流式細胞技術基本原理及應用

流式細胞儀基本原理及應用

——檢測標準化，結果更準確，操作更簡單本文檔共85頁；當前第1頁；編輯于星期日\17點34分

提綱BeckmanCoulter公司介紹流式細胞技術基本原理FC500全自動分析型流式細胞儀介紹Gallios十色分析型流式細胞儀流式細胞技術科研應用本文檔共85頁；當前第2頁；編輯于星期日\17點34分Dr.Beckman于1935年創(chuàng)立Beckman公司Coulter兄弟于1958年創(chuàng)立Coulter公司1997年兩大公司合并為BeckmanCoulter一直致力于為生命科學研究提供全套的解決方案，產品涵蓋臨床診斷和生物醫(yī)學的多個領域，包括臨床生化、血凝/血球、實驗室自動化、離心機、流式細胞產品、基因組學、蛋白質組學、顆粒特性分析等20多萬臺儀器設備在全球130多個國家地區(qū)的醫(yī)院和科研院所高效運轉年銷售額超40億美金，被財富雜志評為“最值得欽佩的公司”之一名列全球福布斯500強BeckmanCoulter公司介紹本文檔共85頁；當前第3頁；編輯于星期日\17點34分BeckmanCoulter：世界上最主要的高端流式細胞儀技術制造商本文檔共85頁；當前第4頁；編輯于星期日\17點34分貝克曼庫爾特細胞組學產品線Z1/Z2細胞分析計數儀Vicell全自動細胞活力分析系統(tǒng)4色數字化分析型流式EpcisXL5色數字化分析型流式FC500EPICSALTRA?分選Gallios?科研型MoFloXDP高端分選MoFloAstrios高端分選QuantaSC（2007）臨床型NaviosCyAnADP（科研型）1990200520092009年12月份上市本文檔共85頁；當前第5頁；編輯于星期日\17點34分流式細胞技術基本原理

本文檔共85頁；當前第6頁；編輯于星期日\17點34分WhatisFlowCytometry？流式細胞技術(FlowCytometry,FCM)是利用流式細胞儀對處于快速流動的細胞或生物顆粒進行多參數、快速的定量分析及分選的技術。它結合了單克隆抗體技術、激光技術、計算機技術、細胞化學和免疫化學技術。本文檔共85頁；當前第7頁；編輯于星期日\17點34分FCM的技術特點測量速度快以單一細胞為分析基礎多參數測量統(tǒng)計學意義高分辨率(CV<2%)、高靈敏度(熒光檢測靈敏度≤100MESF（MoleculesofEquivalentSolubleFluorochrome），前向角散射光檢測靈敏度(0.2～0.5μm)分選純度可達99%以上本文檔共85頁；當前第8頁；編輯于星期日\17點34分細胞的相對大?。‵SC-ForwardScatter）細胞的相對顆粒度和內部復雜度（SSC-SideScatter）細胞的相對熒光強度WhatCanaFlowCytometer

TellUsAboutaCell?本文檔共85頁；當前第9頁；編輯于星期日\17點34分FC500流式細胞儀的檢測范圍細胞結構細胞大小細胞粒度細胞表面面積核漿比例DNA含量與細胞周期RNA含量蛋白質含量細胞功能細胞表面/胞漿/核的特異性抗原細胞活性細胞內細胞因子酶活性激素結合位點細胞受體本文檔共85頁；當前第10頁；編輯于星期日\17點34分流式細胞儀是細胞組學的定量工具可以做以下定量：細胞相對定量（％）細胞絕對定量（細胞/μl）細胞膜蛋白表達定量（蛋白分子/細胞）可溶性蛋白絕對定量（g/ml）本文檔共85頁；當前第11頁；編輯于星期日\17點34分榮獲國際工業(yè)設計大獎和質量最高獎，得到國際公認獲得FDA和中國SDA認證，安全性和結果可靠性得到肯定全自動5色流式細胞儀Cytomics?FC500FlowCytometer先進的光路設計高分辨20Bit數字化電子系統(tǒng)豐富靈活的進樣系統(tǒng)基于Windows界面的高度人性化軟件本文檔共85頁；當前第12頁；編輯于星期日\17點34分FC500Flowcytometry的基本結構流路：

