藥物分析 第六章 芳酸類非甾體抗炎藥物的分析

第六章芳酸類非甾體抗炎藥物的分析

藥物分析主講:戈振凱非甾體抗炎藥（NosteroidalAntiinflammatoryDrugs，NSAIDs）是一類不含有甾體骨架的抗炎藥，多數(shù)具有芳酸基本結(jié)構(gòu)。分類：（芳基的取代位置及芳基上的取代基）水楊酸類（鄰羥基苯甲酸）鄰氨基苯甲酸鄰氨基苯乙酸芳基丙酸吲哚乙酸苯駢噻嗪甲酸尼美舒利對(duì)乙酰氨基酚第一節(jié)典型芳酸類非甾體抗炎藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點(diǎn)3第一節(jié):結(jié)構(gòu)與性質(zhì)酸性酸性光譜特性4第一節(jié):結(jié)構(gòu)與性質(zhì)酸性酸性光譜特性基團(tuán)特性5第一節(jié):結(jié)構(gòu)與性質(zhì)酸性6第一節(jié):結(jié)構(gòu)與性質(zhì)酸性光譜特性7第一節(jié):結(jié)構(gòu)與性質(zhì)水解光譜特性8第一節(jié):結(jié)構(gòu)與性質(zhì)其它非甾體類抗炎藥水解光譜特性9第一節(jié):結(jié)構(gòu)與性質(zhì)二、主要理化性質(zhì)（一）酸性具游離羧基顯酸性，酸性受苯環(huán)的取代位置及苯環(huán)上其他取代基的影響◆—CH3、—NH2等斥電子取代基存在使酸性減弱◆—X、—NO2、—OH等吸電子基團(tuán)存在酸性增強(qiáng)

◆鄰位取代酸性>間位、對(duì)位取代酸性10（二）水解性具有酯鍵：阿司匹林、雙水楊酯具有酰胺鍵：吲哚美辛、吡羅昔康、對(duì)乙酰氨基酚◆利用其水解得到酸和醇的性質(zhì)可進(jìn)行鑒別◆利用酯水解定量消耗氫氧化鈉的性質(zhì)，可用水解后剩余滴定法測(cè)定含量◆芳酸類藥物還應(yīng)檢查因水解而引入的特殊雜質(zhì)第一節(jié):結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（三）具有紫外和紅外吸收（四）基團(tuán)或元素特性酚-OH顯色二苯甲酮顯色SPbS↓Fe3+苯肼D分解Pb2+苯環(huán)和特征取代基第一節(jié):結(jié)構(gòu)與性質(zhì)特點(diǎn)：（1）反應(yīng)適宜的pH值為4~6（2）反應(yīng)極為靈敏（3）各反應(yīng)的方法第二節(jié):鑒別試驗(yàn)一、與三氯化鐵反應(yīng)顯色具酚羥基或水解后能產(chǎn)生酚羥基的藥物第二節(jié):鑒別試驗(yàn)1、水楊酸反應(yīng)

藥物試驗(yàn)方法結(jié)果水楊酸水溶液紫堇色阿司匹林加熱水解后反應(yīng)紫堇色雙水楊酯氫氧化鈉試液中煮沸紫色二氟尼柳溶于乙醇深紫色14第二節(jié):鑒別試驗(yàn)水楊酸反應(yīng)15第二節(jié):鑒別試驗(yàn)顯玫瑰紅色顯淡紫紅色酚羥基反應(yīng)2、酚羥基反應(yīng)（三氯甲烷溶液）16第二節(jié):鑒別試驗(yàn)二、縮合反應(yīng)顯色二苯甲酮結(jié)構(gòu)酸性條件下與二硝基苯肼縮合生成橙色偶氮化合物17第二節(jié):鑒別試驗(yàn)三、重氮化-偶合反應(yīng)

分子結(jié)構(gòu)中具芳伯氨基或潛在芳伯氨基的藥物臨用新配注意：在鑒別時(shí)，首先要使溶液成酸性，然后才能滴加亞硝酸鈉試液及堿性β一萘酚試劑。18第二節(jié):鑒別試驗(yàn)水解反應(yīng)產(chǎn)生芳伯胺芳伯胺重氮化偶合反應(yīng)對(duì)乙酰氨基酚19重氮化-偶合反應(yīng)貝諾酯橙紅色第二節(jié):鑒別試驗(yàn)四、氧化反應(yīng)甲芬那酸＋H2SO4

