抗體檢測介紹詳解演示文稿

抗體檢測介紹詳解演示文稿當(dāng)前第1頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)優(yōu)選抗體檢測介紹當(dāng)前第2頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)HCV病毒學(xué)特征黃病毒屬1有衣殼蛋白包裹2

已知6種基因型，>80個(gè)亞型3病毒基因組具有高度變異性3形成不同基因構(gòu)成的病毒亞群或準(zhǔn)種1,4增殖速度：1012個(gè)/天21.PurcellR.NIHConsensusConferenceonHepatitisC.1997;2.NeumannA,etal.Science1998;282:103;3.LauerG&WalkerB.NEnglJMed2001;345:41;4.HoofnagleJ.NIHConsensusConferenceonHepatitisC.1997衣殼

RNA基因組病毒顆粒核心蛋白當(dāng)前第3頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)中國丙肝臨床報(bào)告病例逐年遞增中國衛(wèi)生部公告.莊輝.2012世界肝炎日全國丙肝專題會(huì)議.

中國目前約有1000萬例丙肝感染者當(dāng)前第4頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)臨床報(bào)告病例僅是總體患者的冰山一角中國目前約有1000萬例HCV感染者中國衛(wèi)生部公告.莊輝.2012世界肝炎日全國丙肝專題會(huì)議.

超過90%的HCV感染者尚未被發(fā)現(xiàn)歷年報(bào)告臨床病例總和<100萬例當(dāng)前第5頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)HCV特征決定

準(zhǔn)確的檢測是疾病管理最重要防線病毒基因組具有高度變異性目前尚無預(yù)防性疫苗HCV在體外持久的穩(wěn)定性丙肝患者體液污染的器械具有很強(qiáng)的傳染性對于Anti-HCV篩查陽性者應(yīng)及早確診、規(guī)范治療當(dāng)前第6頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)HCV感染診斷實(shí)驗(yàn)的選擇

方法篩查確診療程療效的評估持久性應(yīng)答預(yù)測ALT※Anti-HCV※RIBA※HCV

RNA※※※※HCV基因分型※當(dāng)前第7頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)Anti-HCV是HCV感染篩查的指標(biāo)

80%急性感染進(jìn)展為慢性感染當(dāng)前第8頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)Anti-HCV的漏檢和假陽性

是困擾實(shí)驗(yàn)室問題之一當(dāng)前第9頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)

Anti-HCV確認(rèn)陽性*+-Anti-HCV+9999(TP)9900(FP)PPV=9999/(9999+9900)=50.25%-1(FN)980100(TN)NPV=989,010/(1+989,010)=99.9999%感染者10,000未感染990,000靈敏度=99.99%特異性=99%prevalence=1%在低感染人群，假陽性不可忽略

1%的感染率，如特異性99%，PPV只有50%當(dāng)前第10頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)

抗-HCV篩查檢測報(bào)告陰性或根據(jù)S/Co比值判定為陽性所有陽性結(jié)果高S/Co比值陽性*報(bào)告低S/Co比值陽性*RIBAHCV檢測或陽性報(bào)告陰性報(bào)告不確定報(bào)告陽性陰性RIBAHCV檢測HCVRNA的NAT檢測陽性報(bào)告陰性報(bào)告不確定報(bào)告報(bào)告美國CDCAnti-HCV實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果報(bào)告導(dǎo)則11，MiriamJ.Alteretal-GuidelinesforLaboratoryTestingandResultReportingofAntibodytoHepatitisCVirus當(dāng)前第11頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)RIBA（以Chiron為例）

兩個(gè)以上條帶（＞1+）為陽性當(dāng)前第12頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)Anti-HCV檢測靈敏度也是不能忽略<==窗口期==>（70天）DNA陽性3rdgen1stgen2ndgen不同的3rd試劑當(dāng)前第13頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)第三代試劑之間也有明顯差異

2006Hep/RetroSymposiumIIIWashingtonD.C.,24-26September2006當(dāng)前第14頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)Anti-HCV有反應(yīng)性進(jìn)一步結(jié)果解釋Anti-HCV有反應(yīng)性RIBA（+）

