實驗四食品中大腸菌群的測定

實驗四食品中大腸菌群的測定第一頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二一、實驗目的掌握大腸菌群的原理及其檢驗方法，以判別食品的衛(wèi)生質量了解MPN測定法在食品衛(wèi)生檢驗中的意義第二頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二二、實驗原理大腸菌群是指一群在一定培養(yǎng)條件下可發(fā)酵乳糖、產酸產氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽孢桿菌。該菌主要來源自人畜糞便，作為糞便污染指標評價食品的衛(wèi)生狀況，推斷食品中腸道致病菌污染的可能。第三頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二最近似數(shù)測定法（MPN）是指對未知樣品做連續(xù)的10倍稀釋，選擇3個連續(xù)的10倍稀釋液，每種稀釋液接種3管裝有培養(yǎng)基的試管中培養(yǎng)，根據(jù)LST初發(fā)酵試驗以及BGLB發(fā)酵證實實驗，證實大腸菌群的陽性管數(shù)，查MPN檢索表，報告每g（mL）樣品中大腸菌群的最可能數(shù)。食品中大腸菌群數(shù)以每g（mL）樣品中大腸菌群的最可能數(shù)來表示，即為大腸菌群MPN值。第四頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二三、實驗器材（一）培養(yǎng)基月桂基硫酸鹽蛋白胨肉湯（LST）培養(yǎng)基煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）培養(yǎng)基（二）實驗材料市售飲料（三）其他三角瓶，試管，培養(yǎng)皿，移液管（四）儀器超凈工作臺，電子天平，高壓蒸汽滅菌鍋第五頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二四、實驗準備（一）配制培養(yǎng)基和試劑（以中央臺為單位）

1、配制生理鹽水：1000mL

NaCl8.5g水1000mL

分裝：3個三角瓶（含玻珠）中，225mL/個9支試管，3支/組，9mL/支

滅菌：121~126℃滅菌20min第六頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二2、月桂基硫酸鹽蛋白胨肉湯（LST）培養(yǎng)基：300mL分裝到27個已裝有杜氏小管試管中，10mL/個包扎（3支一捆），112~115℃滅菌30min胰蛋白胨

6g

NaCl

1.5g乳糖

1.5gK2HPO40.825gKH2PO40.825g

十二烷基硫酸鈉

0.03g水

300mLpH6.8第七頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二3、煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）培養(yǎng)基：150mL分裝到12個已裝有杜氏小管試管中，10mL/個包扎，112~115℃滅菌30min蛋白胨

1.5g乳糖

1.5g牛膽粉溶液30mL

0.1%煌綠水溶液

2mL

水

150mLpH7.2牛膽粉溶液制法：將3g牛膽粉溶于30mL水中，調pH至7.0~7.5BGLB制法：先將蛋白胨、乳糖溶于約100ml水中，加入牛膽粉溶液30mL，調節(jié)pH，再加入0.1%煌綠水溶液，最后用水補足到150ml，用紗布過濾后，再分裝到試管中。第八頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二（二）其它器具（每個組準備）移液管10mL1支/組1mL

10支/組第九頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二五、實驗步驟1、樣品處理：

以無菌操作，先用酒精棉球擦拭樣品表面，用無菌剪刀將包裝剪破，量取檢樣25mL放入225mL滅菌生理鹽水當中，充分振蕩，混合均勻，制成10-1稀釋度樣品2、梯度稀釋法依次稀釋樣品到10-4第十頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二3、選擇10-2、10-3、10-4三個稀釋度的樣品均液，用無菌移液管分別吸取1mL到LST發(fā)酵液試管中，每個稀釋度做3個平行（共9管）。4、37℃培養(yǎng)48h5、觀察LST管中小倒管里是否有氣泡。如有氣泡，則繼續(xù)按照下述要求實驗；如無氣泡，則是大腸陰性管（-）第十一頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二6、如LST小倒管中有氣泡，則按照無菌操作要求，用接種環(huán)將產氣LST發(fā)酵液接種到BGLB試管中，一只產氣LST發(fā)酵液對應一只BGLB試管。7、37℃培養(yǎng)48h8、觀察BGLB小倒管中是否有氣泡，如有氣泡，則記為大腸陽性管（+）；如無氣泡，則記為大腸陰性管（-）。第十二頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二大腸菌群計數(shù)檢驗流程0將產氣的試管內樣品接種到BGLB肉湯LST不產氣（-）小導管里無氣泡LST產氣（+）第十三頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二9、根據(jù)經確證后的對應濃度陽性管數(shù)查MPN表，報告樣品中大腸菌群MPN值。陽性管數(shù)MPN95%可信限0.100.010.001下限上限000<3.0-9.50013.00.159.61003.60.1718333>1100420-第十四頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二五、實驗結果與分析經查MPN表，樣品中大腸菌群數(shù)為

MPN/g（mL）陽性管數(shù)0.010.0010.0001LST發(fā)酵管BGLB證實管分析第十五頁，共十六頁，編輯于20