體外試驗(yàn)與生物新技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用

第一章體外試驗(yàn)與生物新技術(shù)在毒理學(xué)中的應(yīng)用體外試驗(yàn)毒性試驗(yàn)的目的在于獲取一定的數(shù)據(jù)，為社會(huì)需要的外源化學(xué)物的安全使用做出判斷。過去利用整體實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型或稱體內(nèi)試驗(yàn)(invivotest)模型所提供的資料，判斷外源化學(xué)物及其制品和混合物等對(duì)人類健康是否具有損害作用。體外試驗(yàn)?zāi)Ｐ?invitrotest)在上述過程中也起著重要的作用，尤其是機(jī)理研究方面。但是，在毒理學(xué)研究中整體試驗(yàn)研究的觀點(diǎn)仍占主導(dǎo)地位。目前，此種觀點(diǎn)已發(fā)生變化，因?yàn)椋孩偃澜缑磕昙s有千種以上的新化合物作為商品進(jìn)入人類的環(huán)境。而且在現(xiàn)有的化合物中，還有相當(dāng)數(shù)量沒有進(jìn)行必要的毒理學(xué)評(píng)價(jià)。在此種情況下，利用經(jīng)典的整體動(dòng)物試驗(yàn)取得完整的毒理學(xué)資料極為困難。解決此種問題的重要方向是體外試驗(yàn)。②現(xiàn)有的整體動(dòng)物毒性試驗(yàn)方法需消耗大量的時(shí)間和昂貴的經(jīng)費(fèi)，而體外試驗(yàn)則可節(jié)省時(shí)間和經(jīng)費(fèi)。③動(dòng)物保護(hù)主義運(yùn)動(dòng)的興起，要求盡量減少動(dòng)物的使用，而且應(yīng)當(dāng)盡量減少痛苦地處理動(dòng)物。④更重要的是由于生物技術(shù)的巨大進(jìn)步，不僅表現(xiàn)在細(xì)胞組織及器官培養(yǎng)領(lǐng)域，而且在生物分子技術(shù)方面，也為毒性試驗(yàn)和研究提供了新的方法和工具。所以體外試驗(yàn)在毒理學(xué)研究中所占的地位日趨重要，甚至有占主導(dǎo)地位的趨勢(shì)。但也需指出，體外試驗(yàn)的發(fā)展，并不排斥體內(nèi)試驗(yàn)本身的重要性，兩者必須相互補(bǔ)充、相互驗(yàn)證才能為毒理學(xué)研究提供堅(jiān)實(shí)的科學(xué)基礎(chǔ)。一、概述(一)分類毒性試驗(yàn)的目的是提供一些適當(dāng)?shù)馁Y料，以便確定有關(guān)化學(xué)物的毒理學(xué)性質(zhì)。在有些情況下，是要決定一種化學(xué)物在所預(yù)期的條件下使用是否安全，如新藥物開發(fā)即需要這一評(píng)價(jià)。在有些情況下，例如新工業(yè)品或日用化學(xué)品的開發(fā)，必須決定一種新化學(xué)物的接觸安全限量。了解體外毒性試驗(yàn)在上述毒理學(xué)決策過程中有何意義，對(duì)于評(píng)價(jià)體外毒性試驗(yàn)在毒理學(xué)中的地位極有幫助。可依據(jù)體外試驗(yàn)在決策過程中所起的作用將其分為3類：①篩選試驗(yàn)。它僅提供決策過程的最初的資料，還需要進(jìn)行更權(quán)威的試驗(yàn)，無論是整體還是體外試驗(yàn)。②附加試驗(yàn)。它可為協(xié)作部門或法律部門的最終決策過程提供有用的資料，如機(jī)理的研究，但僅有它是不夠充分的。③替代試驗(yàn)。它是在大量實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，使體外毒性試驗(yàn)?zāi)芴娲w動(dòng)物試驗(yàn)，以提供更多的信息。(二)基本原理體外試驗(yàn)的基本原理是所觀察到的毒理學(xué)效應(yīng)均是毒物和／或反應(yīng)活性代謝產(chǎn)物在敏感性細(xì)胞上或敏感細(xì)胞內(nèi)某一分子靶部位作用的結(jié)果。如將敏感細(xì)胞或某分子靶部位例如酶，在體外條件下，維持其正常的生理功能，并觀察外源化學(xué)物對(duì)其的影響，即將毒理學(xué)中毒物中毒的啟動(dòng)階段，在體外條件下，觀察其對(duì)外源化合物的反應(yīng)和外源化學(xué)物對(duì)它的作用?；谏鲜鲈?，體外試驗(yàn)?zāi)Ｐ腿〔姆秶軐?，可取哺乳?dòng)物的離體臟器灌流、臟器切片溫育、細(xì)胞培養(yǎng)、亞細(xì)胞器組份以及提純的某些酶分子或DNA分子等等。(三)體外試驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn)體外毒性試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)可歸納在表12—1。表12-1體外毒性試驗(yàn)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)能控制環(huán)境因素可排除相互作用的系統(tǒng)如免疫系統(tǒng)、神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響每一劑量水平可利用大量的生物樣品，如細(xì)胞，細(xì)胞器等施試驗(yàn)些間的港誤差植較少腥可同草時(shí)和矩／或范反復(fù)鞠多次勉取樣喉可做劣成復(fù)槳雜的窄互相尺作用怖的試蓄驗(yàn)系粉統(tǒng)，注如復(fù)簡(jiǎn)合細(xì)棍胞培宏養(yǎng)等沿較為也快速巾和經(jīng)盼濟(jì)巡需要各較小娃量的早受試流化合淡物別產(chǎn)生子較小巨量的諷有毒富廢物炭可以經(jīng)利用奪人體添細(xì)胞還減少磚整體捷動(dòng)物畜的使鼠用復(fù)利年其中豆特別暈值得藏一提甜的優(yōu)伸點(diǎn)是她體外挺試驗(yàn)嘆的簡(jiǎn)欣便和戚易于父利用鴉人體望細(xì)胞咽。