白血病免疫分型講課最終版本

白血病免疫(miǎnyì)分型寧波二院李學雷第一頁，共三十三頁。精選ppt正常血細胞從多能干細胞分化、發(fā)育、成熟為功能細胞的過程中，細胞膜、細胞漿或胞核抗原的出現(xiàn)、表達增多與減少甚至消失與血細胞的分化發(fā)育階段密切相關，而且表現(xiàn)出與細胞系列及其分化程度相關的特異性。因此，這些(zhèxiē)抗原的表達與否可作為鑒別和分類血細胞的基礎。白血病是造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，在形態(tài)上變化雖相當大，但仍能表達正常血細胞所具有的抗原，因而仍可依據(jù)其抗原的表達譜對白血病進行免疫分型。由于白血病細胞具有腫瘤細胞的特征，其抗原表達又不完全同于正常血細胞，?？沙霈F(xiàn)某些抗原缺乏、過度表達、系列交叉表達某一系列或階段不應有的抗原，這又增加了白血病免疫分型的復雜性。白血病/淋巴瘤的免疫分型已成為診斷血液惡性腫瘤不可缺少的重要標準之一。第二頁，共三十三頁。精選ppt

早年曾用過的熒光顯微鏡或APAAP方法基本被廢棄。國際上公認的通用的方法是流式細胞術（FCM）。流式細胞術（FCM）白血病免疫分型是利用熒光素標記的單克隆抗體（McAb）作分子探針，多參數(shù)分析白血病細胞的細胞膜和細胞漿或細胞核的免疫表型，由此了解被測白血病細胞所屬細胞系列及其分化程度。因為FCM能快速，多參數(shù)，客觀的定性又定量測定細胞膜，漿，核的抗原表達。另一個重要理由是至今尚未發(fā)現(xiàn)白血病/淋巴瘤的特異抗原。所以能用正常血細胞的單抗來進行免疫分型是基于白血病形成(xíngchéng)的分化阻斷學說即白血病細胞基因異常，分化受阻于某階段形成(xíngchéng)不同亞型的白血病。這群細胞充盈于骨髓。抗原表達與其相應系列/階段的血細胞無明顯差異。與形態(tài)學檢查相似僅能根據(jù)數(shù)量的差異來判斷病變細胞的屬性。第三頁，共三十三頁。精選ppt單參數(shù)免疫標志測定易將正常細胞包括在內(nèi)。因此，近年來主張用設門（gating）方法。即用CD45與側向角（side

scatter,SSC），對數(shù)取樣后可將骨髓細胞清晰地分出淋巴細胞，單核細胞，成熟粒細胞，幼稚細胞和紅細胞群，其理論依據(jù)是CD45是所有白細胞的抗原。其表達量在淋巴細胞最高，單核細胞，成熟粒細胞，早期造血細胞（blasts）依次減弱。紅細胞（中，晚幼紅細胞，成熟紅細胞）不表達CD45。SSC反映細胞的顆粒性，成熟粒細胞SSC最高，依次為單核細胞，淋巴細胞，blasts，紅細胞。以CD45/SSC雙參數(shù)，對數(shù)取樣時即可把各細胞群區(qū)分出來。若同時加上一個，二個甚或三個熒光(yíngguāng)標記的單抗，則很容易識別非正常細胞群所表達的抗原。這樣可以排除正常細胞的干擾。在幼稚細胞％低的情況下或檢測殘存白血病時尤為必要FCM分析白血病免疫表型時，測量細胞數(shù)量一般在10000～50000細胞之間，而且快速、特異、準確，重復性好，能區(qū)分細胞起源、劃分其分化發(fā)育階段等，對白血病的診斷與分型、治療方案選擇與預后判斷、發(fā)病機理研究等有重要價值。

第四頁，共三十三頁。精選ppt

一白細胞分化抗原白細胞分化抗原（leukocytedifferentiationantigen，LDA）指血細胞在分化成熟為不同譜系（lineage）、分化的不同階段及細胞活化過程中，出現(xiàn)或消失的細胞表面標記。它們大都(dàdōu)為跨膜分子，由胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞漿區(qū)組成；有些以糖基磷脂酰肌醇（GPI）“錨”在細胞膜上；它們大都是蛋白或糖蛋白，少數(shù)為碳水化合物第五頁，共三十三頁。精選ppt

二CD的概念(gàiniàn)、CD分子的分類、功能及應用CD：用以單克隆抗體鑒定為主的聚類分析法，將來自不同實驗室的單克隆抗體所識別的同一分化抗原歸為一個分化群（Clusterofdifferentiation，CD）。并以此代替分化抗原以往的命名。在許多(xǔduō)情況下，單克隆抗體及其識別的相應抗原都用同一個CD序號。迄今為止，人CD分子的序號已從CD1命名至CD371，可大致劃分為14個組。第六頁，共三十三頁。精選ppt第七頁，共三十三頁。精選pptCD分子(fēnzǐ)的功能：（1）免疫應答過程中參與免疫細胞的相互識別；免疫細胞識別抗原、活化、增殖和分化；免疫效應功能的發(fā)揮；（2）參與造血細胞的分化和造血過程的調(diào)控；（3）參與炎癥的發(fā)生；（4）參與細胞的遷移如腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移等。第八頁，共三十三頁。精選pptCD分子的臨床應用CD單克隆抗體可用于（1）闡明(chǎnmíng)某些疾病的發(fā)病機制；（2）廣泛應用于多種疾病的免疫診斷；（3）治療移植排斥反應和腫瘤等疾??；

