分子遺傳轉(zhuǎn)錄翻譯一

中心法則兩種模板，三種產(chǎn)物本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第1頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分1、原核生物的轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄調(diào)控2、真核生物的轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄調(diào)控3、原核生物的翻譯及翻譯調(diào)控4、真核生物的翻譯及翻譯調(diào)控本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第2頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分1、原核生物的轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄調(diào)控RNA聚合酶啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄過(guò)程轉(zhuǎn)錄調(diào)控本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第3頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分RNA合成與DNA合成異同點(diǎn)

相同點(diǎn)都以DNA鏈作為模板合成的方向均為5’→3’聚合反應(yīng)均是通過(guò)核苷酸之間形成的3’,5’-磷酸二酯鍵，使核苷酸鏈延長(zhǎng)本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第4頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分不同點(diǎn)復(fù)制轉(zhuǎn)錄模板兩條鏈均復(fù)制模板鏈轉(zhuǎn)錄（不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄）原料dNTPNTP酶DNA聚合酶RNA聚合酶產(chǎn)物子代雙鏈DNA（半保留復(fù)制）mRNA，tRNA，rRNA配對(duì)A-T；G-CA-U；T-A；G-C引物RNA引物無(wú)本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第5頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分RNA聚合酶與DNA聚合酶的區(qū)別RNA聚合酶DNA聚合酶大小(M)大，4.8×105dol小，1.09×105dol引物無(wú)有產(chǎn)物較短，游離較長(zhǎng)，與模板以氫鍵相連作用方式一條鏈的某一段兩條鏈同時(shí)進(jìn)行外切酶活性無(wú)5’3’，3’5’校對(duì)合成能力無(wú)有修復(fù)能力無(wú)有本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第6頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分大腸桿菌RNA聚合酶的組成結(jié)合底物，催化磷酸二酯鍵形成堿性基團(tuán)與DNA的靜電作用，結(jié)合DNA識(shí)別特定的啟動(dòng)子全酶重建－亞基之間的作用本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第7頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分大腸桿菌RNA聚合酶全酶所識(shí)別的啟動(dòng)子區(qū)T85T83G81A61C69A52T89A89T50A65A100本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第8頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分RNA聚合酶保護(hù)法本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第9頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分轉(zhuǎn)錄的基本過(guò)程本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第10頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分轉(zhuǎn)錄終止終止子（terminator）強(qiáng)終止子－內(nèi)部終止子弱終止子－需要ρ因子（rhofactor）又稱為ρ依賴性終止子（Rho-dependentterminator）不依賴Rho(ρ)因子的轉(zhuǎn)錄終止依賴Rho(ρ)因子的轉(zhuǎn)錄終止本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第11頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分強(qiáng)終止子:不依賴因子的終止發(fā)夾式結(jié)構(gòu)和寡聚U的共同作用使RNA從三元復(fù)合物中解離出來(lái)。聚合酶變構(gòu)，轉(zhuǎn)錄停頓本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第12頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分終止效率與二重對(duì)稱序列和寡聚U的長(zhǎng)短有關(guān)，長(zhǎng)度效率本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第13頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分依賴因子的終止因子：六聚體蛋白、水解各種核甘三磷酸促使新生RNA鏈從三元轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中解離出來(lái)，從而終止轉(zhuǎn)錄。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第14頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分轉(zhuǎn)錄后加工本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第15頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分對(duì)于原核生物，以營(yíng)養(yǎng)狀況和環(huán)境因素為主要的基因表達(dá)影響因素。原核生物的基因調(diào)控主要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平上，根據(jù)調(diào)控機(jī)制的不同可分為負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控和正轉(zhuǎn)錄調(diào)控在轉(zhuǎn)錄水平上對(duì)基因表達(dá)調(diào)控取決于DNA的結(jié)構(gòu)、RNA聚合酶的功能、蛋白因子及其他小分子配基的相互作用。轉(zhuǎn)錄調(diào)控本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第16頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分1、操縱子模型的提出1961年，Monod和Jacob提出獲1965年諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)操縱子學(xué)說(shuō)FrancisJacob