體狠外毒必性試叨驗(yàn)結(jié)蘆果可獎(jiǎng)迅速香得出特，將小減少牌了解血新化煙學(xué)物設(shè)毒理彼學(xué)資咳料所全需的猾時(shí)間潑，最移終可賣以縮屯短從鼠新化細(xì)學(xué)物盛的合餐成到披產(chǎn)品顏進(jìn)人肆市場(chǎng)完的時(shí)索間過公程。竿此外或，對(duì)查鑒定娃毒理領(lǐng)學(xué)資遺料有載問題艇的新運(yùn)化學(xué)黨物，關(guān)可及執(zhí)時(shí)終止止開掠發(fā)，據(jù)減少索由資會(huì)源到評(píng)產(chǎn)品迫的投膝入。液在毒宣理學(xué)鍋整體異試驗(yàn)中中禁否止直疊接進(jìn)浪行人勻體試領(lǐng)驗(yàn)。仔但毒暑理學(xué)權(quán)試驗(yàn)騙的目緣的是槍關(guān)心辜人類誘健康葡，目語前主雄要是伍將動(dòng)禿物試歲驗(yàn)結(jié)芬果外顆推至談人類鐵，物胳種間征差異菠為其凳不確叼定因符素之煤一。歐在體桑外試否驗(yàn)中市，利很用人奔體細(xì)呼胞組辨織進(jìn)殘行試情驗(yàn)，潑可較介好地常解決證物種攏差異熟的問蒸題。禮咳碧體外著毒性可試驗(yàn)燙系統(tǒng)澡的利藍(lán)用在篩目前冤尚有柳不足吼之處念：戴①悟體外思到體進(jìn)內(nèi)外釣推的察問題薦。體失外試惹驗(yàn)是腳依據(jù)嘆毒性票作用架的始糾發(fā)階懂段及陽繼續(xù)彼發(fā)生株的分漁子與番細(xì)胞月反應(yīng)夜，其劇與整抱體系哲統(tǒng)有嬌差異壞，如信何將盆產(chǎn)生羨體外愈毒性訓(xùn)的體警外濃選度與請(qǐng)相應(yīng)敞體內(nèi)忽劑量龍聯(lián)系通的問硬題是框最終安未解追決的喬難題李。它皂需要途更好零的工哈具圖——旅預(yù)測(cè)綁性毒素物代曠謝動(dòng)跪力學(xué)烤來解草決，齡其關(guān)冶鍵在化于發(fā)豬展有互生理床學(xué)基冷礎(chǔ)的錦毒物拖代謝篇?jiǎng)恿枌W(xué)模霞型。茶另一絞方面專，體劣外毒紋性試功驗(yàn)中鍛缺乏僅毒理鞏學(xué)反盡應(yīng)的攤調(diào)控桌因素察，如洞細(xì)胞棕與組永織的援修復(fù)始過程踢和免娛疫系煙統(tǒng)的曠不同題類型外細(xì)胞傍間的務(wù)相互煙影響孕等。神假如庫(kù)有了駕更全扣面的志毒理剩學(xué)過己程的剛基礎(chǔ)窯知識(shí)茂，可顫設(shè)計(jì)戲更符陡合整譯體動(dòng)梳物模然型的徑體外蓄系統(tǒng)善。但捷現(xiàn)階變段毒饞理學(xué)傷作為懼一個(gè)央學(xué)科泄的發(fā)遇展尚皆缺少犁許多葬重要冒的資努料。岔②趴體外刺毒性街試驗(yàn)井難以辰預(yù)測(cè)相慢性插毒性抄。因交為，精慢性遮毒性齊病理片過程甲的機(jī)挖理所銀知甚諒少，照缺乏窮發(fā)展河體外酸試驗(yàn)破的理催論依處據(jù)，巷再者典，某堵些體獲外系桿統(tǒng)仍茂難以勒達(dá)到皂長(zhǎng)期各維持時(shí)生理狼狀態(tài)混的要瀉求。械儀二、仍體外頸試驗(yàn)師系統(tǒng)王補(bǔ)旗(一神)脾臟器那灌流兇饑記1.憑肝工臟灌先流惠是累毒理箭學(xué)中薯研究毒外源想化合古物對(duì)帆肝臟述損傷扮及代眨謝的以常見蘋方法醫(yī)。在鍛灌流約液中吼加入咱外源鉆化學(xué)攻物，餓此外巴要維貼持灌敲流液弦的p臘H值利、氧騾含量赤，還健要控充制適臣宜的鴉灌流答液流嚴(yán)速。蒙一般丈是以泊下腔吃靜脈猛和門鴨靜脈嫂為插廣管灌落流通踏路，垃為此趁應(yīng)結(jié)殿扎肝逝動(dòng)脈位、上得腔靜完脈，很在恒覽溫條潮件下尸灌流趕。有顏報(bào)道爬用肝格灌流殊方法談研究籍四氯些化碳籍及其參氫取膚代衍冬生物尖三氯俘甲烷背與二嘴氯甲裁烷對(duì)奴肝臟培毒性哨，結(jié)石果發(fā)戶現(xiàn)隨漠著灌賠流時(shí)泡間延編長(zhǎng)(稱在4走h(yuǎn)之醒內(nèi))交，灌結(jié)流液摸的上摔清液供中K詠+眨、谷斧丙轉(zhuǎn)需氨酶謝(S沙CP帶T)叨、山滋梨醇搬脫氫樸酶(壯SD謎H)宅、谷虹氨酸檢脫氫覽酶(未GD擁H)錦增加腫，說饅明三垮種化騎合物劍對(duì)肝毒細(xì)胞踢均有某損傷型，而渴以四燦氯化饒?zhí)紴轱堊睿瑵M且依勒氯原趣子被談氫取吳代肝莊毒減億低。峽需指樹出肝蹈灌流述時(shí)間班不能慕過久沃，以起4h請(qǐng)之內(nèi)波為宜義，否屬則肝制細(xì)胞宇的功肚能與勻生存話不能勾維持仿。雀河飾2.鏟腸普灌流苦恒利用交某一茅部分芽小腸彎體外倘灌流智可以蝦研究土一些鋤化合疾物的稱吸收海及動(dòng)宇力學(xué)厭過程源。如升用大遠(yuǎn)鼠，足則在印麻醉沫下切資腹分資離一萬段小災(zāi)腸，腰在保眾持原康有血捷液循亮環(huán)體憶系下挖，將怠腸兩私端插敢管，磨清洗牌凈腸曲中內(nèi)敏容物較，在剝恒溫晴環(huán)境攪中灌仰入灌筒流液煮。例著如有培人研竭究鋅貪的吸蜘收及揮其影件響因股素，根以大啟鼠回伏腸段豈為標(biāo)例本，杏證實(shí)扯鋅吸螞收呈猶二室散模型懂(腸蕩腔為肢Ⅰ飽室、歇腸粘扒膜為間Ⅱ僵室)燙，苯沾丙氨咬酸能鞭增加旗腸腔遺與腸傳粘膜襪之間鞏鋅的乳交換走，且瞞加速證向血扎流的濫清除凳過程煙。膠腸楊丘3.雹膈灶肌-羨膈神夸經(jīng)標(biāo)黑本屑取豪完整陣的大留鼠膈傅肌-活膈神徹經(jīng)置平于恒半溫灌歪流液展中，正，在僑幾小費(fèi)時(shí)之穩(wěn)內(nèi)可紅餃吵銳熊恩匪隔歌寫胞轉(zhuǎn)哲周有帝短蟻緞獎(jiǎng)婦腳慰英(二定)動(dòng)臟器巾切片良鵝每肝臟聲、腎王臟、軋腦部武及心科均可選以制匙備切尿片。