深藍(lán)色隨即變?yōu)樽鼐G色第二節(jié):鑒別試驗(yàn)吲哚美辛硫酸共存，與重鉻酸鉀共熱，顯紫色鹽酸溶液中，與亞硝酸鈉溶液反應(yīng)顯綠色，漸變黃色五、水解反應(yīng)阿司匹林白色水楊酸醋酸臭氣第二節(jié):鑒別試驗(yàn)雙水楊酯與氫氧化鈉試液煮沸后，加稀鹽酸，即生成白色水楊酸沉淀；沉淀在醋酸銨試液中可溶解。第二節(jié):鑒別試驗(yàn)六、特征元素反應(yīng)1、氯元素的鑒別含氯藥物經(jīng)過(guò)前處理，顯氯化物的鑒別反應(yīng)2、硫元素的鑒別美洛昔康中含有二價(jià)硫，分解產(chǎn)生硫化氫，遇醋酸鉛生成硫化鉛黑色沉淀利用藥物所具有的紫外和紅外吸收特征進(jìn)行鑒別紫外：1、最大吸收波長(zhǎng)法：如雙氯芬酸鈉的水溶液在276nm有最大吸收2、最大與最小吸收波長(zhǎng)法：布洛芬3、吸光度法：甲芬那酸4、吸收度比值法：二氟尼柳七、紫外吸收和紅外吸收光譜法第二節(jié):鑒別試驗(yàn)IR：阿司匹林-COOH-OH-COOHPh-C鄰位取代Ph第二節(jié):鑒別試驗(yàn)N-HO-HN-HPh:C=C芳胺酚第二節(jié):鑒別試驗(yàn)第二節(jié):鑒別試驗(yàn)供試品保留時(shí)間對(duì)照品保留時(shí)間薄層色譜法高效液相色譜法八、色譜法表6-3典型非甾體抗炎藥物的主要有關(guān)物質(zhì)藥物名稱有關(guān)物質(zhì)結(jié)構(gòu)式代碼/名稱藥物名稱有關(guān)物質(zhì)結(jié)構(gòu)式代碼/名稱阿司匹林雙水楊酯游離水楊酸萘普生I．

6-甲氧基-2-萘乙酮甲芬那酸2,3-二甲基苯胺對(duì)乙酰氨基酚氨基酚對(duì)氯苯乙酰胺第三節(jié):特殊雜質(zhì)及其檢查法一、阿司匹林和雙水楊酯生產(chǎn)工藝ASA副產(chǎn)物水楊酸雙水楊酯第三節(jié):特殊雜質(zhì)及其檢查法酰化不完全+水解（精制、制劑、貯藏）易氧化成有色醌類化合物，有毒ChPbefore2010用水楊酸與Fe3+

生成紫堇色配離子的原理,用稀硫酸鐵銨溶液顯色法檢查供試品溶液制備過(guò)程中阿司匹林水解ChP2010（HPLC）供試品溶液：1%冰醋酸甲醇溶液（防水解）外標(biāo)法；不得超過(guò)0.1%原料、制劑限量不同第三節(jié):特殊雜質(zhì)及其檢查法1.游離水楊酸第三節(jié):特殊雜質(zhì)及其檢查法淡黃紅棕深棕色HPLC法31