JacquesMonod

本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第17頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分1940年，Monod發(fā)現(xiàn)：細(xì)菌在含葡萄糖和乳糖的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)，細(xì)菌先利用葡萄糖，葡萄糖用完后，才利用乳糖；在糖源轉(zhuǎn)變期，細(xì)菌的生長(zhǎng)會(huì)出現(xiàn)停頓。即產(chǎn)生“二次生長(zhǎng)曲線”。1947年，報(bào)告：“酶的適應(yīng)現(xiàn)象及其在細(xì)胞分化中的意義”本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第18頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分1951年，Monod與Jacob合作，發(fā)現(xiàn)兩對(duì)基因：Z基因：與合成β-半乳糖苷酶有關(guān)；I基因：決定細(xì)胞對(duì)誘導(dǎo)物的反應(yīng)。Szilard：I基因決定阻遏物的合成，當(dāng)阻遏物存在時(shí)，酶無(wú)法合成，只有有誘導(dǎo)物存在，才能去掉該阻遏物。Jacob：結(jié)構(gòu)基因旁有開關(guān)基因（操縱基因），阻遏物通過(guò)與開關(guān)基因的結(jié)合，控制結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第19頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分2、操縱子的定義操縱子：是基因表達(dá)的協(xié)調(diào)單位，由啟動(dòng)子、操縱基因及其所控制的一組功能上相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因所組成。操縱基因受調(diào)節(jié)基因產(chǎn)物的控制。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第20頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分操縱元是一種完整的具有特定功能的細(xì)菌基因表達(dá)和調(diào)節(jié)的單位，包括調(diào)節(jié)基因，操縱位點(diǎn)，結(jié)構(gòu)基因，組成一個(gè)控制單元。結(jié)構(gòu)基因：產(chǎn)生mRNA,合成蛋白質(zhì)。操縱位點(diǎn)：調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合位點(diǎn)。調(diào)節(jié)基因：產(chǎn)生調(diào)節(jié)蛋白（與操縱位點(diǎn)結(jié)合）→結(jié)構(gòu)基因不轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)物存在時(shí)，可與阻遏蛋白結(jié)合→結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第21頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分

1、根據(jù)操縱子對(duì)調(diào)節(jié)蛋白（阻遏蛋白或激活蛋白）的應(yīng)答，可分為：正轉(zhuǎn)錄調(diào)控負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控

原核基因調(diào)控機(jī)制的類型與特點(diǎn)本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第22頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分調(diào)節(jié)基因操縱基因結(jié)構(gòu)基因阻遏蛋白激活蛋白正轉(zhuǎn)錄調(diào)控負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控正轉(zhuǎn)錄調(diào)控如果在沒(méi)有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)存在時(shí)基因是關(guān)閉的，加入這種調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)后基因活性就被開啟，這樣的調(diào)控稱正轉(zhuǎn)錄調(diào)控。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第23頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分調(diào)節(jié)基因操縱基因結(jié)構(gòu)基因阻遏蛋白激活蛋白正轉(zhuǎn)錄調(diào)控負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控在沒(méi)有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)存在時(shí)基因是表達(dá)的，加入這種調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)后基因表達(dá)活性便被關(guān)閉，這樣的調(diào)控為負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第24頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分可誘導(dǎo)調(diào)節(jié)：指一些基因在特殊的代謝物或化合物（誘導(dǎo)物）的作用下，由原來(lái)關(guān)閉的狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楣ぷ鳡顟B(tài)，即在某些物質(zhì)的誘導(dǎo)下使基因活化。例：大腸桿菌的乳糖操縱子分解代謝蛋白的基因2、根據(jù)操縱子對(duì)某些能調(diào)節(jié)它們的小分子的應(yīng)答，可分為可誘導(dǎo)調(diào)節(jié)和可阻遏調(diào)節(jié)兩大類：本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第25頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分可阻遏調(diào)節(jié)：基因平時(shí)是開啟的，處在產(chǎn)生蛋白質(zhì)或酶的工作過(guò)程中，由于一些特殊代謝物或化合物（輔阻遏物）的積累而將其關(guān)閉，阻遏了基因的表達(dá)。例：色氨酸操縱子

