）具有糖尿病的癥狀，隨機(jī)血糖＞11.1mmol/L，且伴有尿糖陽性者。(3)OGTT峰值＞11.1mmol/L，OGTT2hPG＞11.1mmol/LIFG

FPG6.1-6.9mmol/L，2hPG＜7.8mmol/L。IGT

FPG＜7.0mmol/L，2hPG7.8-11.1mmol/L

臨床癥狀不典型者，需要另1d重復(fù)檢測(cè)確診，但不主張做第3次OGTT。（一）HbA1c用于糖尿病的診斷

隨著HbA1c檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化的逐步完善，2010年美國DM協(xié)會(huì)（ADA）更新DM診療指南，將其和FPG、OGTT一起列為DM診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。并指出HbA1C≥6.5作為診斷DM的標(biāo)準(zhǔn)，HbA1C在5.7-6.4%為DM前期，5.7-6.0%為DM高危期，6.1-6.5%為DM超高危期。ADA的診斷標(biāo)準(zhǔn)是否適用于中國人，此標(biāo)準(zhǔn)頒布后，不少文獻(xiàn)報(bào)告以O(shè)GTT為金標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)HbA1C診斷糖調(diào)節(jié)受損（IGR）和DM的診斷效能。北京大學(xué)第一附屬醫(yī)院徐國賓教授在他的《HbA1C對(duì)糖調(diào)節(jié)受損和2型糖尿病的診斷價(jià)值》文章中指出，推薦6.5%作為診斷DM的cutoff值或醫(yī)學(xué)決定水平是合理的，其具有較高的特異性和陽性預(yù)測(cè)值，一般＞96%，生理變動(dòng)較FPG低，但敏感性不如FPG，HbA1C＜6.5%不能排除經(jīng)血糖檢測(cè)和OGTT試驗(yàn)確診的DM患者。因此，與血糖聯(lián)合檢測(cè)有助于提高糖尿病診斷的敏感性和特異性。另外，在他的此項(xiàng)研究中不支持HbA1C在5.7-6.4%為IGR的診斷標(biāo)準(zhǔn)。（二）HbA1C在妊娠期糖尿病中的診斷妊娠期糖尿病（GDM）是指在妊娠期發(fā)生或首次發(fā)現(xiàn)的不同程度的高血糖癥，包括妊娠前已經(jīng)存在但漏診的孕前DM及孕期伴隨發(fā)生的糖耐量異常。GDM發(fā)病率逐年呈上升趨勢(shì)，孕期隨著血糖水平的升高，妊高癥、剖宮產(chǎn)率、巨大兒、胎兒畸形、早產(chǎn)以及子代患糖尿病、心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)也會(huì)增加。GDM對(duì)母嬰近期和遠(yuǎn)期都會(huì)造成很多不良影響。美國糖尿病學(xué)會(huì)（ADA）2011年制定了新的GDM診斷標(biāo)準(zhǔn)，孕24-28周用75g葡萄糖進(jìn)行口服葡萄糖耐量試（OGTT），以空腹、糖后1h

2h血糖5.1、10.0、8.5mmol/L作為cutoff值，3項(xiàng)中任何1項(xiàng)值達(dá)到或超過上述標(biāo)準(zhǔn)即可診斷GDM。但此項(xiàng)檢測(cè)過程需要多次采血，操作繁瑣，給孕婦帶來痛苦和不便。HbA1C是否可以作為GDM一個(gè)輔助診斷指標(biāo)，使用普通人群的HbA1Ccutoff值診斷GDM是否合理有待進(jìn)一步探討。我國有文獻(xiàn)報(bào)道，HbA1C診斷GDM的最佳cutoff值4.9%，他的特異性和敏感性均高于80%，諸多研究顯示，孕期HbA1C升高的水平與孕期母嬰健康關(guān)系密切。但HbA1C并未被推薦作為GDM的診斷指標(biāo)之一。這還需進(jìn)行更廣泛的臨床驗(yàn)證。（妊娠期由于紅細(xì)胞周轉(zhuǎn)加快，紅細(xì)胞壽命縮短，空腹血糖降低，使得糖化時(shí)間縮短，導(dǎo)致妊娠期HbA1C生理性下降）。（三）與應(yīng)激性高血糖的鑒別診斷各種應(yīng)激反應(yīng)如手術(shù)、創(chuàng)傷，感染、急性心肌梗死、腦血管意外等疾病和輸注了含葡萄糖注射液后，都可以使血糖升高，但這種高血糖的HbAlc不一定升高，若為糖尿病患者HbAlc則升高，對(duì)兩者簽別診斷和指導(dǎo)治療很有價(jià)值，二監(jiān)測(cè)糖尿病患者長(zhǎng)期血糖的控制狀況

對(duì)于血糖控制狀態(tài)較為平穩(wěn)的患者，每年至少應(yīng)接受2次HbA1c的檢測(cè)。對(duì)于血糖控制狀態(tài)不穩(wěn)定的、需要改變治療方案及正在進(jìn)行胰島素治療的患者，應(yīng)該每3個(gè)月檢測(cè)1次。(三)評(píng)估糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展HbAlc是監(jiān)測(cè)糖尿病患者血糖控制情況的金標(biāo)準(zhǔn),是評(píng)估糖尿病并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)的有效指標(biāo).糖尿病足病、糖尿病性周圍神經(jīng)炎、眼病、腎病、心臟病以及腦血管病變等是DM最常見的慢性并發(fā)癥。也是導(dǎo)致DM死亡的主要原因。DM的早期診斷、生活方式的干預(yù)、治療、監(jiān)控對(duì)于延緩并發(fā)癥的發(fā)生具有重要意義。

8%9%

心力衰竭的幾率Hb死亡的幾率心肌梗死的幾率中風(fēng)的幾率微血管病變的幾率白內(nèi)障摘除手術(shù)的幾率1%21%14%12%37%19%16%糖化血紅蛋白檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室中由于不同的測(cè)定原理方法所得到的測(cè)定值存在較大差異，為了解決