Anti-HCV有反應(yīng)性HCVRNA（+）

Anti-HCV確認(rèn)陽性Anti-HCV確認(rèn)陰性CDC，GuidelinesforLaboratoryTestingandResultReportingofAntibodytoHepatitisCVirus

2003Anti-HCV有反應(yīng)性RIBA（-）；Anti-HCV有反應(yīng)性HCVRNA(-）/RIBA（-）HCVRNA（-）/RIBAIND視為低風(fēng)險(xiǎn)當(dāng)前第15頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)Anti-HCV有反應(yīng)性進(jìn)一步結(jié)果解釋HCV有反應(yīng)性RNA(-)仍需要進(jìn)行RIBA

確認(rèn)，尤其是低流行區(qū)域根據(jù)流行率的確認(rèn)流程流行率<10%先RIBA，后RNA最經(jīng)濟(jì)

流行率>20%先RNA，后RIBA最經(jīng)濟(jì)流行率10-25%兩者方案，費(fèi)用相當(dāng)CDC，GuidelinesforLaboratoryTestingandResultReportingofAntibodytoHepatitisCVirus

2003當(dāng)前第16頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)

臨床需要高性能的檢測試劑假陽性不必要的補(bǔ)充確認(rèn)檢測不必要的就診和心理傷害醫(yī)療糾紛假陰性傳播擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)醫(yī)療安全風(fēng)險(xiǎn)延誤病情當(dāng)前第17頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)CE1E2NS2NS3NS4NS5ANS5B5′UTR結(jié)構(gòu)蛋白非結(jié)構(gòu)蛋白3′UTRa)b)

對于HCV病毒認(rèn)知的深入使檢測試

劑性能逐漸提高聚合酶抑制劑NS5A抑制劑蛋白酶抑制劑新藥物診斷試劑Core蛋白和NS3蛋白的免疫原性最強(qiáng)，是抗體檢測最重要組份；當(dāng)前第18頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)第三代Anti-HCV檢測試劑

精選抗原靶位，提升檢測性能NS3/Core抗體出現(xiàn)最早NS3抗原在早期診斷和提高靈敏度上都均有重要價(jià)值，提高NS3抗原的配比Core抗原中的N端保守區(qū)域易產(chǎn)生交叉反應(yīng)，適度減少Core抗原的配比隨著重組技術(shù)的進(jìn)展，使原料抗原的活性更強(qiáng)

各種抗原的配比調(diào)整第三代Anti-HCV的平均窗口期是6-8周；NS3和Core抗體要早于NS4和NS5抗體數(shù)周時(shí)間第三代試劑中加入Core，NS3，NS4（部分廠家加入NS5)抗原。

當(dāng)前第19頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)影響試劑性能的主要因素

各種抗原的配比平衡增加NS3抗原，同時(shí)減少核心區(qū)抗原益處：提升靈敏度減少了非特異性反應(yīng)挑戰(zhàn)：“度”的把握掌握不好，容易漏檢

抗原的選擇和生產(chǎn)工藝HCV病毒缺乏有效體外培養(yǎng)系統(tǒng)，難以從病毒中分離出天然抗原；生產(chǎn)的抗原材料與天然抗原的接近度越高，試劑性能越好。NS3是構(gòu)像依賴性抗原，需要使用重組抗原不同批次間抗原的均一性非常重要；NS4/Core抗原通常使用合成多肽抗原；當(dāng)前第20頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)了解試劑性能，

是放心應(yīng)用的前提！當(dāng)前第21頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)Elecsys?Anti-HCVII

雙抗原夾心法，18分鐘當(dāng)前第22頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)Elecsys?Anti-HCVII全面升級(jí)

viral(+)RNAgenomeviralpolyproteinCE1E2NS1NS2NS3NS4ANS4BNS5ANS5Bstructuralproteinsnon-structuralproteins合成肽合成肽重組抗原New!新的試劑緩沖液 減少干擾增強(qiáng)試劑的穩(wěn)定性應(yīng)用Core，NS3，NS4抗原片段不再應(yīng)用NS5（對于靈敏度提升有限但是會(huì)降低檢測特異性）當(dāng)前第23頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)Elecsys?Anti-HCVII多中心評估評估單位評估內(nèi)容1st:多中心研究北京大學(xué)人民醫(yī)院（Elecsys/Vitros/Architect）上海交通大學(xué)新華醫(yī)院（Elecsys/Vitros）四川大學(xué)華西醫(yī)院