合成代謝蛋白的基因本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第26頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分3、在負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控系統(tǒng)中，調(diào)節(jié)基因的產(chǎn)物是阻遏蛋白（repressor），起著阻止結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄的作用。根據(jù)其作用特征又可分為負(fù)控誘導(dǎo)和負(fù)控阻遏：在負(fù)控誘導(dǎo)系統(tǒng)中，阻遏蛋白與效應(yīng)物（誘導(dǎo)物）結(jié)合時(shí)，結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄；在負(fù)控阻遏系統(tǒng)中，阻遏蛋白與效應(yīng)物（輔阻遏物）結(jié)合時(shí)，結(jié)構(gòu)基因不轉(zhuǎn)錄。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第27頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分4、在正轉(zhuǎn)錄調(diào)控系統(tǒng)中，調(diào)節(jié)基因的產(chǎn)物是激活蛋白（activator）。根據(jù)激活蛋白的作用性質(zhì)分為正控誘導(dǎo)和正控阻遏：在正控誘導(dǎo)系統(tǒng)中，效應(yīng)物分子（誘導(dǎo)物）的存在使激活蛋白處于活性狀態(tài)；在正控阻遏系統(tǒng)中，效應(yīng)物分子（輔阻遏物）的存在使激活蛋白處于非活性狀態(tài)。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第28頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分轉(zhuǎn)錄調(diào)控系統(tǒng)正控誘導(dǎo)正控阻遏負(fù)控誘導(dǎo)負(fù)控阻遏本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第29頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分lac體系受調(diào)控的證據(jù)本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第30頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分β-半乳糖苷酶Noβ–galactosidasewasproducedβ–galactosidasewasproducedE.coliGlucoseE.colilactose本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第31頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分乳糖的誘導(dǎo)作用是由酶前體轉(zhuǎn)化而來(lái)，還是誘導(dǎo)新酶合成？培養(yǎng)基（35S-aa,無(wú)乳糖）→E.coli繁殖→培養(yǎng)基（無(wú)35S-aa,加入乳糖）→β-gal(無(wú)35S)分解底物的酶只有在底物存在時(shí)才出現(xiàn)！本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第32頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分乳糖操縱子（負(fù)控誘導(dǎo)）調(diào)控模型Z、Y、A基因的產(chǎn)物由同一條多順?lè)醋拥膍RNA分子所編碼

本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第33頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分這個(gè)mRNA分子的啟動(dòng)子緊接著O區(qū)，而位于I與O之間的啟動(dòng)子區(qū)（P），不能單獨(dú)起動(dòng)合成β-半乳糖苷酶和透過(guò)酶的生理過(guò)程。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第34頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分操縱位點(diǎn)的回文序列操縱基因是DNA上的一小段序列（僅為26bp），是阻遏物的結(jié)合位點(diǎn)。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第35頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分當(dāng)阻遏物與操縱基因結(jié)合時(shí)，lacmRNA的轉(zhuǎn)錄起始受到抑制本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第36頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分誘導(dǎo)物通過(guò)與阻遏物結(jié)合，改變它的三維構(gòu)象，使之不能與操縱基因結(jié)合，從而激發(fā)lacmRNA的合成本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第37頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分組成型突變：lacOc

本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第38頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分組成型突變：

lacI-本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第39頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分不可誘導(dǎo)突變（超阻遏）：本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第40頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分lac操縱子的本底水平表達(dá)有兩個(gè)矛盾是操縱子理論所不能解釋的：①誘導(dǎo)物需要穿過(guò)細(xì)胞膜才能與阻遏物結(jié)合，而轉(zhuǎn)運(yùn)誘導(dǎo)物需要透過(guò)酶，后者的合成又需要誘導(dǎo)。解釋：一些誘導(dǎo)物可以在透過(guò)酶不存在時(shí)進(jìn)入細(xì)胞？一些透過(guò)酶可以在沒(méi)有誘導(dǎo)物的情況下合成？√本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第41頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分②真正的誘導(dǎo)物是異構(gòu)乳糖而非乳糖，前者是在β-半乳糖甘酶的催化下由乳糖形成的，因此，需要有β-半乳糖甘酶的預(yù)先存在。解釋：本底水平的組成型合成：非誘導(dǎo)狀態(tài)下有少量的lacmRNA合成。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第42頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分Lac操縱子中的其他問(wèn)題1、A基因及其生理功能半乳糖甘分子（IPTG）β-半乳糖甘酶分解產(chǎn)物（體內(nèi)積累）β-半乳糖甘乙?；D(zhuǎn)移酶半乳糖甘分子（IPTG）乙?；疚臋n共141頁(yè)；當(dāng)前第43頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分β-半乳糖苷酶：透過(guò)酶：乙酰基轉(zhuǎn)移酶=1：0.5：0.2翻譯水平上受到調(diào)節(jié)：（1）lacmRNA可能與翻譯過(guò)程中的核糖體相脫離，從而終止蛋白質(zhì)鏈的翻譯；（2）在lacmRNA分子內(nèi)部，A基因比Z基因更容易受內(nèi)切酶作用發(fā)生降解。2、lac基因產(chǎn)物數(shù)量上的比較本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第44頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控的其他形式1、σ因子的更換

