實(shí)驗(yàn)六微生物大小及數(shù)量的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)六微生物大小及數(shù)量的測(cè)定第一頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二鏡臺(tái)測(cè)微尺目鏡測(cè)微尺第二頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二目鏡測(cè)微尺每格實(shí)際代表的長(zhǎng)度隨物鏡的放大倍數(shù)而改變，也會(huì)因使用不同的顯微鏡而產(chǎn)生誤差，因此在使用前必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺進(jìn)行校正。第三頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二目鏡測(cè)微尺的校正第四頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二三、操作步驟l．目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定把目鏡的上透鏡旋開，將目鏡測(cè)微尺輕輕放在目鏡的隔板上，使有刻度的一面朝下。將鏡臺(tái)測(cè)微尺放在顯微鏡的載物臺(tái)上，使有刻度的一面朝上。先用低倍鏡觀察，調(diào)焦距，待看清鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，使目鏡測(cè)微尺的刻度與鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度相平行，并使兩尺左邊的一條線重合，向右尋找另外一條兩尺相重合的直線。2．標(biāo)定公式：計(jì)算兩刻度間目鏡測(cè)微尺的格數(shù)和鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù)。由于鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度每格長(zhǎng)10μm，所以可得：

目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)（μm）=

兩條重合線間鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù)×10兩條重合線間目鏡測(cè)微尺的格數(shù)

第五頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二三、操作步驟3．菌體大小的測(cè)定將鏡臺(tái)測(cè)微尺取下，換上釀酒酵母玻片標(biāo)本，分別在低倍鏡和高倍鏡下找到目的物，測(cè)量10～20個(gè)菌體的長(zhǎng)和寬占目鏡測(cè)微尺的格數(shù)，再以目鏡測(cè)微尺每格的長(zhǎng)度計(jì)算出菌體的長(zhǎng)和寬。記錄結(jié)果,求出平均值。鏡臺(tái)測(cè)微尺的玻片很薄，如需標(biāo)定油鏡頭時(shí)，要格外注意，以免壓碎鏡臺(tái)測(cè)微尺或損壞鏡頭。思考題為什么不同放大倍數(shù)的目鏡和物鏡必須分別進(jìn)行標(biāo)定？第六頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二酵母菌數(shù)量的測(cè)定

一、目的要求1．明確血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理。2．掌握使用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。二、基本原理用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)是一種常用的微生物計(jì)數(shù)方法。該計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)；中間較寬的平臺(tái)又被一短橫槽隔成兩半，各列有一個(gè)方格網(wǎng)，中間的大方格即為計(jì)數(shù)室。計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一是大方格分成25個(gè)中格，而每個(gè)中格又分成16個(gè)小格；另一種是大格分成16個(gè)中格，而每個(gè)中格又分成25個(gè)小格，每個(gè)大格中的小格都是400個(gè)。每一個(gè)大格邊長(zhǎng)為lmm，面積為lmm2，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.lmm，故計(jì)數(shù)室的容積為0.lmm3。

第七頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二第八頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)第九頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二

計(jì)數(shù)時(shí)，通常數(shù)五個(gè)中格的總菌數(shù)，然后求得每個(gè)中格的平均值，然后再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。如果是25個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板,1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5×25×104×B=50000A·B（個(gè)）

A為五個(gè)中方格中的總菌數(shù)，B為菌液稀釋倍數(shù).如果是16個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5×16×104×B=32000A·B（個(gè)）第十頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二（三）器材1．菌種釀酒酵母2．儀器或其他用具血球計(jì)數(shù)板，顯微鏡，蓋玻片，無菌毛細(xì)滴管。（四）操作步驟l．菌懸液制備以無菌生理鹽水將釀酒酵母制成濃度適當(dāng)?shù)木鷳乙骸?．鏡檢計(jì)數(shù)室在加樣前，先對(duì)計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若有污物，則需清洗，吹干后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)。3．加樣品將清潔干燥的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細(xì)滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣凹槽滴加,菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動(dòng)進(jìn)入計(jì)數(shù)室，一般計(jì)數(shù)室均能充滿菌液。取樣時(shí)先要搖勻菌液；加樣時(shí)計(jì)數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。

第十一頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二4．顯微鏡計(jì)數(shù)加樣后靜止5min，然后將血球計(jì)數(shù)板置于顯微鏡載物臺(tái)上，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)。每個(gè)計(jì)數(shù)室選5個(gè)中格(可選4個(gè)角和中央的一個(gè)中格)中的菌體進(jìn)行計(jì)數(shù)。壓線的菌體一般記上不記下,記左不記右。如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時(shí)，即作為兩個(gè)菌體計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來計(jì)算樣品的含菌量。5．清洗血球計(jì)數(shù)板使用完畢后，將血球計(jì)數(shù)板在水龍頭用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干。鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