誕例如引，腦圈片和結(jié)心肌遲條等六是將禽組織塔片置畫于恒鏈溫的蓋孵育汽液中兄進(jìn)行背有關(guān)宇試驗(yàn)私研究夫，但麻需注馬意切米片中疑的細(xì)顏胞需慈保持疑完好錦的細(xì)耍胞基它質(zhì)和掠細(xì)胞桂之間乳的交噸流。衣切片穩(wěn)厚度歸一般魄在2滅50房μ梅m。拳不同青研究棟期間鍬有別握，如割肝切塊片研萄究C盤yt若P-晚45悟0不票應(yīng)超粒過8屑h，脂腦切往片一頃般在在6h權(quán)左右我。此趟系統(tǒng)牧的優(yōu)應(yīng)點(diǎn)是菌保持發(fā)了細(xì)羞胞之僻間的雕結(jié)構(gòu)鋒，其跌操作意也比慕臟器售灌流啞容易萄。不篩足之納處是武切片匹內(nèi)的以細(xì)胞死易于澤缺氧啞，且膛受試卵物也促不易騰均勻當(dāng)?shù)竭_(dá)謹(jǐn)細(xì)胞舅內(nèi)。件陶境(三補(bǔ))狂原代攀細(xì)胞鍋培養(yǎng)嫩珍1.州肝趴細(xì)胞房原代拉培養(yǎng)哥祥肝細(xì)袍胞尚珍未建散成傳評(píng)代的紡細(xì)胞僅株系獅，多挨用原攀代培仰養(yǎng)。全肝細(xì)攻胞原袋代培膨養(yǎng)期膛間細(xì)陷胞不趁分裂暫、不羅增殖伸，但半發(fā)現(xiàn)平基因鈔轉(zhuǎn)錄斥是存朵在的休(培何養(yǎng)初龜期2六4h烏在1末％或妖以上鎮(zhèn))。朵細(xì)胞孩原代毀培養(yǎng)肥維持蛋生存費(fèi)期1裁～2洞周，槐但是擠Cy胃tP蠻-4縣50殺卻在妄24距～2還8h逆活性罵減少膠50誘％左慨右。孝據(jù)報(bào)擁道人血肝細(xì)文胞中想Cy傲tP僅-4撓50挎活性疲穩(wěn)定攀性比樹大鼠簡(jiǎn)強(qiáng)。偽倦督利用圾原代肉培養(yǎng)文的肝避細(xì)胞惑可以品進(jìn)行呀多種背毒理逝學(xué)研掃究。游如研啊究化似學(xué)物傭的肝準(zhǔn)臟毒秒性，悔一般李認(rèn)為尸，用蕉原代客肝細(xì)軟胞培搏養(yǎng)篩葛檢與睡鑒定鵲是否魂化學(xué)就物具坑有肝青臟毒派性較釘為可捆靠，證與體框內(nèi)試閣驗(yàn)相涌符合貫。有夠報(bào)道野以肝黨細(xì)胞漁損傷度后某狐些酶劫釋放襲為指肢征，供研究晃30垃個(gè)化躺學(xué)物演，結(jié)襯果除迅少數(shù)自化學(xué)啦物在通肝細(xì)唯胞培視養(yǎng)中餅表現(xiàn)污毒性謙比體扯內(nèi)試瓜驗(yàn)低將之外雙，多阿數(shù)化孩學(xué)物皺內(nèi)外辰毒性集符合臭一致旬。在終體外早試驗(yàn)躍表現(xiàn)計(jì)毒性炸較低鑰的化宋學(xué)物侄有環(huán)手已酰屑胺(奏cy泊cl丹oh表ex路im強(qiáng)io貢le緒)、星溴苯尺(b滾ro軌mo添be榮nz捐en需e)犁和長(zhǎng)臂春新頸堿(瀉vi角nc頸ri侍st糟in痕e)丙等。勺蜻諸慌妄2.原巨懇噬細(xì)氣胞主豚滑鼠或穴大鼠能都可裹以肺隸灌洗幫方法溉獲取域肺巨辜噬細(xì)惡胞，繳小鼠貼可用范腹腔釋灌洗巨獲得農(nóng)腹腔矩巨噬蓮細(xì)胞專，甚斯至人搭也可扇通過寒肺灌拐洗得逆到。翠巨噬滋細(xì)胞盤可以滴用于標(biāo)多種嶼體外論試驗(yàn)叔，例靜如利蹲用巨漁噬細(xì)涉胞的獸免疫幅功能近檢測(cè)傻外源麥化學(xué)宏物的殖免疫桌毒性余，又沾如利根用巨股噬細(xì)散胞檢癥測(cè)以斷肺臟槐為毒周理學(xué)久終點(diǎn)羨的外瑞源化擇學(xué)物陶的中報(bào)毒毒輛性和悉機(jī)理躲。關(guān)左于后佳者，晉有人寄利用蓋豚鼠瀉肺巨衫噬細(xì)懂胞原朽代培拍養(yǎng)純舅化后血，研聯(lián)究二重氧化蘿硅(煩si戲li合ca津，S挪iO就2逆)致疤矽肺摟的機(jī)汁理。煩爐務(wù)軟寧3.譜淋束巴細(xì)躲胞依多聯(lián)用小最動(dòng)脈抄脾臟逢分離塵淋巴熊細(xì)胞叔或進(jìn)董一步荷分離逃T、扎B淋厘巴細(xì)名胞進(jìn)美行免宰疫毒魚理研攻究。堵例如奸研究那鎘的斜免疫連毒性舌，證狼明鎘啄可以深抑制零淋巴左細(xì)胞圖轉(zhuǎn)化具和抑紗制白螺細(xì)胞虜介素盜-2讀的產(chǎn)尊生，廊且在畜一定致條件姿下使閘淋巴簡(jiǎn)細(xì)胞每?jī)?nèi)游娘離鈣盞濃度形增加概及鈣挽調(diào)素雜(C移aM欄)活吧性降志低，盯此為奴鎘的政免疫航毒性鞋機(jī)理凍研究率提供砌了線惕索。跡陜貿(mào)4.棒腦欣細(xì)胞騎茂分離劃的新角鮮腦霸細(xì)胞答有助準(zhǔn)于研爹究外齡源化纖學(xué)物劫對(duì)神健經(jīng)系吐統(tǒng)損筍傷的絕評(píng)價(jià)霜與探付討其箭機(jī)理心如用堡小鼠絞大腦仆皮質(zhì)民分離旋、溫躺育后妖，研頃究二厚價(jià)陽忠離子房鈣、滅鎂、罷鋅、穩(wěn)鎘等偏對(duì)皮哥層神握經(jīng)細(xì)喉胞的篇損傷愈，發(fā)絡(luò)現(xiàn)這邁些離殺子隨廁著濃姐度的模增加拍，腦馳神經(jīng)份細(xì)胞女的電姿泳遷端移率信逐漸糾減慢啄。園喂乞隨著魯腦細(xì)鹽胞技洲術(shù)的冠發(fā)展內(nèi)，還米可在應(yīng)溫育朝體系緊中存蘿在外妨源化濁學(xué)物裝情況湊下，祖用微督電極征插入阿腦細(xì)熱胞，薯通過壞電信傅號(hào)的暖變化管，更很深入拆地研罷究外忌源化抹學(xué)物慶對(duì)神明經(jīng)細(xì)濾胞的筒功能姨損傷傷。晝夠午5.測(cè)心照肌細(xì)陳胞憑心咐肌細(xì)隊(duì)胞用址于毒償理學(xué)蹲研究捎的報(bào)黑道目封前還臨較少俯。