在E.coli中,當(dāng)細(xì)胞從基本的轉(zhuǎn)錄機(jī)制轉(zhuǎn)入各種特定基因表達(dá)時(shí)，需要不同的因子指導(dǎo)RNA聚合酶與各種啟動(dòng)子結(jié)合。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第45頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分大腸桿菌中的各種σ因子比較σ因子編碼基因主要功能σ70rpoD參與對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期和大多數(shù)碳代謝過(guò)程基因的調(diào)控σ54rpoN參與多數(shù)氮源利用基因的調(diào)控σ38rpoH分裂間期特異基因的表達(dá)調(diào)控σ32rpoS熱休克基因的表達(dá)調(diào)控σ28rpoF鞭毛趨化相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控σ24rpoE過(guò)度熱休克基因的表達(dá)調(diào)控本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第46頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分溫度較高,誘導(dǎo)產(chǎn)生各種熱休克蛋白由σ32參與構(gòu)成的RNA聚合酶與熱休克應(yīng)答基因啟動(dòng)子結(jié)合,誘導(dǎo)產(chǎn)生大量的熱休克蛋白,適應(yīng)環(huán)境需要?？莶菅挎邨U菌芽孢形成有序的σ因子的替換,RNA聚合酶識(shí)別不同基因的啟動(dòng)子,使芽孢形成有關(guān)的基因有序地表達(dá)。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第47頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分2、降解物對(duì)基因活性的調(diào)節(jié)如果將葡萄糖和乳糖同時(shí)加入培養(yǎng)基中，lac操縱子處于阻遏狀態(tài)，不能被誘導(dǎo)；一旦耗盡外源葡萄糖，乳糖就會(huì)誘導(dǎo)lac操縱子表達(dá)分解乳糖所需的三種酶。葡萄糖效應(yīng)或降解物抑制作用本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第48頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分3、弱化子對(duì)基因活性的影響當(dāng)操縱子被阻礙，RNA合成被終止時(shí)，起終止轉(zhuǎn)錄信號(hào)作用的一段核甘酸被稱為弱化子。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第49頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分4、細(xì)菌的應(yīng)急反應(yīng)應(yīng)急反應(yīng)信號(hào)是鳥甘酸四磷酸（ppGpp）和鳥甘酸五磷酸（ppGpp）。當(dāng)氨基酸缺乏時(shí)，tRNA會(huì)激活焦磷酸轉(zhuǎn)移酶，使ppGpp大量合成，而ppGpp將關(guān)閉許多基因，同時(shí)也將打開一些合成氨基酸的基因，以應(yīng)付緊急情況。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第50頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分2、真核生物的轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后加工真核生物的RNA聚合酶增強(qiáng)子、啟動(dòng)子真核生物的轉(zhuǎn)錄后加工轉(zhuǎn)錄調(diào)控本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第51頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分真核生物的RNA聚合酶RNA聚合酶IRNA聚合酶IIRNA聚合酶III存在于核仁中存在于核質(zhì)中存在于核質(zhì)中合成5.8SrRNA,18SrRNA,28SrRNA合成mRNA,snRNA合成5SrRNA,tRNA,轉(zhuǎn)錄Alu序列細(xì)胞器RNA聚合酶：核基因編碼，在細(xì)胞質(zhì)中合成本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第52頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分啟動(dòng)子和增強(qiáng)子本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第53頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分尋找啟動(dòng)子元件和調(diào)控因子本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第54頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分(A)(B)(C)(D)本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第55頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分復(fù)雜的順?lè)词秸{(diào)控信息相互作用Yuhetal.Science1998.279:1896基因調(diào)控5本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第56頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分轉(zhuǎn)錄后加工本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第57頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分5’端加帽3’端加尾RNA的剪接RNA的編輯本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第58頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分mRNA5’端的一個(gè)核苷酸總是7-甲基鳥核苷三磷酸(m7Gppp),這種結(jié)構(gòu)稱為帽子（cap）。帽子可分為三種不同的類型:O型為m7GpppN；I型為m7-GpppN1mp，即轉(zhuǎn)錄出的mRNA的第一位堿基也被甲基化(C2甲基化)；II型為m7GpppN1mpN2mp，即mRNA的第一個(gè)堿基和第二個(gè)堿基均被甲基化。