(Elecsys/Lizvon/Intec)2nd:特殊樣本的評估衛(wèi)生部臨檢中心（多種方法）靈敏度血清轉(zhuǎn)換盤樣本日常檢測陽性樣本臨檢中心早期感染樣本特異性實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測樣本確認(rèn)方法：MIKROGEN?RIBAHCVCHIRON?RIBAHCV3.0Cobas?TaqmanHCVRNA當(dāng)前第24頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)應(yīng)用血清轉(zhuǎn)換盤評估靈敏度

Elecsys?Anti-HCVII靈敏度最高當(dāng)前第25頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)血清轉(zhuǎn)換盤是客觀評價(jià)早期感染靈敏度的標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前第26頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)常規(guī)樣本的評估

北京大學(xué)人民醫(yī)院(n=830)

樣本數(shù)N=830Elecsys?Anti-HCVIIVitros?Anti-HCVArchitect?Anti-HCV陽性真陽性17171716假陰性001陰性真陰性813809805805假陽性488統(tǒng)計(jì)靈敏度100%100%94%特異性*99.50%99.02%99.02%陽性率2%*RIBA不確定+RNA(-)結(jié)果解釋為陰性

當(dāng)前第27頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)常規(guī)樣本的評估

上海交通大學(xué)新華醫(yī)院（n=495)

樣本數(shù)N=495Elecsys?Anti-HCVIIVitros?Anti-HCV陽性真陽性111假陰性00陰性真陰性494494492假陽性02統(tǒng)計(jì)靈敏度100%100%特異性*100%99.60%陽性率0.2%

*沒有HCVRNA結(jié)果,排除RIBA不確定樣本當(dāng)前第28頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)常規(guī)樣本的評估

四川大學(xué)華西醫(yī)院(n=1044)

樣本數(shù)N=1044Elecsys?Anti-HCVIIElecsys?Anti-HCVIntec?Anti-HCVLizvon?Anti-HCV陽性真陽性88877假陰性8811陰性真陰性10361034102210361034假陽性21402統(tǒng)計(jì)靈敏度100%100%88%88%特異性*99.8198.64%100%99.81%陽性率0.8%*沒有HCVRNA結(jié)果,排除RIBA不確定樣本當(dāng)前第29頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)預(yù)選樣本的評估

北京大學(xué)人民醫(yī)院（n=67)

RIBA不確定樣本的RNA結(jié)果均為(-)低S/CO樣本中20%是真正陽性入選:Vitros(+)S/CO<8當(dāng)前第30頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)預(yù)選樣本的評估

北京大學(xué)人民醫(yī)院（n=67)

靈敏度：92%特異性*：93%靈敏度：92%特異性*：63%*RIBA不確定+RNA(-)結(jié)果解釋為陰性

當(dāng)前第31頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)早期感染樣本的靈敏度評估1

方法Elecsysanti-HCVIIABCDEFG有反應(yīng)性11092989291868687靈敏率87.2%69.2%76.7%69.2%68.4%64.7%64.7%65.4%具體樣本組成RIBA（+）99RNA（+）121RNA(-)&RIBA(+)RNA(+)&RIBA(+)RIBA(-)/IND&RNA(+)1287341衛(wèi)生部臨檢中心評估數(shù)據(jù)HCVRNA和/或RIBA陽性（n=133)當(dāng)前第32頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)特異性評估1

方法Elecsysanti-HCVIIABC有反應(yīng)性2213842無反應(yīng)性305286269265特異性99.35%93.16%87.62%86.32%方法Elecsysanti-HCVIIABC有反應(yīng)性3411611477無反應(yīng)性385303315342特異性91.89%72.23%75.18%81.63%1衛(wèi)生部臨檢中心評估數(shù)據(jù)RNA&RIBA陰性（n=307)RNA陰性&RIBA不確定(n=419)當(dāng)前第33頁\共有35頁\編于星期三\0點(diǎn)判定真陽性的Cutoff的初步分析1

基于全部1072例/243例確認(rèn)陽性樣本

方法S/COn>S/CO假陽性真陽性率S/COn1-S/CO

假陽