用蔑新生苗1～句2日掩齡大到鼠心不室肌蚊分離襖心肌非細(xì)胞點(diǎn)，原監(jiān)代培浙養(yǎng)4瘋天后這，將廟微電黨極(糕直徑瀉<0怠.5受um缸)插宴入細(xì)飯胞內(nèi)宏，研楊究鎘護(hù)對(duì)心怨肌的患影響邀。經(jīng)避記錄取、分升析各英心肌眾細(xì)胞買動(dòng)作鞭電位忌參數(shù)兔，結(jié)稻果鎘汽在5該～2無0渾μ恭mo袍l／殊L濃冶度下臉，可始使心薄肌細(xì)嬌胞動(dòng)而作電虹位及喂最大雄除極刑速率抵顯著放降低左，表駁明鎘玩對(duì)心夫肌有栽直接鼠的毒月性效皂應(yīng)。類召覺此外功，將尖分離蔥的心郵肌細(xì)敬胞于凈培養(yǎng)朝的2灰4~堡48災(zāi)h期狂間，塌利用職膜片赴鉗的頃連細(xì)奔胞電賠壓鉗僅法，炭描記角構(gòu)巧仆嘗賓考場(chǎng)滿寄麥喉這石忙穿詢伏梳搶昏安搞釀務(wù)氯化露鎘之撕后，氧B型執(zhí)通道諸開放臣時(shí)間詠縮短次1／鍋3、池關(guān)閉象時(shí)間造延長(zhǎng)絕45漂.1凳％、嚼通道硬開放劈概率鐮下降盜55飾％，狂L型跑通道譯開放泰時(shí)間丸縮短冒40血.7殼％、宏關(guān)閉欄時(shí)間正延長(zhǎng)預(yù)23啊.1瀉％、峰通道刑開放聚概率零下降漁50熊％，盡而對(duì)除T型睬通道賤無影必響。駛進(jìn)一皺步證蒙實(shí)鎘政對(duì)心域肌有煙毒性蜻效應(yīng)斃。匙注鑰嚼搭(四迫)朱細(xì)胞迫培養(yǎng)蝶伐遇有些魔臟器滿細(xì)胞萄建立憐了傳賣代培脖養(yǎng)技絲術(shù)，筍建成魚有穩(wěn)脈定遺乞傳特拋征的侮細(xì)胞市株系左。有筒的利觸用細(xì)爭(zhēng)胞培群養(yǎng)技榨術(shù)建庭立了摸特殊丑的試總驗(yàn)方間法。歲閃責(zé)1.防腎暢細(xì)胞撤里由于哈腎小賀管，涼尤其果是腎崇近曲膽管是秒腎臟膛重要番的功英能單記位，鵝目前河已經(jīng)水建立備了幾綿種腎構(gòu)近曲殊管細(xì)針胞株曠系用獸于毒納理學(xué)荷研究幼。例加如1令92祖6年寧Hu數(shù)ll永等人軋選育嫁傳代輔培養(yǎng)憶的L各LC瘦-P馳K1舅細(xì)胞景是來垮源于近Ha謎mp互sh就ir腳e豬孔。據(jù)率報(bào)道李此株亂系細(xì)魔胞的孤各種卵生物皂學(xué)特?zé)饕鸭催M(jìn)行漲了相矩當(dāng)深隙入的呈研究脈(包播括激蛋素應(yīng)偏答反鼓應(yīng)、延物質(zhì)滋轉(zhuǎn)運(yùn)霧特征嚇、細(xì)肝胞的烤代謝續(xù)功能綢和標(biāo)碌志等跡)。廉此后仆又建熟立了術(shù)從鼬膝(o果po喚ss香um想)獲倚得的德OK更株系淹、從趕兔獲婦得的拾RC惡-S顏VI遞株系襪。傭煙恒近年朵國(guó)內(nèi)太利用枯30綁0次心傳代斃培養(yǎng)奇的L弓LC階—鏈PK膽l細(xì)者胞系眨對(duì)鉛飄的腎鳥毒進(jìn)兄行了俘研究榆，包繩括鉛轉(zhuǎn)對(duì)細(xì)呈胞的家損傷夫、對(duì)享細(xì)胞煎膜脂訴流動(dòng)修性的裝影響專、對(duì)趴細(xì)胞蛋膜相采變溫毛度的秤影響鮮、脂溝質(zhì)過添氧化景效應(yīng)腥、胞烘內(nèi)鈣成濃度室變化挺及形退態(tài)學(xué)紅改變污等，鄉(xiāng)這對(duì)門鉛的盤腎臟郵毒性鉛機(jī)理趣提供畜了依掘據(jù)。涉填露2.蘋胚驗(yàn)胎細(xì)勢(shì)胞厘利寺用胚老胎細(xì)淘胞體童外培目養(yǎng)，返篩檢脾和研硬究外拳源化急學(xué)物挎的毒邊性效替應(yīng)。妙例如初我國(guó)遷用人此胚肺卡纖維運(yùn)母細(xì)農(nóng)胞傳管代培窮養(yǎng)人楚胚肺陷二倍沖體細(xì)教胞，昏已建宣立了霜以2喊BS膀?yàn)榇X表的膚株系白。此較株系良在用洞于篩輸檢致橡癌物咬方面秧做了怪一些抄工作鼓。如束人胚肢肺二遮倍體盲細(xì)胞訪在1愉0喊-7傭～1匹0唱-8姻mo籠l／宗L苯床并(戚a)比芘長(zhǎng)慚達(dá)2玻8～歡38蒙代傳牧代培能養(yǎng)下信，電票鏡鏡晨檢發(fā)卸現(xiàn)細(xì)蹲胞核滴外形槍不規(guī)連則、濱核膜嘩深陷川、出況現(xiàn)細(xì)飄橋(暗ti第ny邪b膨ri宇dg悄e)詞伴分不葉核簡(jiǎn)形成雄、核即內(nèi)胞植漿包前涵體智、核懷仁巨盤大或彎多核煎等細(xì)扭胞癌在變特忙征。定嘉龜此外招，人憂胚主嚷動(dòng)脈迫平滑夠肌細(xì)照胞也刪可作詳為標(biāo)鐘本傳蜻代培覆養(yǎng)研絡(luò)究金運(yùn)屬的困毒理億。石嗚瑞近十凍年來融，毒岔理學(xué)曠相繼仍引入愚嚙齒泥類動(dòng)略物的益著床災(zāi)前全羨胚胎琴培養(yǎng)箏技術(shù)披(p刺re筆-i結(jié)mp吵la閘nt再at環(huán)at塑io姓n韻wh切ol制e鵝em警br具yo平c索ul協(xié)tu獸re孩)、專著床懼后全別胚胎皺培養(yǎng)獻(xiàn)技術(shù)旁(p簽os竭t-潤(rùn)im嫂pl暮an趁ta文ti灰on尊w掃h(yuǎn)o乖le鳥e纖mb鐮ry炊o尾cu船lt音ur蛾e)塞，以哀及器社官培旁養(yǎng)如忌腭板此培養(yǎng)漸、胚洪胎枝雷芽體砌外培雜養(yǎng)等蓋篩檢魄致畸轉(zhuǎn)化學(xué)罷物均鞏取得敏一些收成果則。培拌溉(五喜)證組織狠勻漿適撤賄取臟械器除塞血污輩制備銹組織跪勻漿蔑，是照用物乓理學(xué)軌方法僻使細(xì)享胞壁撐破壞岸，細(xì)脅胞組針成成擴(kuò)分與礙細(xì)胞抓間質(zhì)煮混合角形成發(fā)混懸晉液。耗利用逢勻漿朵為標(biāo)參本主臟要是潤(rùn)研究失外源像化學(xué)愚物對(duì)智細(xì)胞友酶系過統(tǒng)的士毒理律作用屢。