流動室鞘液sheath

樣本流sample光路：

光源

光學收集系統(tǒng)電路：

光電倍增管(PMT)、光電二極管、放大器（線性、對數）

A/D轉換（光信號轉換為電信號之后的處理分析道數和電信號的脈沖轉換）統(tǒng)計：計算機軟件本文檔共85頁；當前第13頁；編輯于星期日\17點34分流路流動室側向及熒光信號前向散射光信號鞘液激光

樣品管、鞘液管和流動室等由于鞘液的作用，待測細胞被限制在液流的軸線上——流體動力學聚焦本文檔共85頁；當前第14頁；編輯于星期日\17點34分FC500的光源和光路先進的單激光激發(fā)5色系統(tǒng)單激光就能激發(fā)5色熒光20mW@488nmBlueair-cooledargon(氬離子激光)單激光同時激發(fā)5色熒光，確保信號來源于同一個細胞，結果準確可靠其它公司同檔機器單激光只能激發(fā)4色，第5色需要安裝第二根激光激發(fā)。由于有兩個檢測點，在鞘液壓力變化、樣品濃度、樣品大小不均、轉換采樣速度時不能確保信號來源于同一個細胞而是兩個細胞，信號收集發(fā)生錯誤本文檔共85頁；當前第15頁；編輯于星期日\17點34分

雙激光排列方式：共線性排列（只有一個檢測點）FC500的光源和光路488nm激光633nm激光雙激光共線性：信號來源于一個檢測點本文檔共85頁；當前第16頁；編輯于星期日\17點34分散射光測量原理RightAngleLightDetector

CellComplexitySSCForwardLightDetector

CellSurfaceArea

FSCIncidentLightSourceFSCSensorLaserSSCSensor本文檔共85頁；當前第17頁；編輯于星期日\17點34分散射光的性質

波長與入射光一致，為細胞固有的物理及生理特性，可依此對未染色的細胞進行分析

--前向散射光(FSC):與細胞大小有關

--側向散射光(SSC):與細胞內部的結構及顆粒性有關。SCFS外周全血細胞散射光雙參數點圖

（紅細胞溶解后）本文檔共85頁；當前第18頁；編輯于星期日\17點34分FC500提供兩種檢測角度的前向角散射光，更好通過大小區(qū)分不同細胞本文檔共85頁；當前第19頁；編輯于星期日\17點34分熒光信號檢測原理520nmFSCSensorLaserFluorescenceSensorPMT(FL)本文檔共85頁；當前第20頁；編輯于星期日\17點34分

ATOM熒光素及熒光發(fā)生機理簡介本文檔共85頁；當前第21頁；編輯于星期日\17點34分FITC熒光素的激發(fā)和發(fā)射光譜Ex

488nmEm520nm異硫氰酸熒光素（FITC）每種熒光染料均有特定的激發(fā)波長,并激發(fā)后會有發(fā)射波長,流式細胞儀檢測的即是它特定的發(fā)射波長.利用各種不同波長的光學濾片來收集(檢測)這些光學信號本文檔共85頁；當前第22頁；編輯于星期日\17點34分FC500流式常用熒光染料violetbluegreenyelloworangeredinfra-FITC520PE575ECD615PC5665LASER488PI620400-450l450-500l500-570l570-590l<390l590-620l620-750l>750lPC7770熒光素的使用：選擇正確的激光器確定正確的濾光片確定所需熒光探測器（PMT）本文檔共85頁；當前第23頁；編輯于星期日\17點34分LONG(700nm)(550LP)(550SP)SHORT(500nm)DichroicFiltersTransmitted<550nm>550nmDiflected90°>550nm<550nmLONG(700nm)(500LP)(500SP)SHORT(500nm)PassThroughFilters(500/50)Transmitted<500nm>500nm475-525nmWavelengthsBlocked>500nm<500nm<475nm&>525nmShortPassLongPassBandPass光學系統(tǒng)：濾光片（Filter）熒光激發(fā)波長根據所選的熒光素而異，可通過一組不同的光學濾片傳遞到各個PMT(光電倍增管中)本文檔共85頁；當前第24頁；編輯于星期日\17點34分FC500的光路——固定光路，互換式濾片矩形反射光路，光路短，能量損失小，易于低強度熒光檢測，并且組合濾片能保證熒光檢測的特異性完全光學線路免校正客戶可自由更換的濾片組合，且無須校正光路，可方便新熒光染料的使用，擴展機器的功能；本文檔共85頁；當前第25頁；編輯于星期日\17點34分流式細胞儀的電路進行信號檢測和分析熒光信號由光電接收器（PMT）接收，轉變?yōu)殡娦盘枺煞治鲭妷好}沖的高度、面積和寬度電脈沖信號經A/D轉換成數字信號數字信號傳送到計算機，進行儲存、作圖、統(tǒng)計分析本文檔共85頁；當前第26頁；編輯于星期日\17點34分光電管和檢測系統(tǒng)：PMT本文檔共85頁；當前第27頁；編輯于星期日\17點34分光電管和檢測系統(tǒng)：放大器基本原則