5’端帽子的結(jié)構(gòu)和功能本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第59頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分帽子的功能:能被核糖體小亞基識(shí)別，促使mRNA和核糖體的結(jié)合；m7Gppp結(jié)構(gòu)能有效地封閉mRNA5’末端，以保護(hù)mRNA免受5’核酸外切酶的降解，增強(qiáng)mRNA的穩(wěn)定。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第60頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分3’端加尾：多聚腺苷酸尾巴AAUAAA：★準(zhǔn)確切割★加poly（A）本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第61頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分多聚腺苷酸尾巴的功能：與hnRNA從核內(nèi)移出有關(guān)；抵抗外切核酸酶從3‘端降解mRNA，提高了mRNA在細(xì)胞質(zhì)中的穩(wěn)定性。有些真核細(xì)胞mRNA，如組蛋白mRNA，呼腸弧病毒及一些植物病毒mRNA上沒(méi)有poly(A)。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第62頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分polyA用于mRNA的純化本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第63頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分RNA的剪接本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第64頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分rRNA的加工：分子內(nèi)的切割和化學(xué)修飾本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第65頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分利用多個(gè)5’端轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)或剪接位點(diǎn)產(chǎn)生不同的蛋白質(zhì)。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第66頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分利用多個(gè)加多聚（A）位點(diǎn)和不同的剪接方式產(chǎn)生不同的蛋白質(zhì)。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第67頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分參與RNA剪接的物質(zhì)：snRNA（核內(nèi)小分子RNA）snRNP（與snRNA結(jié)合的核蛋白）在研究rRNA前體的加工過(guò)程中發(fā)現(xiàn)了具有催化作用的RNA分子，稱為酶RNA，從而打破了酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)的傳統(tǒng)觀念本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第68頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分RNA的編輯：編輯（editing）是指轉(zhuǎn)錄后的RNA在編碼區(qū)發(fā)生堿基的突變、加入或丟失等現(xiàn)象。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第69頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分堿基的突變本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第70頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分尿苷酸的缺失和添加1986.R.Benne在研究錐蟲線粒體mRNA轉(zhuǎn)錄加工時(shí)發(fā)現(xiàn)mRNA的多個(gè)編碼位置上加入或丟失尿苷酸，1990年在高等動(dòng)物和病毒中也發(fā)現(xiàn)了編輯現(xiàn)象。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第71頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分錐蟲coxII基因的編輯本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第72頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分特定的反式作用因子(trans-actingfactor，又稱跨域作用因子)與順式作用元件(cis-acting，element)相互作用。順式作用元件—可影響自身基因表達(dá)活性的DNA序列，通常是非編碼序列，并非都位于轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)上游。它們由若干DNA序列元件組成，它們常與特定的功能基因連鎖在一起。真核生物啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、終止子、沉默子和絕緣子。轉(zhuǎn)錄調(diào)控本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第73頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分啟動(dòng)子核心啟動(dòng)子--保證RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄正常起始所必需的、最少的DNA序列。單獨(dú)起作用時(shí)，只能確定轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)并產(chǎn)生基礎(chǔ)水平的轉(zhuǎn)錄。上游啟動(dòng)子元件--調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄起始的頻率，提高轉(zhuǎn)錄效率。典型啟動(dòng)子：TATA盒，組織特異元件不典型啟動(dòng)子：基礎(chǔ)水平表達(dá)，轉(zhuǎn)錄起始不規(guī)則本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第74頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分(1)增強(qiáng)效應(yīng)十分明顯；(2)增強(qiáng)效應(yīng)與其位置和取向無(wú)關(guān)；(3)大多為重復(fù)序列，適合與蛋白因子結(jié)合；(4)借助啟動(dòng)子發(fā)揮作用，但沒(méi)有基因?qū)Ｒ恍?