第九頁，共三十三頁。精選ppt第十頁，共三十三頁。精選ppt第十一頁，共三十三頁。精選ppt

CD20分子(fēnzǐ)結構與分布(fēnbù)：單鏈跨膜蛋白，僅表達于B細胞，早期即表達，分化為漿細胞后消失功能：（1）參與和調(diào)節(jié)B細胞信號轉(zhuǎn)導、生長和分化。（2）直接參與調(diào)節(jié)跨膜Ca2+的流動。第十二頁，共三十三頁。精選ppt三免疫(miǎnyì)分型常用的免疫(miǎnyì)標志及其意義

第十三頁，共三十三頁。精選ppt

白血病系列(xìliè)分化抗原T淋巴細胞白血病：CD3、CD5、CD7。

B淋巴細胞白血病：CD10、CD19、CD22。NK淋巴細胞白血?。篊D16、CD56、CD57。

髓系白血?。篊D13、CD14、CD33、MPO（髓過氧化物(ɡuòyǎnɡhuàwù)酶）。紅白血?。篏lyA（血型糖蛋白A）。

巨核細胞白血病：CD41、CD42、CD61。

第十四頁，共三十三頁。精選ppt白血病系列(xìliè)非特異性抗原CD34、HLA－DR為早期細胞抗原，無系列特異性，可與CD38聯(lián)合(liánhé)運用于免疫分型。一般而言，干/祖細胞CD34＋、HLA－DR＋、CD38－，原始細胞CD34＋、HLA－DR＋、CD38＋，而幼稚細胞（如早幼粒細胞）CD34－、HLA－DR－、CD38＋。第十五頁，共三十三頁。精選ppt

白血病分化(fēnhuà)階段抗原T細胞(xìbāo)抗原：CD4、CD8。

B細胞抗原：CD10、Cyμ（胞漿μ鏈）、SmIg（表面膜免疫球蛋白）、CD38和CyIg（胞漿免疫球蛋白）、CD11C。第十六頁，共三十三頁。精選ppt

白細胞共同(gòngtóng)抗原CD45為白細胞共同抗原，但原幼細胞表達(biǎodá)量比成熟淋巴細胞低，幼紅細胞不表達(biǎodá)。用SSC/CD45

PerCP雙參數(shù)分析可十分容易鑒別骨髓和血液中的原始或成熟細胞。用兩個系列或階段特異性McAb加CD45進行三色免疫熒光染色，經(jīng)FSC、SSC、McAbl-FITC、McAb2-PE、CD45

PerCP五參數(shù)分析，可特異地分析原幼白血病細胞的免疫表型而不受成熟細胞的干擾。第十七頁，共三十三頁。精選ppt四白血病免疫(miǎnyì)分型急性(jíxìng)髓系細胞白血病第十八頁，共三十三頁。精選pptMO

Mo

blasts

有低的SSC和FSC。在CD45－SSC圖上出現(xiàn)在淋巴細胞位置上，至少表達一個特異性標志(biāozhì)如CD13或CD116，但MPO比CD13與CD33更靈敏。一般淋系標志(biāozhì)陰性，但也可表達CD7或CD4。Mo

blasts一般HLA－DR、CD34陽性，有些研究表明CD7與CD34共表達在AML且預后差。第十九頁，共三十三頁。精選pptM1流式上M1與M0相似不易區(qū)分，M1一般(yībān)CD13＋、CD33＋、HLA－DR－，但CD34表達少于M0，可能表達部分CD15。

M2

M2與M1要區(qū)別是成熟度增加，blasts減少，CD15較M1較顯著，CD34弱于M1，CD13有時表達強于CD33，多數(shù)病例HLA－DR（-）。CD45－SSC圖顯示從髓系blast區(qū)至成熟骨髓細胞區(qū)的連續(xù)細胞帶，CD45－SSC圖有助于確定blasts比例。第二十頁，共三十三頁。精選pptM3高顆粒性，具較高的SSC，但CD45較成熟細胞少，多數(shù)情況(qíngkuàng)HLA－DR（-）或表達減少，CD34少于M2、一般CD13弱（＋），可有CD2表達。第二十一頁，共三十三頁。精選pptM4與M5兩型表型相似，但M4較M5表達更多的CD34（＋），較之M0、M1，M4與M5有更大的FSS和SSC，CD45－SSC圖上，成熟C出現(xiàn)(chūxiàn)在單核區(qū)，重要的表型為CD13、CD33、HLA－DR、CD14和CD15，CD33可表達強于CD13，CD33（＋）、CD13（－）、CD34（－）很可能為M5，但只出現(xiàn)(chūxiàn)在少數(shù)病人中，部分M5可見CD56（＋）。第二十二頁，共三十三頁。精選pptM6

