食品中溴氰蟲酰胺殘留量的測定液相色譜-質譜質譜法

食品中溴氰蟲酰胺殘留量的測定液相色譜-質譜/質譜法范圍本標準規(guī)定了食品中溴氰蟲酰胺殘留量的液相色譜-質譜/質譜檢測方法。本標準適用于大米、玉米、甘藍、番茄、洋蔥、干辣椒、蘋果、豬肉、雞肝、牛奶、雞蛋中溴氰蟲酰胺殘留量的測定，其它食品可參照執(zhí)行。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2763食品安全國家標準食品中農藥最大殘留限量GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法原理試樣經乙腈提取，分散固相萃取凈化（油脂含量高的樣品須先用乙腈飽和正己烷去脂和冷凍去脂）后，用液相色譜-質譜/質譜儀測定，外標法定量。試劑和材料除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。試劑乙腈（CH3CN，75-05-8）：色譜純。甲醇（CH3OH，67-56-1）：色譜純。正己烷（C6H14，110-54-3）：色譜純。乙酸銨（C2H7NO2，631-61-8）：色譜純。氯化鈉（NaCl，7647-14-5）：用前在450℃灼燒4h，冷卻后密封備用。無水硫酸鎂（MgSO4，7487-88-9）：用前在650℃灼燒4h，貯藏干燥器中，冷卻后備用。溶液配制乙腈飽和正己烷溶液：取適量乙腈加入正己烷中，劇烈振搖，靜置至出現(xiàn)明顯分層，棄去乙腈層備用。乙酸銨溶液（5mmol/L）：稱取0.385g乙酸銨用水溶解并定容至1L。標準品溴氰蟲酰胺（Cyantraniliprole，C19H14BrClN6O2，CAS號：736994-63-1），純度≥98.0%。標準溶液配制標準儲備溶液準確稱取適量的標準品（精確至0.1mg），用乙腈溶解，配制成濃度為1000μg/mL的標準儲備溶液，該儲備溶液-18℃保存，保存期為一年。標準中間溶液準確吸取適量標準儲備溶液，用甲醇配制成濃度為10μg/mL的標準中間溶液，該溶液4℃保存，保存期為一個月?；|標準工作溶液根據(jù)需要準確吸取適量標準中間溶液，用樣品空白基質溶液配制成0.002、0.005、0.01、0.02、0.05、0.1mg/L的系列標準工作溶液。該溶液應現(xiàn)用現(xiàn)配。材料N-丙基乙二胺（Primarysecondaryamine，PSA）：粒度40～60μm。十八烷基硅烷鍵合相（C18）：粒度40～60μm。有機濾膜：0.22μm。儀器和設備液相色譜-三重四級桿質譜儀：配備電噴霧離子源（ESI）。高速組織搗碎機。高速粉碎機。勻漿機。天平：感量0.01mg和0.01g。振蕩器。超聲波儀。離心機，轉速不低于8000r/min。渦旋混合器。具塞離心管：50mL，10mL。試樣制備與保存大米、玉米、干辣椒取500g代表性樣品，用高速粉碎機處理至粉狀，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標識。于-18℃以下保存。甘藍、番茄、洋蔥、蘋果取500g代表性樣品，用勻漿機制成勻漿，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標識。于-18℃以下保存。豬肉、雞肝取500g代表性樣品，用高速組織搗碎機制成糊狀，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標識。于-18℃以下保存。牛奶、雞蛋取500g代表性樣品，充分混勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標識。于-18℃以下保存。分析步驟提取大米、玉米稱取4g試樣（精確至0.01g）于50mL具塞離心管中，加5mL水混勻，放置30min。準確加入20.0mL乙腈振蕩提取20min，超聲提取5min后加入3g無水硫酸鎂和2g氯化鈉，渦旋振蕩1min，8000r/min離心5min后，待凈化。甘藍、番茄、洋蔥稱取10g試樣（精確至0.01g）于50mL具塞離心管中。準確加入20.0mL乙腈振蕩提取20min，超聲提取5min后加入3g無水硫酸鎂和2g氯化鈉，渦旋振蕩1min，8000r/min離心5min后，待凈化。干辣椒稱取4g試樣（精確至0.01g）于50mL具塞離心管中，加15mL水混勻，放置30min。準確加入20.0mL乙腈振蕩提取20min，超聲提取5min后加入3g無水硫酸鎂和2g氯化鈉，渦旋振蕩1min，8000r/min離心5min后，待凈化。豬肉、雞肝、牛奶、雞蛋稱取4g試樣（精確至0.01g）于50mL具塞離心管中，加5mL水混勻（檢測牛奶時，不需加水），放置30min。準確加入20.0mL乙腈振蕩提取20min，超聲提取5min后加入3g無水硫酸鎂和2g氯化鈉，渦旋振蕩1min，8000r/min離心5min后，待凈化。將10mL上清液轉移至50mL具塞離心管中，加入10mL乙腈飽和正己烷，渦旋振蕩2min，靜置分層，棄去正己烷層，再加入10mL乙腈飽和正己烷重復操作一次，然后將離心管置于-18℃冷凍30min，迅速取出2mL提取液，待凈化。凈化稱取0.15g無水硫酸鎂，0.10gPSA和0.10gC18置于10mL離心管，將2mL上述提取液至此離心管中，渦旋1min，5000r/min離心5min。取上清液過0.22μm有機微孔濾膜后，供液相色譜-質譜/質譜測定。測定液相色譜參考條件條件如下：色譜柱：C18柱，柱長150mm，內徑2.1mm，粒徑3μm，或等效柱；流速：0.25mL/min；進樣量：5μL；柱溫：30℃；流動相及梯度洗脫條件見表1。流動相及梯度洗脫條件時間min甲醇%乙酸銨溶液%025750.525752.590106.090106.12575102575質譜參考條件條件如下：電離方式：電噴霧電離（ESI）；毛細管電壓：4.0kV；干燥氣溫度：350℃； 輔助氣（鞘氣）溫度：350℃； 霧化氣、干燥氣、輔助氣（鞘氣）均為高純氮氣，使用前應調節(jié)各氣體流量以使質譜靈敏度達到檢測要求； 掃描方式：正離子掃描； 檢測方式：多反應監(jiān)測，參數(shù)見表2。多反應監(jiān)測條件中文名稱英文名稱母離子m/z子離子m/z駐留時間s裂解電壓V碰撞能量eV溴氰蟲酰胺Cyantraniliprole475.0285.8a0.211010443.90.211015為定量子離子標準曲線的制作按濃度由小到大的順序，依次分析基質標準溶液，得到相應的峰面積。以基質標準溶液的濃度為橫坐標，以相應的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。試樣溶液的測定將試樣溶液注入液相色譜-質譜儀中，得到相應的峰面積，由標準曲線得到試樣溶液中溴氰蟲酰胺的濃度。如果試樣溶液濃度超過標準曲線的上限，須用乙腈稀釋試樣溶液至線性范圍后再進行測定。在上述儀器條件下，溴氰蟲酰胺的參考保留時間為4.4min。標準品的MRM總離子流圖和選擇離子流圖參見附錄A中圖A.1、圖A.2。定性如果樣品的質量色譜峰保留時間與基質標準溶液一致，定性離子對的相對豐度與濃度相當?shù)幕|標準溶液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過表3的規(guī)定，則可判斷樣品中存在相應的被測物。定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度＞50%20%～50%10%～20%≤10%允許的相對偏差±20%±25%±30%±50%空白試驗除不稱取試樣外，均按上述步驟進行。結果計算和表述試樣中溴氰蟲酰胺的含量按式（1）計算： （SEQ標準自動公式\*ARABIC1）式中：X——試樣中溴氰蟲酰胺的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；ρ——從基質標準曲線得到的試樣測定液中溴氰蟲酰胺的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；V——試樣測定液的最終定容體積，單位為毫升（mL）；m——最終樣液所代表的試樣質量，單位為克（g）。計算結果應扣除空白值，保留兩位有效數(shù)字。精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測XX果的絕對差值與其算術平均值的比值（百分率），應符合附錄C的要求。在再現(xiàn)性條件下獲得的兩次獨立測XX果的絕對差值與其算術平均值的比值（百分率），應符合附錄D的要求。定量限和回收率定量限大米、玉米、干辣椒、豬肉、雞肝、牛奶、雞蛋中溴氰蟲酰胺定量限為0.01mg/kg，甘藍、番茄、洋蔥、蘋果中溴氰蟲酰胺定量限為0.004mg/kg?；厥章什煌瑯悠分袖迩柘x酰胺添加水平及回收率參見附錄B。