，可以在不同的基因組合上表現(xiàn)增強(qiáng)效應(yīng)；(5)許多增強(qiáng)子受外部信號(hào)的調(diào)控，如金屬硫蛋白基因啟動(dòng)區(qū)上游所帶的增強(qiáng)子，就可以對(duì)環(huán)境中的鋅、鎬濃度做出反應(yīng)。增強(qiáng)子本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第75頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分終止子：終止密碼下游AATAAA序列及其下游的反向重復(fù)序列，是轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)，沉默子：當(dāng)其結(jié)合特異蛋白因子時(shí)對(duì)基因轉(zhuǎn)錄起阻抑作用，最早在酵母中發(fā)現(xiàn)，以后在T抗原受體基因上發(fā)現(xiàn)，作用不受序列方向影響，能遠(yuǎn)距離發(fā)揮作用，可作用于異源基因絕緣子：位于啟動(dòng)子與增強(qiáng)子或沉默子之間，能絕緣啟動(dòng)子免受上游增強(qiáng)子影響本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第76頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分反式作用因子--參與調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄效率的蛋白質(zhì)，它們能識(shí)別或者結(jié)合在各類順式作用元件核心序列上(如:上游調(diào)控元件或增強(qiáng)子區(qū)域)。這些因子有兩種獨(dú)立的活性:特異地與DNA結(jié)合位點(diǎn)相結(jié)合，然后激活轉(zhuǎn)錄。兩種活性可以獨(dú)立分配給特定的蛋白結(jié)構(gòu)域，分別稱作DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和激活結(jié)構(gòu)域，兩者是相分離的。它們?cè)诘鞍踪|(zhì)的不同區(qū)域。兩類：RNA聚合酶結(jié)合啟動(dòng)子所必需的因子，所有轉(zhuǎn)錄過(guò)程共有；特異轉(zhuǎn)錄因子，個(gè)別基因轉(zhuǎn)錄必需，決定該基因的時(shí)序特異表達(dá)本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第77頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域鋅指結(jié)構(gòu)域：“C2H2”型鋅指和C4鋅指結(jié)構(gòu)二聚體結(jié)構(gòu)域：亮氨酸拉鏈和螺旋-環(huán)-螺旋（HLH）結(jié)構(gòu)域堿性結(jié)構(gòu)域：堿性亮氨酸拉鏈(bZIP)和堿性HLH蛋白本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第78頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分Cys2/Cys2鋅指Cys2/His2鋅指見于甾體激素受體見于SP1，TFⅢA等本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第79頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域酸性激活結(jié)構(gòu)域：含有很高比例的酸性氨基酸，且是許多轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域的特征富含谷氨酰胺結(jié)構(gòu)域：是在轉(zhuǎn)錄因子SPl的二個(gè)激活區(qū)域上首次發(fā)現(xiàn)的。與酸性結(jié)構(gòu)域一樣，谷氨酰胺殘基所占的比例很重要。富含脯氨酸結(jié)構(gòu)域：有一個(gè)能激活轉(zhuǎn)錄的連續(xù)脯氨酸殘基鏈。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第80頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分阻抑物結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄的阻抑有可能是通過(guò)間接地對(duì)激活因子功能的干擾而實(shí)現(xiàn)的，有以下幾種情況:阻斷了激活因子的DNA結(jié)合位點(diǎn)(與原核生物的阻抑蛋白一樣)并非阻礙DNA結(jié)合而是掩蓋了激活結(jié)構(gòu)域。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第81頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分激活結(jié)構(gòu)域調(diào)控的對(duì)象激活結(jié)構(gòu)城多樣性的存在給我們提出了一個(gè)問(wèn)題，即在起始轉(zhuǎn)錄復(fù)合體中它們的調(diào)控對(duì)象是相同的還是不同的?酸性激活結(jié)構(gòu)域可以從下游的增強(qiáng)子位點(diǎn)激活轉(zhuǎn)錄，而富含脯氨酸結(jié)構(gòu)域的激活力很弱，富含谷氨酰氨根本無(wú)法激活;在酵母中富含脯氨酸的結(jié)構(gòu)域和酸性結(jié)構(gòu)域具有活性，而富含谷氨酰胺的結(jié)構(gòu)域則沒(méi)有活性，這些都表明激活結(jié)構(gòu)域有著不同的調(diào)控對(duì)象。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第82頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分不同的轉(zhuǎn)錄激活因子調(diào)控的對(duì)象是不一樣的，可能的情況有以下幾種:·染色質(zhì)結(jié)構(gòu);·與TFⅡD作用;·與TFⅡB作用;·對(duì)TFⅡH復(fù)合體的調(diào)整和作用。不同的激活結(jié)構(gòu)域有著不同的調(diào)控對(duì)象，而且轉(zhuǎn)錄起始和延伸過(guò)程的任何組分或階段都可能成為調(diào)控的對(duì)象，從而實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄的多階段調(diào)控。本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第83頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分DomainswapexperimentsAeukaryotictranscriptionalactivatorbearingtheDNAspecificityofaprokaryoticrepressor.BrentR,PtashneM.Cell,1985Dec;43(3Pt2):729-36.