限量要求＊原料藥：0.1%

＊阿司匹林片：0.3%

＊阿司匹林腸溶片：1.5%

＊阿司匹林腸溶膠囊：1.0%

＊阿司匹林泡騰片：3.0%

＊阿司匹林栓劑：3.0%第三節(jié):特殊雜質(zhì)及其檢查法①未反應(yīng)完全的酚類②水楊酸精制時(shí)溫度過(guò)高產(chǎn)生脫羧副反應(yīng)的苯酚③合成工藝過(guò)程中由副反應(yīng)生成的醋酸苯酯、水楊酸苯酯和乙酰水楊酸苯酯等10版藥典：反相色譜法，采用不加校正因子的主成分自身對(duì)照法，所有雜質(zhì)峰（扣除水楊酸峰）之和不得大于對(duì)照液主成分峰面積05版藥典：以“溶液澄清度”檢查碳酸鈉試液中不溶物（利用雜質(zhì)和藥物溶解行為的差異）第三節(jié):特殊雜質(zhì)及其檢查法2.其它有關(guān)物質(zhì)醋酸苯酯水楊酸苯酯乙酰水楊酸苯酯HPLC法第三節(jié):特殊雜質(zhì)及其檢查法34雙水楊酯中游離水楊酸的檢查：水楊酸與三價(jià)鐵生成有色配位化合物，在530nm下測(cè)定原料限度：0.5%

片劑限度：1.5%第三節(jié):特殊雜質(zhì)及其檢查法二、甲芬那酸中2,3二甲基苯胺的檢查第三節(jié):特殊雜質(zhì)及其檢查法甲芬那酸主要以鄰-氯苯甲酸(o-chloroben-zoicacid)和2,3-二甲基苯胺(2,3-dimethyl-aniline)為原料,在銅的催化下縮合而成。(1)合成工藝(2)2,3-二甲基苯胺的檢查ChP曾采用HPLC法檢查有關(guān)物質(zhì):單一雜質(zhì)的限量為0.1%雜質(zhì)總量為0.5%第三節(jié):特殊雜質(zhì)及其檢查法GC法ChP2010規(guī)定：

HPLC法檢查:“有關(guān)物質(zhì)”外，采用GC檢查2，3-二甲基苯胺(0.01%)2,3-二甲基苯胺可引起高鐵血紅蛋白血癥，并對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)及肝臟有損害37第三節(jié):特殊雜質(zhì)及其檢查法三、二氟尼柳中有關(guān)物質(zhì)的檢查(1)合成工藝38(2)有關(guān)物質(zhì)A和B的檢查：自身對(duì)照法1.有關(guān)物質(zhì)A的檢查——(): 極性較小的雜質(zhì) 單一雜質(zhì)的限量為0.5%2.有關(guān)物質(zhì)B的檢查——): 極性較大的雜質(zhì) 各面積的和為0.5%TLC正相HPLC反相第三節(jié):特殊雜質(zhì)及其檢查法39第三節(jié):特殊雜質(zhì)及其檢查法四、萘普生中有關(guān)物質(zhì)的檢查(1)合成工藝色譜條件雜質(zhì)限量(2)6-甲氧基-2-萘乙酮及其它有關(guān)物質(zhì)五、對(duì)乙酰氨基酚中氨基酚和對(duì)氯苯乙酰胺HPLC第三節(jié):特殊雜質(zhì)及其檢查法(1)合成工藝(2)有關(guān)物質(zhì)檢查：酸堿滴定法

紫外-可見(jiàn)分光光度法

高效液相色譜法第四節(jié):含量測(cè)定第四節(jié):含量測(cè)定一、酸堿滴定法(Acid-basetitrationmethod)酸堿滴定法阿司匹林

非水溶液滴定法吡羅昔康剩余量滴定法直接滴定法水解后剩余量滴定法美洛昔康水楊酸,阿司匹林,雙水楊酯,二氟尼柳,甲芬那酸,布洛芬等43(一)直接滴定法因此，可采取直接滴定法第四節(jié):含量測(cè)定苯甲酸pKa4.20水楊酸pKa2.98酸性較強(qiáng)羧酸鄰位-OH，吸電子基團(tuán)，使酸性增加；分子內(nèi)氫鍵，更增加了其極性44第四節(jié):含量測(cè)定1.反應(yīng)原理2.討論乙醇：溶解Asp，防止Asp水解;中性乙醇：對(duì)酚酞指示劑顯中性，消除滴定誤差滴定在不斷振搖下稍快進(jìn)行,防止阿司匹林水解受阿司匹林的水解產(chǎn)物水楊酸及醋酸的干擾45pKa3~6