最役常使章用的招是腦置勻漿厘、肝倡勻漿藥，雖般然肺廈、腎勢(shì)、腸熄等臟檔器也粉可制姑備勻啟漿，局但是衡因纖盜維結(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yīng)產(chǎn)用于搜毒理湖學(xué)實(shí)朱驗(yàn)。德表1前2-印3為噸毒理闖學(xué)實(shí)強(qiáng)驗(yàn)中爐常用部的細(xì)諸胞類閉型，誓其中榴有些匪細(xì)胞良可來連源于親人體揮組織腹。燕利用馳哺乳玩動(dòng)物笛細(xì)胞圾進(jìn)行臨毒理聾學(xué)體周外實(shí)條驗(yàn)有潛兩種蹲方法莊：一耍是建酒立正靜在迅漲速生棋長(zhǎng)的紫細(xì)胞委株，辦用以事觀察脆受試慧物對(duì)巴整體羊細(xì)胞壯的一丸般毒盯作用扯和正去在分色裂組蔥織的纖毒作抖用；鍵二是占利用箏已高剩度分饑化的蟻細(xì)胞足，無恐論是駕原代職培養(yǎng)爬或是桂特定割的細(xì)驕胞株作，研唯究受帳試物狠對(duì)已賞分化易成熟身的細(xì)塌胞或閑其功過能的迷特殊塊毒作增用；趣顏義二、朱基本化技術(shù)習(xí)儀器便與設(shè)米備析騎1.義培炊養(yǎng)箱維匹一般樓來說獅，在志5％叛CO躬2俗，9蜻5％把空氣阿和9蹈9％則的相例對(duì)濕魯度的挖條件于下，去許多團(tuán)細(xì)胞母可存跪活。茂故細(xì)積胞培緒養(yǎng)的偉關(guān)鍵秀設(shè)備箭是C特O材2攻培養(yǎng)茂箱。墳其基冊(cè)本要粥求：論①冊(cè)精確性地溫鑰度控麥制調(diào)招節(jié)，朽一般朝在土之0.歌5雪℃配，箱落內(nèi)溫辰度的充均衡友可依展賴風(fēng)者扇；激②出CO員2瞞濃度亞調(diào)節(jié)狀，利魔用C練O摸2驚傳感冷器監(jiān)熄測(cè)箱塵內(nèi)C丈O挽2敲濃度犧；使上箱內(nèi)胃大氣劇為5昏％C機(jī)O嚴(yán)2耳，9燦5％粘空氣毛；竹③據(jù)箱內(nèi)答濕度呢，可貿(mào)用水年盤來哄維持把。有陶的細(xì)葛胞培喉養(yǎng)可汁以不遙控制件CO慮2標(biāo)分壓暢。例辟如，即原代悟肝細(xì)率胞培漸養(yǎng)，鴉可用文Le突ib憲ov魯it暑zL麥-5棉介質(zhì)不，不敢需C蘇O會(huì)2優(yōu)，而區(qū)要求純敞開必培養(yǎng)江瓶，兩以供蛛給較淋高的拖O放2案分壓墾。貧汁顯2.撈冰檔箱和煎冷柜拳瓦冰箱珍(4蹈℃湊)用良于存討放培榜養(yǎng)介永質(zhì)，械冷柜儲(chǔ)(角—熟20鐘℃邪)則衣存放凡酶，慎(如推胰蛋阻白酶慢)和終某些閥培養(yǎng)飯介質(zhì)鹽如谷喊氨酸南和血燥清。軌體談3.桃顯貪微鏡訪舉最基奸本的琴配置艙是一饞臺(tái)簡(jiǎn)蠢單的射倒置聰顯微儀鏡，僑用作夸日常斗觀察汗培養(yǎng)險(xiǎn)中的架細(xì)胞打，以偏便依叉據(jù)細(xì)現(xiàn)胞生譜長(zhǎng)狀予況，量進(jìn)行嫌調(diào)整參或?qū)υ形廴酒M(jìn)行僅補(bǔ)救廚或處拜理。愉進(jìn)行桐進(jìn)一擊步的價(jià)研究稠，則屬需要譽(yù)更高累級(jí)的熊顯微屠鏡，煤例如無，相央差顯奮微鏡秤或熒柴光顯殲微鏡愿，并嶺附有姥照相翁裝置冊(cè)或攝針影裝煙置。襖帥鋤爹射4.筆超巡凈工恢作臺(tái)稿壯在沒崇有無辦菌操壘作室第的條婚件下服；可緣用超閥凈工偉作臺(tái)評(píng)。它躁是一皇無菌戀操作陳裝置言，主蚊要是慮利用狡鼓風(fēng)威機(jī)，流驅(qū)動(dòng)狀空氣復(fù)通過困高效魂濾膜寺凈化炊后，禾緩緩房通過宮工作舞臺(tái)面室，使談工作潛部位疑構(gòu)成瞧無菌材環(huán)境裂。它管具有磚占地軟面積餡小，怠操作碰方便亂等優(yōu)躍點(diǎn)，襪但它拜尚難韻絕對(duì)反除去自病毒宣類微婆生物戒，而膊且灰寫塵過戚多對(duì)牢凈化轉(zhuǎn)作用旅不利抖，故族超凈惡工作申臺(tái)最元好安屋置在眼清潔舟無塵擴(kuò)的房防間。拖塔棵溝畢5.踢清誤洗和順消毒燒設(shè)置凝：培澡養(yǎng)中附所用蠟玻璃械器皿市可用椅電熱興干燥災(zāi)箱消炕毒，畜要求襲溫度蠶16刃0博℃足以上陵，最輕好使識(shí)用較掉大規(guī)瞎格的湯干燥其箱，櫻如6催50東×冷50供0巾×塘50扁0m嘆m。期藏囑器皿濁的清獨(dú)洗可慚用超州聲波努洗滌形器。轟吸管粉的清艘洗采命用虹齊吸原栗理制傍成的統(tǒng)沖洗貞裝置擋。金讓屬器允械如啊解剖強(qiáng)刀、墨虹膜感剪、秋鑷子置、尖尤鑷、頭止血佳鉗等朋可用銹高壓信蒸汽揉消毒助。捷怨疲6.逮培明養(yǎng)器療皿喪為竟了清掩洗的反方便解，塑福料瓶挑皿正呀逐步旱取代幫玻璃沃瓶皿文。特覺制的栽塑料麗瓶皿革具有駕透明馳、平滑滑、壟無毒疑性、賊有利蒸于細(xì)壽胞生姐長(zhǎng)的吊優(yōu)點(diǎn)筋。主少要的忙塑料唉瓶皿艱有；謊①鄉(xiāng)多孔巾培養(yǎng)曲板，紡其規(guī)凈格有汪4孔旗、6暴孔、羊24艘孔及感96賺孔，按它體鍵積小嗎，適鮮于少圍量細(xì)輸胞或母單個(gè)古細(xì)胞獅克隆質(zhì)的生汽長(zhǎng)；罰②氏培養(yǎng)目皿，若規(guī)格闊有直蓄徑3翁0m壇m、讓60鳴mm康及l(fā)端00著mm促，與響玻璃押培養(yǎng)祝皿相飲同，奮尤其斜有利折于集白落形墻成和沙細(xì)胞隱轉(zhuǎn)化鏡等試通驗(yàn)；容③盲培養(yǎng)嶄瓶，暫帶有拜螺旋瞎蓋塞梳，規(guī)閱格有暑30做ml港、5技0m尾l、嫁l0妄0m踩l及渴50痕0m涼l，揚(yáng)適于賊在C疊O鄰2闊培養(yǎng)蓄箱中于使用直；壁④臣其它謝：凍景存細(xì)仿胞的仁塑料傷安瓿洋及微飾量加示樣器迅頭，點(diǎn)后者熱的規(guī)筒格有漢20兔0~逗10僑00奪μ態(tài)1和心1婦μ坊l~謀10央0顆μ子l二溉種。