Introduction本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第84頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分Hochheimeretal.GenesDev.2003,17:1309-1320Thetranscriptionapparatusisamultilayeredensembleofmultisubunitcomplexes.ZFPtranscriptionfactors本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第85頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分6ZFs→18bp418=6.87×1010C2H2Zincfingerwithsingle-genespecificityZincfinger本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第86頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分Transcriptionfactors(TFs)ZFPtranscriptionfactors本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第87頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分Transcriptionfactors(TFs)TranscriptionfactorsareproteinsthatbindtoDNAandregulategeneexpression.ZFPtranscriptionfactors本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第88頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分Artificialtranscriptionfactors

(ATFs)ZFPtranscriptionfactors本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第89頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分Modulardesignofartificialtranscriptionfactors.CurrOpinChemBiol,2002,6(6):765–772FunctionalDomainsActivationdomainsRepressiondomainsZFPtranscriptionfactors本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第90頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分KRABrepressiondomainKRABisthe1-75amminoacidsfromKOX1,whichisawellknowntranscriptionalrepressionfactor.ZFPtranscriptionfactors本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第91頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分Allcellsinanindividual'sbodycontainthesamesetofgenes.

However,onlyafractionofthesegenesareturnedon,orexpressed,inanindividualcellatanygiventime.ZFPtranscriptionfactors本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第92頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分ZFPtranscriptionfactorsItisthepatternofgeneexpressionthatdeterminesthestructure,biologicalfunction,andhealthofallcells,tissues,andorganisms.Theaberrantexpressionofcertaingenescanleadtodisease.HLTFgenesilencinginhumancoloncancerBeta-mediterraneananemiaExamples:本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第93頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分ZFPtranscriptionfactorsGenetherapy:VEGF-A(fordiabeticneuropathy,etc.)MouseeartreatedwithacDNAexpressingasingleVegfaisoform.MouseeartreatedwithaVegfa-activatingZFPtranscriptionfactor.本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第94頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分ZFPtranscriptionfactorsEnhancingproteinproductionAZFPspecificfora9bpsequencewasfusedtotheVP16activationdomain.TheZFPwasstablyintegratedintoDG44CHOcells,creatingthe“CHOZnTM”cellline.Plasmidscarrying10copiesofthis9bpsequenceupstreamofCMVorSV40werecreated.本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第95頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分ZFPtranscriptionfactorsEnhancingproteinproductionZFP-activatedCMVexpressionvector(SangamotoAmgen)本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第96頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分ZFPtranscriptionfactorsConstitutiveZFP-TFexpressionboostsIgGproductionto>400%.Enhancingproteinproduction本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第97頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分ZFPtranscriptionfactorsEnhancingproteinproductionhEPOexpressioninCHOCells本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第98頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分ZFPTFscanup-ordown-regulatecandidatetherapeuticgenesinahighlyspecificmanner.ZFPTFscanbeusedtoregulatethegenesofhumans,animals,plants,microbesandviruses.ZFPTFsregulatetheendogenouscellulargenethusavoidingtheuseofcDNAthatmayhavepatentrestrictions.WhataretheadvantagesofZFPTFs?ZFPTFscanbeengineeredtoberegulated.ZFPtranscriptionfactors本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第99頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分EnhancementofForeignGeneExpressioninCHOCellsbyHumanElongationFactor1αSubunitPromoterandArtificialTranscriptionActivatorFactors.ProgBiochemBiophys(生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展),2004,31(2):118-126ZFPtranscriptionfactors本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第100頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分SV40PromoterZincfingerKRABDownregulateLuciferase(Reportergene)ConstructionofaSV40PromoterSpecificArtificialTranscriptionFactor.ChineseJournalofBiotechnology（生物工程學(xué)報(bào)）,2003,19(5):608-612ZFPtranscriptionfactors本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第101頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分ZFPnucleasesZFPnuclease本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第102頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分“FokI”withnewsequencespecificityZFPnucleases本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第103頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分GeneCorrection/InsertionZFPnucleasesThedonorDNAfragment,wasdesignedthatspansthecleavagesiteandcontainsthepropercodingsequence.本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第104頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分GeneCorrection:WillitbeOK?ZFPnucleasesGFPStopZFPnucleasetargetsiteDonorDNAfragment本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第105頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分GeneDisruption(Knockout)ZFPnucleasesThebreakisrepairedbyjoiningends,resultinginlossofgeneticinformation.本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第106頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分HowwonderfultheZFPnucleasesare!ZFPnucleasesEasytouse,noneedforinstruments.Itisa“hitandrun”approach.

