氟尿苷二乙酸酯脂質固體納米粒的制備

氟尿苷二乙酸酯脂質固體納米粒的制備【摘要】目的：為了提高氟尿苷的療效，降低其毒副作用而制備氟尿苷二乙酸酯固體脂質納米粒.方法：在吡啶和4二甲氨基吡啶存在時，F(xiàn)UDR與乙酸酐反應，制備氟尿苷二乙酸酯，并測定其核磁共振氫譜.RPHPLC測定其在正辛醇和磷酸鹽緩沖液中的分配系數(shù)及不同pH緩沖液和組織勻漿中的穩(wěn)定性.采用薄膜分散法制備FUDRASLN；透射電鏡研究其形態(tài)、粒徑及粒徑分布；RPHPLC測定載藥量、包封率.結果：制備成的FUDRA在弱酸性溶液中較穩(wěn)定，在弱堿性溶液中水解較快；在血清和組織勻漿中易水解，在肝勻漿中水解最快；FUDRA分配系數(shù)為FUDRASLN粒徑為nm，載藥量為％，包封率為％.結論:FUDR轉化成FUDRA后親脂性大大增加；FUDRASLN包封率較高，粒徑分布較均勻.

【關鍵詞】氟尿苷；固體脂質納米粒；靶向給藥系統(tǒng)

0引言

氟尿苷(floxuridine,FUDR)是5氟尿嘧啶的脫氧核苷衍生物，是有效的抗代謝類抗消化道腫瘤新藥，主要用于肝癌治療.為了增加其肝靶向性，我們制備了氟尿苷固體脂質納米粒，但FUDR的脂溶性較小，制備固體脂質納米粒比較困難，故將FUDR酯化，合成了氟尿苷二乙酸酯(FUDRA)，以大豆磷脂為藥物載體，制備FUDRASLN，期望藥物靜注后可濃集于肝臟，達到提高療效，降低毒副作用的目的.

1材料和方法

材料

RE52旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；UV265型紫外可見分光光度計；INOVA400超導核磁共振儀；LC10Avp高效液相色譜儀；色譜柱：KromasilC18柱，5μm，mm×mm；KQ250型超聲波發(fā)生器(江蘇昆山淀山湖檢測儀器廠)，BP190S電子天平(德國賽多利斯)，XW80A漩渦混合器；JEM2000Ex型透射電子顯微鏡；TG16W微量高速離心機；SephadexG50葡聚糖凝膠.藥品和試劑：FUDR；乙酸酐；大豆磷脂.其他藥品和試劑均為分析純.昆明種小鼠5只，體質量(20±2)g,由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供.

方法

的合成及結構鑒定FUDRg，加入干燥的二氯甲烷30mL中，依次加入乙酸酐g，吡啶3mL，催化量4二甲氨基吡啶.反應混合物室溫攪拌3h，反應結束后加入250mL乙酸乙酯，依次用稀HCl，稀NaHCO3和H2O洗滌，加入適量無水Na2SO4干燥2h，過濾，濾液旋轉蒸發(fā)，除去大部分乙酸乙酯，加入石油醚使產物結晶析出，抽濾，干燥.合成路線如圖1所示.進行核磁共振氫譜(1HNMR)鑒定.