--信號強弱差<10倍or需線性關系:使用線性放大器(如散射光,DNA分析)

--信號強弱差>10倍or需分析弱熒光:使用對數放大器(如熒光)本文檔共85頁；當前第28頁；編輯于星期日\17點34分FC500采用20比特的信息量數字化信號采集分析數據

數據信息量和檢測精度的對應關系3Shapiro,H.PracticalFlowCytometry,4thEd.Page206.

*LSB=leastsignificantbit,voltagedifferencebetweenchannelnandchanneln+1.

NumberofBits#ofChannelsVoltage/LSB*825639.1mV101,0249.77mV124,0962.44mV1416,384610μV1665,536153μV18262,14438.1μV201,048,5769.54μV224,194,3042.38μV2416,777,216596nVThetableshowstheattributesofanalogtodigitalconverters3.Basedonthenumberofbits,theinputsignal(orvoltage)mustincreasebythisamountinordertoaffectachangeinthechanneldisplayed.FC500本文檔共85頁；當前第29頁；編輯于星期日\17點34分SampledataOn20bitFC50010MB/sec光纖傳輸信號，反應迅速熒光分辨率的解析度更高，細胞分群更好在熒光表達低通道處（100-101陰性細胞位置）不會出現低分辨率數據常見的信號不飽和現象220

=1,048,576channels218=262,144channelsSampledataOnother18bitAnalyzerFC500優(yōu)秀的熒光檢測靈敏度和分辨率本文檔共85頁；當前第30頁；編輯于星期日\17點34分CAnalyzerNONEsmoothhistogramCD19FITCNOWASHFC500NONEsmoothhistogramCD19FITCNOWASH同一份樣本檢測，FC500的信噪比更好本文檔共85頁；當前第31頁；編輯于星期日\17點34分FC500Flowcytometr的基本結構流路：

流動室鞘液sheath

樣本流sample光路：

光源

光學收集系統(tǒng)電路：

光電倍增管(PMT)、光電二極管、放大器（線性、對數）

A/D轉換（光信號轉換為電信號之后的處理分析道數和電信號的脈沖轉換）統(tǒng)計：計算機軟件本文檔共85頁；當前第32頁；編輯于星期日\17點34分FC500高度自動化人性化的軟件系統(tǒng)Windows?2000系統(tǒng)平臺多用戶操作可以將每天的應用預先設置和安排

FCS3.0文件格式，可以直接打開多種結果輸出形式，完全與OFFICE兼容多種圖形疊加方式開放式軟件，可以在任何電腦上安裝使用本文檔共85頁；當前第33頁；編輯于星期日\17點34分Quickset——直觀的電壓調節(jié)本文檔共85頁；當前第34頁；編輯于星期日\17點34分QuickComp——直觀的補償調節(jié)補償前補償后本文檔共85頁；當前第35頁；編輯于星期日\17點34分FC500豐富的上樣系統(tǒng)——高通量標準化自動化32支試管自動上樣盤（MCL)獨立獲取樣本簡單，自動檢測和報告，有利于實驗的標準化，減少人為誤差每支試管檢測前單獨震動混勻，有利于均勻獲取細胞，結果更準確可靠本文檔共85頁；當前第36頁；編輯于星期日\17點34分FC500配套自動化標本處理系統(tǒng)全自動標本處理和溶血系統(tǒng)，靈活搭配，減少人為誤差，節(jié)省人力和試劑Q-PREPTQ-PREPPREPLUSII標本處理系統(tǒng)上樣裝置與FC500完全兼容本文檔共85頁；當前第37頁；編輯于星期日\17點34分FC500全自動無縫連接的流水線系統(tǒng)無人值守標準化操作杜絕污染速度快模式一模式二本文檔共85頁；當前第38頁；編輯于星期日\17點34分獨家的可升級多平臺自動上樣系統(tǒng)FC500MPL24孔96標準孔和深孔反應板40支試管(12x75mm)可以固定體積上樣檢測可以減少高通量工作需要的煩雜的取樣過程將您的注意力從操作中解放出來，而集中于思路的創(chuàng)新FC500是一款單平臺既能96孔板又能40管常用試管上樣的流式細胞儀本文檔共85頁；當前第39頁；編輯于星期日\17點34分FC500智能化的體現FC500面板LED顯示屏能隨時自動顯示各色熒光的強弱，激光開啟狀態(tài)，上樣速度，鞘液、廢液水平本文檔共85頁；當前第40頁；編輯于星期日\17點34分FC500特點1根激光5色熒光分析，獲取高可信度多色數據