防悲妄賽仿玻璃仇器皿嫂在實(shí)受驗(yàn)室鐮仍不漂能完笛全被術(shù)塑料深制品級(jí)取代臭，除粘培養(yǎng)歲皿和瓶培養(yǎng)沈瓶外昏，主等要還繩有：宴①減吸管忙，它伙包括棍刻度鉆吸管壞和移澡液管侄，常今用規(guī)監(jiān)格有恰l0榮ml木，5趁ml模和l素ml歸；辮②浙玻璃余瓶，掃用于姜配制受各種釘培養(yǎng)墻液的配儲(chǔ)貯蜜存液羅和血攀清等鴉，可糊用生殃理鹽壺水瓶軋或血聰漿瓶塘代替豬，規(guī)寺格有憤50日0m但l、幻25旱0m胡l和虧l0發(fā)0m技l；律③厚離心輝管，導(dǎo)規(guī)格們有5場(chǎng)0m澡l、獵l0舍ml候和5建ml和，用僚于細(xì)擴(kuò)胞洗風(fēng)滌?？錉斁d7.子液躁氮貯糧存器嗽恭貯存醋細(xì)胞碑多用攝液氮盯，液聰?shù)獪貍兌仍谑?1護(hù)96溪℃?zhèn)?，具燈有?jīng)儀濟(jì)、褲省力奪和能暗較好料保持舌細(xì)胞多生物時(shí)學(xué)特別性的串優(yōu)點(diǎn)扁。液鑰氮貯冒存器蠅有2暗5L浸和5且0L離兩種久規(guī)格堤，它木與液碰氮運(yùn)馬輸瓶籌，或病稱杜造瓦瓶費(fèi)不同足，因三液氮獸貯存婚器一闊般每辮兩周奏需補(bǔ)苦充一迷次液悲氮。串如有炊需要不可配堪置貯弊存器裂和運(yùn)曬輸瓶惰。匯像屢8.路水茄純化醬裝置銅倚細(xì)胞騰培養(yǎng)塊對(duì)水教的要軍求較于高，眼通常辭要求成使用亦三次妻蒸餾取水配談制各套種培健養(yǎng)液健。對(duì)捷玻璃算器皿珠也應(yīng)梅用純襯水清記洗。的但是寒，在聯(lián)細(xì)胞冰培養(yǎng)慚中，綿不宜僻使用府去離丙子純隨水，看因其狹不能間有效俘地去黎除有河機(jī)物澇。宜故今實(shí)驗(yàn)鋒室應(yīng)索配備壁自動(dòng)蜻加水麻石英睛玻璃管管加亡熱的籌蒸餾稻器，牽具有線蒸餾桿速度恢快，桿使用柔安全宏等優(yōu)并點(diǎn)。坐外購(gòu)周蒸餾度水或癢去離滋子，勿應(yīng)在材本實(shí)喉驗(yàn)室眼重蒸選后使峽用。筍對(duì)水儀質(zhì)量藏應(yīng)經(jīng)惜常檢尺測(cè)，葉如p估H和痰電導(dǎo)泥系數(shù)件。同富一實(shí)萌驗(yàn)盡蜂量使述用同盒一水欲源，載避免冒水質(zhì)奮量造嫌成結(jié)候果的訂差異曲。單歡冷厲裂9.斥濾綁過消漠毒裝筋置居培攝養(yǎng)介樸質(zhì)不緣能經(jīng)端高壓是蒸汽穩(wěn)消毒員，而巧需通綱過孔世徑為渣0.艷22是μ猛l的再濾膜疫過濾揀消毒裝。濾室過消太毒裝柜置由刑抽氣贊泵(捆水流局玻璃鳴抽氣峰泵或傻真空能泵)構(gòu)、安劇全瓶效、抽寶濾瓶匠和濾持器組憶成。賭10屠.靈一般航設(shè)備涉理離心疾機(jī)，特用于區(qū)對(duì)細(xì)哭胞懸鎖液離緣心處案理，略以達(dá)賺到細(xì)煎胞洗奪滌、拋調(diào)節(jié)余細(xì)胞繞濃度兼等。纖瞞遺天平別，包悔括普著通臺(tái)衫秤、劍扭力紡天平派和分滴析天奧平，帶用于引配制貓各種卻培養(yǎng)坐液、競(jìng)酶消壞化液境及生余理鹽絮水等得。圖躲洲纏熱酸度伸計(jì)，綠用于晃準(zhǔn)確紹調(diào)整交各種未介質(zhì)踢及生他理鹽艘水的嬸pH當(dāng)。謝兵碑電磁行攪拌墻器，飄微量徐加樣轉(zhuǎn)器等康。鞋論帝(二快)狂培養(yǎng)摧用液鐵胞除指細(xì)舅胞培環(huán)養(yǎng)中村所使硬用的油溶液時(shí)，如笑培養(yǎng)慚液、唐消化龍液、主pH惡調(diào)整怕液、徹染液銳及細(xì)菠胞洗芒滌液荷等。峽培養(yǎng)螺液的突選擇襪取決御于細(xì)六胞生蔑長(zhǎng)的簡(jiǎn)要求構(gòu)，故廈它是躲維持尿細(xì)胞中生存事和生堆長(zhǎng)所額需的炕基本蝶溶液球，它計(jì)的主編要成徒分為費(fèi)平衡傷鹽溶紙液和屋適應(yīng)足細(xì)胞年體外執(zhí)培養(yǎng)旁的各超種溶蠶液。準(zhǔn)豐運(yùn)銳津培養(yǎng)預(yù)液在藝制備牧過程沾中應(yīng)耀嚴(yán)格情操作血，避郵免混幕入雜夾質(zhì)。汁應(yīng)特文別注協(xié)意下顫列問奇題：嫌①奔容器冰，應(yīng)靠仔細(xì)童認(rèn)真已清洗雅，必轎要時(shí)跪須消思毒；燥②葡水，逃三次懲重蒸芝蒸餾蝦水；?、垭s嚴(yán)格劃選擇害品質(zhì)黎優(yōu)良連的藥立品；怒④成制備嶼好的藏培養(yǎng)貌介質(zhì)岔要標(biāo)邪明名絞稱、傾配制瓶日期猜及配尋制者醫(yī)；麗⑤妙貯存辯與消絹毒。析藏喝窩衫1.抓平基衡鹽炸溶液么泡常用岡的有煙Ha倚nk起s液謝、E畝ag假le厚液及窩磷酸潮鹽緩俊沖液朽(托PB洞S)更等。視它具懼有維馬持滲蝦透壓皮、控載制酸胞堿度厲平衡警的作車用及刺供給捉細(xì)胞妥生存或所需覆的能刑量和乞無機(jī)諸鹽的笑成分直。它彈是配征制各亦種培拍養(yǎng)介懂質(zhì)的死基礎(chǔ)娛溶液你，也只是洗頌滌細(xì)碎胞的殼溶液偵。記隆做規(guī)暴2.胞小登牛血度清刊是諷細(xì)胞高培養(yǎng)呆中最崗常見扔的天朽然培鎮(zhèn)養(yǎng)基意，它劈具有憲豐富顆的營(yíng)騾養(yǎng)物應(yīng)質(zhì)，栗對(duì)細(xì)估胞附的著和受保護(hù)劍也有評(píng)明顯宮的作正用。恰但它云有成畏分較蔑為復(fù)更雜、芝個(gè)體悟差異尖較大突、來惑源也副有一典定的生限制蹤等不霧足。宏彌補(bǔ)旱個(gè)體湊差異變的辦三法是濁對(duì)血若清進(jìn)聰行無立菌檢任測(cè)和顯支持隸生長(zhǎng)佩能力柿測(cè)定修后，補(bǔ)混合祝使用跪。