M6較少見且特征不明顯，一般HLA－DR，CD34、CD13、CD33陽性，CD45－SSC圖顯示主要為紅系成份。M7巨核細胞白血病，在AML中少于1％。一般CD61（GpⅢa）和/或CD41（GpⅡb-Ⅲa）陽性，而注意由于血小板粘附在blasts上造成的假陽性，可以用流式雙色分析在EDTA存在(cúnzài)下，測pⅡb/Ⅲa與CD34以減少激活血小板的粘附。第二十三頁，共三十三頁。精選ppt

急性(jíxìng)淋巴細胞白血病ALL是兒童中最常見的惡性腫瘤，約占全部腫瘤的25％，在成人，ALL約占急性白血病的25％，我們將ALL分為(fēnwéi)B祖細胞型，CD10＋或CD10－，前B細胞型，B細胞型，T細胞型第二十四頁，共三十三頁。精選pptB祖細胞型ALL：在幼兒約占ALL的65％～70％，青少年為55％～60，人為50％。在兒童，約90％病例CD10＋，在幼兒只有少于50％病例CD10＋，blasts一般FSC、SSC很少，是FAB標準的L1或L2，一般TdT(+)HLA-DR(+)，CD19(+)，此型又分為2個亞型，CD10＋和CD10－，前者預后好，多數(shù)病例CD24＋，CD34＋，CD20表達隨成熟度增加(zēngjiā)而增加(zēngjiā)，B祖細胞被定義為sIg-。第二十五頁，共三十三頁。精選ppt前B細胞型ALL：此亞型約占兒童ALL的25％，細胞一般為CD19＋，CD24，HLA－DR＋，胞漿CD22＋，CD10＋，TdT隨CD20變化，CD34多為陰性，前B亞型被認為(rènwéi)比B祖型預后更差，這與t(1；19)出現(xiàn)相關并由此產(chǎn)生E2A－PBX1融合蛋白，它的表型為CD19＋、CD10＋、CD9＋，不同程度CD20表達，CD34－，確認此表型有助于診斷基因上不確定的病例。第二十六頁，共三十三頁。精選pptB細胞型ALL：成熟B細胞型ALL約占ALL2％～5％，B細胞型ALL較之B祖細胞型ALL有更大的FSC和SSC，在CD45－SSC圖上出現(xiàn)在淋巴和單核細胞區(qū)域，即FAB標準的L3，表型為CD19、CD20、CD22、CD24且sIg（多數(shù)(duōshù)為IGM）多數(shù)(duōshù)病例CD10＋。但成熟抗原及sIg使之區(qū)別于更早的B系ALL，極少數(shù)成熟B細胞ALL無FAB－L3形態(tài)。第二十七頁，共三十三頁。精選pptT-ALL：多數(shù)病例有大的FSC、SSC，在CD45－SSC圖上可能出現(xiàn)在淋系未成熟細胞和髓系未成熟細胞或單核細胞區(qū)，多數(shù)表現(xiàn)為胸腺亞型，最常見亞型為皮質(zhì)晚期表達，CD1、CD2、CD5、CD7、CD4/CD8雙陽與極少膜表面CD3、TdT多為陽性。另一常見亞型為皮質(zhì)早期表達CD2、CD5、CD7、TdT強表達。髓質(zhì)期亞型表達CD2、CD5、CD7、與CD3＋CD4＋/CD3+CD8+,很少見TdT表達。前T細胞亞型，表達CD7胞漿CD3＋且無其它(qítā)T細胞抗原，T細胞腫瘤的特征是喪失T細胞抗原而表現(xiàn)出其它(qítā)異常抗原組合。第二十八頁，共三十三頁。精選ppt雜合型白血?。弘S著流式技術的廣泛應用，我們發(fā)現(xiàn)(fāxiàn)許多病例并不能嚴格劃分為淋系或髓系，真正的雙表型病人多為t(9；22)或（11q23），現(xiàn)在雜合型的誤診率很高。最常導致誤診的原因是在分析中未能排除非白細胞，過度強調(diào)弱的非特異性結合，忽略了某些抗體缺乏系特異性，最重要的系特異性抗原在B系、T系、髓系分別為CD22、CD3和MPO。第二十九頁，共三十三頁。精選ppt

慢性(mànxìng)粒細胞白血病由于慢性期顯著的細胞分化，在CD45－SSC圖上除了髓系細胞占主導外，只顯示一個正常骨髓像，CML可確診，CML起病與發(fā)展相對緩慢，慢性期的持續(xù)1年左右最終(zuìzhōnɡ)發(fā)展為加速期和急變期。流式細胞技術對急變期亞型的診斷具有極高價值。直接影響到治療效果。急變期CML主要表現(xiàn)為髓系，偶為淋系，髓性急變可表現(xiàn)出多種形態(tài)包括未分化細胞。淋性急變具典型形態(tài)特征，為CD10