2種角度前向散射光檢測功能，更準確定位目的細胞,20Bit高分辨電子系統(tǒng)，更精確解讀熒光信號

3種圖形顯示及更強大的分析工具：各種2維平面圖，三維立體圖，獨特的PRISM濃縮柱形圖，無限制的直方圖疊加功能

4種進樣方式：單一試管，32管自動上樣，24/96

微孔板，40管自動上樣，具有目前最豐富的進樣模式

55X5ADC正反全矩陣高精度補償及離線補償系統(tǒng)，自動化的電壓補償調節(jié)功能，強大的批量處理分析功能本文檔共85頁；當前第41頁；編輯于星期日\17點34分檢測的一般步驟設置檢測方案（PROTOCOL)染色標本（同型對照，補償管，待測樣本）同型對照管調電壓電壓不變，補償管調補償電壓不變，補償不變，上檢測管檢測后直接閱讀結果本文檔共85頁；當前第42頁；編輯于星期日\17點34分電壓調節(jié)－利用同型對照：設置背景

電壓volts

增益Gain設定陰性和陽性信號強度的臨界點本文檔共85頁；當前第43頁；編輯于星期日\17點34分熒光補償FITCPE受激光照射后FITC和PE分子發(fā)射光譜相互干擾本文檔共85頁；當前第44頁；編輯于星期日\17點34分熒光補償的調節(jié)FL2-%FL1FL-1(FITC)FL-2(PE)FL1-%FL2本文檔共85頁；當前第45頁；編輯于星期日\17點34分QuickComp——直觀的補償調節(jié)補償前補償后本文檔共85頁；當前第46頁；編輯于星期日\17點34分補償調節(jié)－利用單標樣本，來消除熒光交叉原則：單管單色標記交叉調節(jié)確認電壓單標記管自動計算CROSSOVER驗證管本文檔共85頁；當前第47頁；編輯于星期日\17點34分補償調節(jié)-最精確的全矩陣軟件

利用軟件進行全矩陣顏色補償（任何兩個熒光檢測通道之間都可以進行補償）本文檔共85頁；當前第48頁；編輯于星期日\17點34分數據分析DotPlot（雙參數點圖）Histogram（單參數直方圖）

Region（門）

Statistics（統(tǒng)計結果）參數本文檔共85頁；當前第49頁；編輯于星期日\17點34分50Gallios最新產品多種專利技術和優(yōu)化設計全球用戶的一致認可，全球銷售逾千臺真正支持當前流式發(fā)展趨勢多參數（幾十個）小顆粒檢測弱熒光表達稀有細胞自動化高通量上樣全自動十色Gallios流式細胞分析系統(tǒng)本文檔共85頁；當前第50頁；編輯于星期日\17點34分激光器的獨特設計創(chuàng)新的卡槽式設計

微馬達自動固定激光，真正固定光路，無需調整維護，即開即用靈活開放的平臺，用戶可自行升級更換新波長的激光，如561nm、375nm，保證未來的應用不受限每根激光有單獨開關，延長激光使用壽命51本文檔共85頁；當前第51頁；編輯于星期日\17點34分多色的靈活配置405nm638nm488nm2Lasers6colors(5+1)2Lasers8colors(5+3)3Lasers10colors(5+3+2)本文檔共85頁；當前第52頁；編輯于星期日\17點34分多色檢測優(yōu)勢觀察混合樣本中不同細胞亞群之間的數量變化和功能聯系減少批次操作的變異誤差準確識別細胞亞群以及評價細胞功能提高檢測效率節(jié)約珍貴稀有樣本增加靈敏度和分辨率本文檔共85頁；當前第53頁；編輯于星期日\17點34分光膠耦合石英杯提高光收集效率77%利用光纖高效傳輸熒光到PMT18o

全反射收集光路減少光損失TheBoulevard高效的光收集系統(tǒng)