Noneedtosustainedpresenceofaninhibitor(comparedwithRNAi)..TransientintroductionoftheZFPnucleases..Makepermanent,stablegeneticchanges.本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第107頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分SummarySummarySangamoBiosciences,Inc.本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第108頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分Tuschl,2001轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控：mRNA的選擇性降解本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第109頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分WhatisRNAinterference?homology-dependentgenesilencingeventstriggeredbydouble-strandedRNA.RNAiCo-suppressionquelling本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第110頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分DavidBaulcombeRatherthanheighteningpigmentation,aninsertedgeneswitchedcolourproductionoff,creatingvariegatedblooms.co-suppressioncanbeusedtomaketobaccoplantsresistanttotheeffectsofthepotatovirusX.RichJorgensen本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第111頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分In1995,SuGuo,agraduatestudentworkinginthelabofKennethKemphuesatCornellUniversityinIthaca,NewYork,usedantisensetodisableagenecalledpar-1,whichcontrolssymmetryinC.elegansembryos.Butherresultscontainedastrangefinding:inmanyofGuo'scontrolexperiments—inwhichsheinjected'sense'RNA,duplicatingthetargetmRNAratherthancomplementingit—geneshut-downalsotookplace.本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第112頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分until1998thatresearchersledbyAndrewFireoftheCarnegieInstitutionofWashingtoninBaltimore,Maryland,andCraigMellooftheUniversityofMassachusettsMedicalSchoolinCambridgefoundthatdouble-strandedRNAworksmuchbetter.Theydubbedthephenomenon'RNAinterference'(RNAi).本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第113頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分RNAinterferenceisrevealingthefunctionsofgenesinCaenorhabditiselegans.'quelling'inNeurosporacrassasharesgeneticlinkswithRNAinterference.genesilencingiscreatingabuzzamongresearchersofthefruitfly'sgenome本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第114頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分基因沉默的發(fā)現(xiàn)時(shí)間作者對(duì)象基因目標(biāo)生物命名1990Napoli和其同事chs矮牽牛（植物）共抑制1994Macino和Cogoni類胡蘿卜素合成基因粗糙紅色鏈孢霉（真菌）靜息作用1995SuGuoPar-1秀麗新小桿線蟲1998AndrewFire和CraigMellounc22、fem1、hlh1、myo3、gfp等基因線蟲RNA干涉本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第115頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第116頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分ThemechanismofRNAi本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第117頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分OverviewofRNAidegradationpathway本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第118頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分Zamore’smodelofRNAiinDrosophilaandhuman本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第119頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分ModeloftheoriginandpotentialfunctionsofmicroRNAs本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第120頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分RNAi’sapplicationsApowerfultoolforfunctionalgenomics;Potentialdrugs.本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第121頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分Genome-wideRNAiinC.elegans本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第122頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分TargetIdentification&ValidationCurrentdrugsonthemarkettargetonly~500differentproteinsanditisbelievedthattherearethousandsofnewdrugtargetstobediscovered.

本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第123頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分Snapshotofthepharmaceuticaldiscoveryprocessandintegrationoffunctionalgenomicstechnologies本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第124頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分RNAi-APlatformForDrugDevelopmentTargetDiscovery:

Systematicknockdowninsteadofover-expressionorrecombinantapproachLeadGenerationLead

OptimizationPre-ClinicalClinical

Development&INDTargetIDTargetValidationTherapeuticsforgain-offunctiondiseases:topicaldelivery,injection,

genetherapyhighspecificity,lowtoxicityEasiertomanufacturethanproteindrugsValidationpathwaymechanismgene-specificfunctionaldeterminationAnimalModels:regulated,multi-geneknockdownCellBasedAssays:quantitative“high-content”本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第125頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分StanfordUniversitySchoolofMedicineinCaliforniasilencedindividualgenesinhumancellsinculture.Then,using“genechips,”theymonitoredtheactivityofsome30,000othergenesinthecellsandfoundthatnonehadbeenaffected.本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第126頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分EvaluatingdrugspecificityusingantisenseorsiRNAsincombinationwithexpressionprofiling本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第127頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分TherapeutictargetsVirusesandotherinfectiousagentsCancerNeurodegenerativediseaseAutoimmunediseaseOtherindications本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第128頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分AntiviralstrategiesTargetingviralgenesthatareessentialforreplication;Targetingviralsequencesthatarerelativelyconservedbetweenviralstrains;Inhibitionofhostgenesthatarerequiredforviralentry;Inhibitionofhostgenesthatplayanessentialroleinthevirallifecycle;Simultaneoustargetingofseveralviralorhostgenes.本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第129頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分Anti-poliovirusinfection本文檔共141頁(yè)；當(dāng)前第130頁(yè)；編輯于星期五\23點(diǎn)49分CancerpointmutationsK-RASv12translocationsBcr–AblinchronicmyeloidleukemiaH