天豈然培歲養(yǎng)基須除小洋牛血種清外蛙，還帝有雞靠血漿姐、雞局胚浸怎出液專、水漢解乳窯蛋白夕和鼠戀尾膠滋原等錫。全霸票3.郵合捏成培呆養(yǎng)基聯(lián)怪系依銹據(jù)天乖然培造養(yǎng)基慕的成蒜分，劫用化鳥學(xué)物柳質(zhì)模牽擬合悲成的鍬。如航最簡(jiǎn)曠單的否ME評(píng)M集Ea飽gl爹e培品養(yǎng)液笛，包搭括1平2種本必需擺氨基參酸、蒼谷氨浩酸胺紹和8厘種維掙生素洲。根京據(jù)需框要可術(shù)添加初某些叉成分古，如受碳水身化合左物(半葡萄利糖、腔核糖藝、脫取氧核店糖及遍丙酮尤酸鈉皇等)駕、核劉酸的值前體社物(戚嘌呤化和嘧證啶類覺化合辦物)姐及氧嚷化還掙原劑云，抗才壞血?dú)W酸、肥谷胱杠甘肽宰等。淘拉番如進(jìn)別行無糠血清座培養(yǎng)破，除腫上述缸營(yíng)養(yǎng)悼成分瞞外，星還應(yīng)膝加入秩纖維貨連結(jié)撲素、摩多聚毫賴氨甲酸和溜膠原對(duì)等成劈分以魔促進(jìn)親細(xì)胞燥貼壁介。有癢時(shí)，偵還需裳要加婆入酶帝的抑幟制劑滾，如谷大豆拉胰酶慰抑制陽劑。泡降忌為了崇防止顧由于再操作瑞不慎家所致神的污耽染，曉可加噴入抗卡生素退。常樓用抗念生素重有青療霉素怨、鏈籠霉素賺及慶旬大霉秒素等武。處下箏4.假消套化液順熱進(jìn)行鴨傳代魂細(xì)胞疾培養(yǎng)爺時(shí)，跌為了起使細(xì)炒胞脫騙離生場(chǎng)長(zhǎng)表苦面和郊細(xì)胞貸離散雕成單查個(gè)細(xì)肉胞，琴通常巧使用丸消化少液。猛常用菜的消鬧化液取有胰仙蛋白廣溶液逼(0營(yíng).2陶5％沫或0造.1荷25刑％)匆和乙娃二胺嗚四乙短酸二嫁鈉(泡Na喂2把-E陵DT爽A)望溶液斗(0匆.0棋2％派)。兵援鑒奔漠5.恩其乳它他p侮H調(diào)慚整液蛇，為觸了營(yíng)渾養(yǎng)成足分穩(wěn)姨定和算延長(zhǎng)嬸貯存城時(shí)間就，配甚制生苦理鹽削溶液齡，和煌培養(yǎng)虧液時(shí)鍋，均那在臨重用前蠻加入億Na彼HC樹O褲3硬溶液罷。常狐用濃脫度有蘇3.廉7％方、5頸.6吹％和快7.政4%極。此發(fā)外，蜓還有虹HE茶PE褲S溶穗液，鞏是一腸種氫姻離子罰緩沖吹劑，偏能較眠長(zhǎng)時(shí)逝間保敞持恒漲定的光pH礦值范殖圍。講使用嫩終濃山度為構(gòu)10悉～1小5m堤mo梁l／耕L。溉喘削染色蕩液：劫常用紛的有愿①儲(chǔ)蘇木起精-杯伊紅召染色警液或悶稱H踩.E已染色磨；淋②剩Gi圈em救sa拳染色若液。繭質(zhì)肌固定啄液：享常用來的有腿①萌中性逮緩沖違福爾捐馬林泛，相警當(dāng)于車10純％的枯福爾叫馬林萄；強(qiáng)②棄Bo點(diǎn)ui奴n氏孔固定騎液；拼③泛醋酸種甲醇古，臨愚用前掙配制迫，結(jié)厲合G雜ie捧ms劉a染侄色效敬果較竊好；僵④桌FA璃A固朝定液救，由衛(wèi)福爾商馬林逢、冰猴醋酸覺及8廳0％燙酒精疊組成礎(chǔ)，用民于蓋廊片單狹層培臟養(yǎng)的慘固定蔬。嗚昂址(三毛)駱消毒普技術(shù)言膚擠在細(xì)羞胞培敞養(yǎng)中蔥，消晌毒是煮最基兇本的惱一項(xiàng)絹工作光，它際直接紐影響登實(shí)驗(yàn)員的結(jié)擴(kuò)果。鉤消毒伴措施往應(yīng)在肌細(xì)胞吼培養(yǎng)監(jiān)的每立個(gè)環(huán)標(biāo)節(jié)嚴(yán)壁格執(zhí)些行。屑細(xì)胞徒培養(yǎng)虹的微銹生物偶污染疼，包宴括細(xì)域菌、辱真菌著及病解毒，針?biāo)鼈兦f主要問來源黃于：殺操作侮者的稠粗心接；操吸作表未面或擁周圍查的環(huán)腸境；驚培養(yǎng)翁液及紙培養(yǎng)橋器皿蝶的滅默菌不汗徹底津或存分放時(shí)踩間過棵久等歪。韻摘成對(duì)不曉同的階細(xì)胞寶培養(yǎng)蘋所用扁物品果，可啦采用困不同器的消拒毒滅流菌的稍方法字。一埋般有可兩類肆：一細(xì)是物谷理滅化菌法復(fù)，即昂利用物紫外剪線、拜干熱提及微款孔過聚濾等賭；二庭是化榴學(xué)滅溪菌法森，即蘇利用向化學(xué)鏟消毒遞劑。溫主要輝消毒凳方面纏法介弱紹如蠅下：曬改胳1.同紫惡外線墳超適于客消毒平空氣玻、操墳作表綁面及匆一些腸不宜察用其職它方芝法消詢毒的贈(zèng)物品至和培恭養(yǎng)板澡等，鳴使用通方便碰，效慶果較珠好。疊應(yīng)注旁意其踢可產(chǎn)跳生臭犬氧，感影響景健康帳。過病罰等駝2.妖高爸壓蒸巴氣消父毒您它斃適于奮金屬邁器械務(wù)、膠錘塞、持布類銹及某努些培雪養(yǎng)液澡。一宇般要鞋求1越5磅種壓力仰下2柿0m倘in駝。或燕者更霧簡(jiǎn)單鋼的，煉煮沸排消毒撲，其捕不足戚是濕辣度大華，不晚易久刪存。勻截脾3.趁干遮熱消槍毒管適臨于玻傅璃器復(fù)皿，具消毒育后器捉皿保借持干加燥并堵便于彼使用禾貯存引。加紗溫應(yīng)鍛到1資60殘℃肯，?？沙?撈0-速12盟0m動(dòng)in始?？妨?.麻濾堪過消撒毒販適臥于大盆多數(shù)泛培養(yǎng)道用液多。選旱擇孔顛徑為棟0.更22厭μ飼m的武微孔普濾膜構(gòu)，過千濾除到菌效木果較紐佳。鞭蓮燦5.熟消柱毒劑降孤適于風(fēng)操作樂者的啟皮膚撿、操聞作表煤面和向臺(tái)面挎、桌志椅及踐墻壁騙等，化常用甲的消躍毒劑間有來敵蘇兒辱、新姨潔爾迷滅、陳過氧衰乙酸嗚及7撐0％煙酒精租。貸三、尖培養(yǎng)垂細(xì)胞衣的鑒欲定女腥混絡(luò)揭對(duì)培圾養(yǎng)細(xì)悼胞的扶鑒定獵有兩忌個(gè)目徒的：奶一是幟觀察逐培養(yǎng)槳有無到變化威，以符決定謙是否壁終止嶺培養(yǎng)繩，并利從冷潔凍貯歐存的普樣品楚重新方建立溝新的譜培養(yǎng)哀細(xì)胞魯；二基是培屋養(yǎng)條苦件(執(zhí)如培沃養(yǎng)液添)變傍化，騾對(duì)培亞養(yǎng)細(xì)蠢胞的省影響墾。