穩(wěn)定性考察反相高效液相色譜法(RPHPLC)測定FUDRA的含量.流動相∶甲醇水(35∶75)；流速：1mL/min；檢測波長：268nm；保留時間：(±)min；溫度：25℃.配制FUDRA系列濃度標準液，分別進樣20μL，以峰面積對濃度進行線性回歸，在～mg/L范圍內有良好的線性關系，回歸方程為A=-+33317c，相關系數(shù)r=，(n=5).高、中、低三種濃度的平均回收率為%(RSD=%).精密吸取FUDRA(mg/L)甲醇液1mL，加到9mL37℃水浴預熱的pH分別為,,,的緩沖液中,混漩振蕩1min后,置入37℃水浴中,于不同時間點取樣20μL進樣，測定殘留FUDRA濃度.以濃度的自然對數(shù)對時間進行線性回歸，求反應速率常數(shù)和FUDRA水解半衰期.為評價FUDRA在體內轉化為FUDR的速度，進行了FUDRA在小鼠血清及不同組織勻漿中的水解動力學研究.小鼠眼眶取血后處死，迅速取出肝、腎、肺組織.血漿離心10min，取上清液mL加pH的緩沖液mL；肝、腎、肺組織稱質量，加五倍量pH的緩沖液,勻漿，離心10min，取上清液mL，加pH的緩沖液mL，混勻.向37℃水浴中預熱的血清及組織勻漿稀釋液中加入FUDRA貯備液各mL，漩渦混合1min，于不同時間取樣200μL，加甲醇500μL，混合1min，離心5min，取上清液20μL進樣，測定殘留藥物濃度.以濃度的自然對數(shù)對時間進行線性回歸，求FUDRA水解速率常數(shù)和半衰期.

分配系數(shù)(P)的測定精密量取FUDRA的正辛醇溶液5mL，加入用正辛醇飽和過的磷酸鹽緩沖液5mL,混合5min,HPLC法測定兩相FUDRA濃度；用正辛醇飽和過的磷酸鹽緩沖液配制FUDR溶液，精密量取該液5mL，加入正辛醇5mL,混合5min,RPHPLC法測定兩相中FUDR濃度.P=C醇/C水,C醇表示在正辛醇中的濃度,C水表示在水中的濃度.

的制備在單因素考察的前提下，利用薄膜超聲分散法通過均勻設計優(yōu)化制備工藝.精密稱取FUDRA10mg，大豆磷脂90mg于100mL圓底燒瓶中，加入15mL氯仿溶解.旋轉蒸發(fā)除去氯仿，在燒瓶壁上形成一層薄膜.加入60g/L甘露醇水溶液mL，水浴超聲兩次，每次30min，分裝于安瓿中.

的形態(tài)學研究取FUDRASLN膠體溶液適量，加適量水稀釋，滴加在銅網上，用20g/L的磷鎢酸鈉液染色，用JEM2000Ex型透射電子顯微鏡觀察并拍照，統(tǒng)計100個納米粒的粒徑.

的包封率和載藥量的測定采用凝膠層析法.精密量取FUDRASLN膠體溶液mL上柱，洗脫液為蒸餾水，每mL收集一次，流速為mL/min，層析溫度為室溫.HPLC法測定固體脂質納米粒中藥物含量.另取mLFUDRASLN膠體溶液，置50mL的容量瓶中，甲醇溶解，定容.HPLC法測FUDRA濃度C0.包封率=×100%，載藥量=×100%.

統(tǒng)計學處理：考察時間與Ln(C/C0×100)之間的線性關系，用SPSS對數(shù)據(jù)進行相關分析，計算Pearson相關系數(shù)r，檢驗水準α=

2結果

得片狀結晶g，產率91％，mp～℃.1HNMRδ=(s,1H,NH)；(d,1H,C6H)；(t,1H,C1′H)；(m,1H,C3′H)；(m,1H,C4′H)；(m,2H,C5′H)；(m,1H,C2′H)；(m,1H,C2′H)；(s,3H,CH3CO)；(s,3H,CH3CO).

在不同pH緩沖液中的穩(wěn)定性pH對FUDRA穩(wěn)定性影響較大.FUDRA在弱酸性溶液中較穩(wěn)定，在弱堿性溶液中水解較快.由相關系數(shù)r可見，水解為表觀一級反應.表1氟尿苷二乙酸酯在不同pH緩沖溶液中的一級水解常數(shù)(Kobs)和半衰期(略)

在小鼠血清和不同組織勻漿中的穩(wěn)定性經HPLC檢測,FUDRA在血清和組織勻漿中水解成FUDR.由相關系數(shù)r可見，水解為表觀一級反應.血清和組織勻漿中的酶可顯著地加速前體藥物的水解，特別是在肝勻漿中.表2不同濃度組織勻漿和緩沖溶液中氟尿苷二乙酸酯的一級水解常數(shù)(Kobs)和半衰期(略)

的分配系數(shù)FUDRA和FUDR的分配系數(shù)分別為和，說明FUDR轉化成FUDRA后親脂性大大增加.