的藥物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定

pKa6~9

的藥物要用非水溶液滴定法若SA不合格，不宜采用本法水楊酸,阿司匹林,雙水楊酯,二氟尼柳,甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生及尼美舒利3.應(yīng)用第四節(jié):含量測(cè)定46本品在甲醇、乙醇及水中極微溶或者幾乎不溶，在丙酮中微溶。所以ChP使用定量過(guò)量的氫氧化鈉滴定液溶解后，再用鹽酸滴定液回滴剩余的氫氧化鈉。烯醇式結(jié)構(gòu):酸性第四節(jié):含量測(cè)定(二)剩余量滴定法第四節(jié):含量測(cè)定(三)水解后剩余量滴定法(Residualtitrationafterhydrolysis)1.水解后剩余量滴定法反應(yīng)摩爾比為1：2USP32-NF27、BP2009、JP15取本品約1.5g，精密稱定，準(zhǔn)確加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，緩緩煮沸10min，放冷，以酚酞為指示劑，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的NaOH液(0.5mol/L)相當(dāng)于45.04mg的C9H9O4。USP32-NF27第四節(jié):含量測(cè)定滴定度滴定液濃度待測(cè)物反應(yīng)系數(shù)滴定液反應(yīng)系數(shù)待測(cè)物摩爾質(zhì)量空白反應(yīng)體積樣品測(cè)定消耗體積樣品稱重量第四節(jié):含量測(cè)定2.兩步滴定法(Two-steptitration)Aspirin片和腸溶片枸櫞酸Citricacid酒石酸Trataricacid水解產(chǎn)物水楊酸SA和HAc第四節(jié):含量測(cè)定反應(yīng)摩爾比為1：1第二步：水解后剩余滴定第一步：中和干擾物和阿司匹林的游離羧基第四節(jié):含量測(cè)定終點(diǎn)：溶液顯粉紅色空白消耗樣測(cè)消耗校正因子滴定度片劑規(guī)格第四節(jié):含量測(cè)定直接滴定法水解后剩余量滴定法兩步滴定法三種方法的比較第四節(jié):含量測(cè)定（四）非水溶液滴定法吡羅昔康第四節(jié):含量測(cè)定原理：具有吡啶環(huán)，顯弱堿性，采用冰醋酸做溶劑，高氯酸滴定液測(cè)定。測(cè)定法：取本品約0.2g,精密稱定,加冰醋酸20ml使溶解,加結(jié)晶紫指示液1滴,用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液顯藍(lán)綠色,并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。T=33.14mg/ml適用于二氟尼柳、美洛昔康、尼美舒利制劑、對(duì)乙酰氨基酚及部分制劑的含量測(cè)定

二、紫外－可見(jiàn)分光光度法第四節(jié):含量測(cè)定（一）直接紫外可見(jiàn)分光光度法對(duì)照品法計(jì)算公式：(二)柱分配色譜-紫外分光光度法

(ColumnPartitionChromatography)利用固定相酸堿性的不同進(jìn)行分離利用藥物和固定相起化學(xué)反應(yīng)而進(jìn)行分離利用生成離子對(duì)進(jìn)行層析分離單純靠選擇流動(dòng)相進(jìn)行分離壓榨棒350mm21mm擔(dān)體：硅藻土(Celite545)固定相：一定pH的緩沖水溶液流動(dòng)相：與水不相混溶的有機(jī)溶劑(洗脫前必須先用水飽和)第四節(jié):含量測(cè)定阿司匹林的含量測(cè)定膠囊內(nèi)容物氯仿溶解，上樣氯仿洗脫HAc-氯仿洗脫，收集洗脫液定容后測(cè)定A280硅藻土-NaHCO3SAASAASA第四節(jié):含量測(cè)定①NaHCO3使ASA和SA成鹽保留于柱上用CHCl3洗脫的目的：去除中性或堿性雜質(zhì)②冰HAc酸化的目的：使ASA游離，易被CHCl3洗脫過(guò)程溶劑作用第四節(jié):含量測(cè)定供試品吸光度對(duì)照品吸光度對(duì)照品濃度例子三、HPLC法第四節(jié):含量測(cè)定HPLC法用于測(cè)量阿司匹林栓劑的含量1.色譜條件

色譜柱：C18