因館為培鍬養(yǎng)條頭件的糊一致楊性，翠對(duì)于甲實(shí)驗(yàn)練結(jié)果誼的可現(xiàn)信性幻有極堡為重牢要的比影響附。對(duì)逗于培功養(yǎng)細(xì)跟胞的違鑒定她包括瑞污染昆鑒定見、生鴉存指繪標(biāo)及雷細(xì)胞窮性質(zhì)憲(如吊細(xì)胞餃形態(tài)靈、生限長(zhǎng)特恭性、誘染色絞體數(shù)浙目及衫結(jié)構(gòu)膀等)疑。蔽強(qiáng)爹(一貿(mào))鈔污染兆鑒定員中吳細(xì)胞囑培養(yǎng)尿中常主見的雁污染椒有真駝菌、巡細(xì)菌學(xué)和支晴原體走等，制此外跟有化壺學(xué)物籮和非盛同一瓶種細(xì)丹胞的拌污染悼。受描到污銹染的冷細(xì)胞祥培養(yǎng)專可明圓顯地逝改變王生長(zhǎng)億特性屆，引洗起p丘H變鋼化和榮生長(zhǎng)夢(mèng)遲緩擁。污喘染常魔常表昆現(xiàn)為魂pH迎變化嘆，培棕養(yǎng)液棍表面辦起泡望或起陸膜，舊培養(yǎng)擾液中址的絮好狀物挽及細(xì)江胞生竟長(zhǎng)表鑰面的熔斑點(diǎn)棄，搖閃動(dòng)培務(wù)養(yǎng)器早皿可漿消失蛇。肉災(zāi)眼見她不到恥的污島染可穴影響決細(xì)胞流的代軌謝。捎革鳳1.臨鑒府定方仇法宵真賄菌或罰細(xì)菌診的污詞染可扎用肉頸眼或怖低倍問光學(xué)藝顯微紫鏡觀錯(cuò)察，嶄支原唉體僅卷能用堤特別際的熒塊光染芝料如柳Ho場(chǎng)ec絕hs階t梁33咳25估8染纏色后蛛在光玻學(xué)顯憂微鏡番下，酒或用次掃描滅電子庸顯微竿鏡觀碌察。千由于芬用肉信眼無粉法發(fā)泰現(xiàn)支拍原體垂的污蜻染，牌在細(xì)輩胞培根養(yǎng)過幅程中乞應(yīng)經(jīng)蓋常定盟期檢扣查，換例如糾每三府個(gè)月立。最賢簡(jiǎn)便附和最姜可靠姜的檢泄測(cè)支膨原體待的方備法是移用熒副光染侵料染軍色在約顯微惹鏡下仍觀察外。害奉制2.歐處秒理拉基奧本的炭良好粗消毒研技術(shù)熔并不拼一定倚能防蠶止污況染，瞇還應(yīng)鄭注意賊下列厭方面型：消煙毒步獅驟(榨如高氏壓鍋艘和干沫熱消佳毒柜歸)的跳效果顧；多被層流村防護(hù)背罩的風(fēng)消毒掉效果察；經(jīng)吳常檢驚查培州養(yǎng)器級(jí)皿；營(yíng)每個(gè)溜工作魂者有焰自己梨配制揚(yáng)的培昆養(yǎng)用蒜液，壺處理誓受污團(tuán)染的埋培養(yǎng)晴用具箱和環(huán)誘境。賣對(duì)于我已污氧染或冊(cè)懷疑驗(yàn)污染爛的培怨養(yǎng)用肢具均原可用證2.澇5％埋高氯餐酸處屈理。搬用抗借生素說對(duì)預(yù)亦防或算去除刻細(xì)菌收污染填較為雜有效悄。對(duì)雙支原史體污溜染，破消除住方法江較多黎，如稠抗生什素、專加溫讓及動(dòng)遇物體蓬內(nèi)接靈種等嶺，但協(xié)都較瓜為繁冬瑣，瞇且效下果不例甚滿湯意，項(xiàng)最好隱的辦企法是多棄去直，再洞重新驗(yàn)培養(yǎng)工。內(nèi)孩福(二給)種生存順指標(biāo)倒誓從1.何臺(tái)忽盼藍(lán)塌排斥約試驗(yàn)補(bǔ)開是判駛定細(xì)臺(tái)胞損案?jìng)暮憧焖俜窃囼?yàn)蓮，它厲還可利很方吼便進(jìn)事行細(xì)蔽胞計(jì)扇數(shù)。任具體槽方法貼如下促：汪①被取少葉量細(xì)蔥胞混調(diào)懸液緞，加雪人等起量的縮0.肉5％瑞臺(tái)盼喚藍(lán)溶捷液。嘗②擊放置穿1-遞5m闊in壤后，摘將混帳合液統(tǒng)滴入杏血細(xì)刻胞計(jì)誘數(shù)池狂內(nèi)。射③霸顯微敞鏡下檢，細(xì)伍胞顯胡藍(lán)色燙的為元死亡鹿細(xì)胞款，尤內(nèi)其是矮核深霧染，信而未蜂染的鬼細(xì)胞紙為存鳥活細(xì)看胞?？v統(tǒng)計(jì)壁出細(xì)憲胞總毛數(shù)后城，可來計(jì)算閱出細(xì)票胞存盛活率役。明過酸2.升酶兼漏出客的檢貼測(cè)里胞仍漿酶吳如乳鹿酸脫層氫酶盆(L塔DH墨)的復(fù)漏出日檢測(cè)惕也與吼染料百排斥碧試驗(yàn)麗有同沈樣的淹靈敏翁度，效同時(shí)恨，可專更精豈確地于進(jìn)行阻定量眨，但嘆操作雞時(shí)間震較長(zhǎng)搏。仇拴藝(1語)詳儀器康：分覆光光列度計(jì)廟，最廁好配屢有溫非育(蛾37陽℃愉)的么裝置閉。逼蛛池(2廉)亞試劑艘：淹仰民溶液隸召0.吐9％喬N(yùn)a娃Cl怖，0吉.1脖％T置ri伏to腔rX栗-1蹦00壤和0津.1障％牛蹤血清雙白蛋竟白。數(shù)北形底物杯姥3.鐮5g徐K著2斑HP辜O激4短，0鉤.4牙5g譽(yù)kH集2室PO換4會(huì)和3說1.炕0m轉(zhuǎn)g丙雞酮酸挺鈉溶需于4匠50立ml卻的蒸斧餾水爺。配束好后紫，可平貯存峰于-務(wù)20威℃爽的冰健箱內(nèi)勝。怠錫甲NA敲DH挽，稱秘42距mg平，溶銷于4虛.5束ml衫的1紛％N意aH奮CO唱3蠅，臨互用前餃配制脹。軟退沿(3串)療操作撓步驟獲：離蘿心，射以適哲當(dāng)速殘度使遞所有憤細(xì)胞羽沉淀啟而不酒引起陳細(xì)胞背損傷殼。例串如肝肚細(xì)胞蠻用5瘡0g幸×我2m健in宜。取個(gè)出上燃清，黃放人器干凈這試管捐，并本保持偷0乞℃眨以下焰?zhèn)溆孟?，加匠入等止量的衛(wèi)溶液茶至細(xì)杠胞沉束淀，桃用漩晉渦混議合器晌混合萍。保淺持在南0毯℃徹以下矛，備甘用。孝芬帝取一同比色清杯，翼加3勢(shì)ml筍底物笛，5仰0該μ兼l的目NA犁DH堤和2等5~曾20灣0速μ偏l的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