的載藥量、包封率和形態(tài)HPLC法測得FUDRASLN的載藥量為%,包封率為%.FUDRASLN為略帶淡藍色的膠體溶液，透射電鏡下可見許多圓形或橢圓形的球粒.納米粒的粒徑nm.

3討論

SLN是近年正在發(fā)展的一種新型納米粒類給藥系統(tǒng).它以固態(tài)天然或合成的類脂如卵磷脂、甘油三酯等為載體，將藥物包裹或夾嵌于類脂核中，制成固體膠粒給藥系統(tǒng)［1］.SLN的制備方法主要有高壓乳勻法、乳化分散法、溶劑乳化法、薄膜超聲分散法等.高壓乳勻法、乳化分散法等需要加熱到一定的溫度，對FUDRA的穩(wěn)定性有影響.薄膜超聲分散法簡便易行，適合于實驗室制備.

SLN主要適合于包封親脂性藥物［2］.將含有羥基的水溶性藥物酯化制成親脂性前體藥物，可以提高其包封率［3］.FUDR的親水性較強，與乙酸酐反應轉化為FUDRA后，脂溶性明顯提高，此反應操作簡便，產物易分離純化.大豆磷脂毒性低于合成材料，體內可降解且有良好生理相容性［4］，故選其作為藥物載體.在選擇SLN分散介質時，曾使用磷酸鹽緩沖液和蒸餾水.用磷酸鹽緩沖液作分散介質的SLN在1d內即很快混濁、分層，表明藥物大量泄露，磷脂凝聚.這是因為電解質的加入減小了體系中各種粒子間的靜電排斥作用，促進了脂質載體晶型的轉變［5］.蒸餾水的滲透壓太小，用蒸餾水作分散介質的SLN在3wk后也混濁、分層.實驗證明60g/L甘露醇水溶液作分散介質的SLN室溫放置3mo也無混濁現(xiàn)象.

FUDRA在不同pH緩沖液中的穩(wěn)定性研究表明，pH對FUDRA穩(wěn)定性影響較大，pH時t1/2為h，而pH時t1/2為h.由相關系數(shù)r可見，水解為表觀一級反應.FUDRA在血清和組織勻漿中的降解動力學研究表明，F(xiàn)UDRA在體內很快被臟器中的酯酶水解為FUDR，由此推測FUDRASLN被細胞吞噬后，會迅速水解為FUDR而發(fā)揮治療作用.

文獻［6］報道小于7μm的微粒靜注后，由于單核巨嗜細胞系統(tǒng)的吞噬作用大部分被攝入肝脾.本實驗我們所制成的FUDRASLN粒徑在此范圍內，理論上推測具有肝靶向性.小鼠體內的分布研究正在進行.我們以前進行過十六酸拉米夫定酯固體脂質納米粒的研究［3，7］，結果表明LAPSLN具有較高的載藥量和包封率，肝靶向性良好，據(jù)此從實踐角度推測FUDRASLN具有肝靶向性.

【參考文獻】

［1］連佳芳，張三奇.固體脂質納米粒研究進展［J］.第四軍醫(yī)大學學報,2005,26(17):1621-1623.

［2］于波濤，張志榮，曾仁杰.肝靶向氟尿嘧啶類脂納米粒的研究［J］.藥學學報,2000,35(9):700-705.

［3］薛克昌，顧宜，張三奇，等.十六酸拉米夫定酯固體脂質納米粒的制備［J］.第四軍醫(yī)大學學報，2003,24:890-892.

［4］MullerRH,MaassenS,SchwarzC.Solidlipidnanoparticles(SLN)aspotentialcarrierforhumanuse:Interactionwithhumangranulocytes［J］.JControlRelease,1997,47(3):261-265.

［5］王建新,張志榮.固體脂質納米粒的研究進展［J］.中國藥學雜志，2001，36(2):73-76.

［6