（資料性附錄）

溴氰蟲酰胺標準品譜圖溴氰蟲酰胺標準品MRM總離子流圖見圖A.1，選擇離子流圖見圖A.2。溴氰蟲酰胺標準品MRM總離子流圖溴氰蟲酰胺標準品MRM選擇離子流圖

（資料性附錄）

樣品的添加濃度及回收率的實驗數(shù)據(jù)樣品的添加濃度及回收率的實驗數(shù)據(jù)見表B.1。樣品的添加濃度及回收率的實驗數(shù)據(jù)樣品名稱添加濃度/（mg/kg）回收率范圍/%大米0.0186.5～101.90.283.2～102.50.490.4～98.6玉米0.0179.6～95.40.0281.5～105.30.0585.2～102.1甘藍0.00486.1～108.70.583.9～105.2190.5～109.0番茄0.00492.6～104.50.294.9～106.70.490.6～98.2洋蔥0.00479.9～94.30.0583.8～97.5180.2～91.9蘋果0.00490.9～100.70.888.3～98.41.691.6～104.2干辣椒0.0188.4～95.2582.8～100.71078.3～90.7豬肉0.0183.2～113.80.285.1～104.20.480.5～98.3表B.1樣品的添加濃度及回收率的實驗數(shù)據(jù)（續(xù)）樣品名稱添加濃度/（mg/kg）回收率范圍/%雞肝0.0188.6～108.40.1586.0～99.90.383.5～105.3牛奶0.0184.4～115.30.686.1～103.21.279.2～99.2雞蛋0.0182.5～112.40.1586.9～