——保證多色分析的熒光靈敏度緊湊式設計縮短光信號傳輸距離光損失最小的反射角度用戶自由插拔式光學濾片，更換后無需調節(jié)光路，保證新染料和應用不受限本文檔共85頁；當前第54頁；編輯于星期日\17點34分獨家提供儀器內部溫控確保儀器始終處于工程師安裝調試時的最佳狀態(tài)保證實驗準確性和重復性平均熒光強度變化在2%以內Gallios平均熒光強度變化超過25%沒有溫控的儀器本文檔共85頁；當前第55頁；編輯于星期日\17點34分FSCW2SSCFSCW2W2可應用于血小板微顆粒，內皮微顆粒，紅細胞微泡，以及細菌的檢測獨有的『多角度前向角散射光』檢測功能FSC對于流式檢測至關重要，影響圈門和統(tǒng)計針對不同類型樣本，獨家提供三種前向角散射光檢測角度1-8°低角度：適用于分辨8-40um的顆粒1-19°寬角度：適用于分辨0.5-10um的顆粒W2增寬型大角度：相差0.1um的細胞顆粒以及背景噪音區(qū)分開

本文檔共85頁；當前第56頁；編輯于星期日\17點34分微顆粒（microparticles，MPs）近年研究熱點之一微顆粒是細胞激活或凋亡時從質膜脫落的一些膜性小囊泡，有促凝、促炎癥和調節(jié)內皮功能的作用研究表明，微顆粒與血管生成的關系密切，在高血壓、糖尿病、缺血性疾病以及腫瘤的發(fā)展中發(fā)揮了重要作用微顆粒水平增加見于多種疾病，如血栓癥（血小板微顆粒）、充血性心力衰竭（內皮微顆粒）、婦女先兆子癇（合胞體滋養(yǎng)層細胞微顆粒）本文檔共85頁；當前第57頁；編輯于星期日\17點34分微顆粒（microparticles，MPs）本文檔共85頁；當前第58頁；編輯于星期日\17點34分真實有效的分析速度和信號處理能力40MHz數字化采樣頻率最大上樣速度>25000個細胞/秒（90%產率），大大節(jié)省檢測時間和寶貴樣本可檢測高度、面積、寬度、時間、比率參數GalliosOtherCytometerDataRate%Yield本文檔共85頁；當前第59頁；編輯于星期日\17點34分SampledataOn20bitGallios10MB/sec光纖傳輸信號，反應迅速熒光分辨率的解析度更高：20比特細胞分群更好，檢測、圈門和統(tǒng)計更準確，尤其適于分析分選含量稀有、微弱熒光表達差異或熒光連續(xù)表達的細胞群體220

=1,048,576channels218=262,144channels數據分辨率和信號精度最高SampledataOnother18bitAnalyzer本文檔共85頁；當前第60頁；編輯于星期日\17點34分?QueenMary,UniversityofLondon2005R：陽性細胞數N：需要獲取的細胞總數P：陽性率CV：變異系數單個樣本處理和儲存信息量：2400萬細胞科學試驗要求良好的準確性和重復性，統(tǒng)計上一般要求平行試驗的數據結果的變異系數CV<5％，流式細胞儀單次上樣處理和保存數據信息量要求更高，以便精確圈定分析分選區(qū)域尤其適合低含量稀有細胞群體（樹突細胞、抗原特異性T細胞、Treg、各種干細胞、各種實體組織來源細胞等），輕松實現萬分之一以下含量的細胞檢測不同含量目的細胞需要獲取的細胞總數本文檔共85頁；當前第61頁；編輯于星期日\17點34分自動或手動模式，無需機械式安裝調試單管進樣或32管連續(xù)進樣（88管/小時），真正實現Walkaway

每支試管檢測前單管震動混勻功能，避免整盤振蕩多次混勻對細胞形態(tài)、完整性和活性的影響全方位的條碼掃描識別功能（轉盤號、管號、單管條形碼），方便高通量大樣本信息錄入可隨時暫停/旋轉以方便添加刺激劑等樣本間自動清洗，交叉污染<0.1%最小死體積20ul減少操作者和樣本接觸(生物安全)輪盤式高通量標準化自動化上樣系統(tǒng)本文檔共85頁；當前第62頁；編輯于星期日\17點34分長效穩(wěn)定供液設計支持長時間樣本分析

液流車系統(tǒng)外接大容量鞘液桶不間斷補液，保證內置鞘液盒液面恒定，消除液面下降引起系統(tǒng)壓力變化對檢測的影響外接大容量廢液桶內置清洗液桶本文檔共85頁；當前第63頁；編輯于星期日\17點34分定時自動開關機、清洗維護及遠程診斷功能本文檔共85頁；當前第64頁；編輯于星期日\17點34分簡單直觀的應用方式實時補償/脫機補償/自動補償本文檔共85頁；當前第65頁；編輯于星期日\17點34分PRISM濃縮柱形圖真正支持多色分析

一張圖上顯示多達1024個表型組合結果（十色分析，210分析組合）將實驗所分析的所有細胞數據結果簡單地濃縮在一張直方圖上能直接讀出各種陰性或陽性組合的結果清晰直觀且便于數據的保存顏色點圖組合2122332346245102561526721271045210本文檔共85頁；當前第66頁；編輯于星期日\17點34分支持最全面的生命科學研究內容細胞生理功能研究（死活鑒定、細胞內pH值、細胞內鈣流、膜電位、酶活性）免疫功能研究（包括淋巴細胞亞群分析、細胞絕對計數、細胞活化、細胞因子、調節(jié)性T細胞、樹突細胞、抗原特異性T細胞、Th17細胞等）造血干細胞計數血小板疾病及活化血小板檢測HLA-B27強制性脊柱炎篩查白血病及淋巴瘤免疫分型、殘留白血病檢測器官移植的配型及免疫狀態(tài)監(jiān)控AIDS診斷及治療監(jiān)控腫瘤相關研究（腫瘤相關基因表達、抗腫瘤藥物作用機制及多藥耐藥、放化療以及生物治療療效的研究、循環(huán)中腫瘤細胞等）藥物篩選，抗體研發(fā)，疫苗評估干細胞研究（干細胞的分離、鑒定、功能分析等）細胞周期和DNA倍體分析、DNA含量測定、細胞周期蛋白細胞凋亡及凋亡相關蛋白磷酸化蛋白的檢測及信號傳導通路的研究細胞治療……本文檔共85頁；當前第67頁；編輯于星期日\17點34分流式細胞儀應用舉例

本文檔共85頁；當前第68頁；編輯于星期日\17點34分一、穩(wěn)定細胞株的篩選GFP轉染后轉染細胞（藍色）與空載體轉染細胞（紅色）的對比，轉染效率73％1、靶基因轉染至目的細胞2、檢測報告基因-熒光蛋白（GFP,YFP,Dsred）轉染效率3、陽性細胞的無菌分選本文檔共85頁；當前第69頁；編輯于星期日\17點34分二、細胞周期/DNA含量的分析常用染料：

PI7-AADHochest33342G0/G1SG2/M腫瘤細胞判斷標準：DNA指數大于1.1或小于0.9S期比例大于15%S+G2期比例大于20%對抗腫瘤藥物機制及療效評價本文檔共85頁；當前第70頁；編輯于星期日\17點34分分析單細胞群體，去除粘連細胞FSSSAWAH利用脈沖高度，面積，寬度三參數去除粘連細胞本文檔共85頁；當前第71頁；編輯于星期日\17點34分細胞周期分析/DNA含量分析第三方軟件分析周期Multicycle，ModFit等等決定cellcycles數 排除細胞碎片（debris）執(zhí)行分析

分析數據信賴度分析（Confidenceanalysis）可信區(qū)間六種信賴度模式總結本文檔共85頁；當前第72頁；編輯于星期日\17點34分DNA與蛋白同時檢測Anti-CyclinA2-FITC7-AAD對照ThapsigarginPaclitaxelG039%M1.5%G05.3%M62%G028%M1.2%本文檔共85頁；當前第73頁；編輯于星期日\17點34分CellproliferationCFSE在細胞分裂增殖過程中，它的熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減，標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一半。Brdu是5-溴脫氧尿嘧啶核苷代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活體注射或細胞培養(yǎng)加入，而后利用抗Brdu單克隆抗體，同時結合PI/7AAD雙重染色.本文檔共85頁；當前第74頁；編輯于星期日\17點34分凋亡啟動細胞內Ca2+

動員★Caspase激活脫水致細胞皺縮核染色質凝縮★線粒體膜電位喪失★細胞膜PS外翻★核碎片形成★DNA被切割成低分子量片段細胞內酸化凋亡小體形成凋亡啟動

凋亡早期

凋亡中期