乙型病毒性肝炎的實(shí)驗(yàn)室檢查詳解演示文稿

乙型病毒性肝炎的實(shí)驗(yàn)室檢查詳解演示文稿本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第1頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分（優(yōu)選）乙型病毒性肝炎的實(shí)驗(yàn)室檢查本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第2頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分HBV基因組HBVDNA是由長(zhǎng)鏈L(負(fù)鏈)

和短鏈S(正鏈)

組成的不完全雙鏈環(huán)狀DNA，短鏈的長(zhǎng)度相當(dāng)于長(zhǎng)鏈的50%～85%。HBVDNA長(zhǎng)鏈載有病毒蛋白質(zhì)的全部密碼，有4個(gè)開(kāi)放讀碼框架(ORF)，分別稱(chēng)為S、C、P和X區(qū)。編碼7個(gè)蛋白質(zhì)。HBVDNA易發(fā)生變異，特別是前S或S區(qū)基因較易突變。嗜肝DNA病毒的共同特點(diǎn)：內(nèi)含3~3.3kb松散環(huán)狀、部分雙鏈DNA基因組及DNA聚合酶；病毒的復(fù)制需逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程。3本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第3頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分HBV抗原和抗體系統(tǒng)表面抗原(HBsAg)：HBV外膜糖蛋白=S+L+M蛋白

S蛋白：狹義的HBsAg指S蛋白。HBsAg陽(yáng)性說(shuō)明機(jī)體有HBV感染。中分子蛋白：preS2+S

大分子蛋白：preS1+preS2+SS蛋白中分子蛋白大分子蛋白PreS1PreS2S1.HBsAg和抗-HBs本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第4頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分e抗原(HBeAg)：是可溶性蛋白質(zhì)只存在于血液中是病毒復(fù)制和傳染性的標(biāo)志e抗體(抗-HBe)：對(duì)HBV感染有一定的保護(hù)作用其出現(xiàn)標(biāo)志著病毒復(fù)制減少、傳染性降低前C區(qū)C區(qū)前C/C蛋白HBeAgHBcAg表達(dá)切割、加工HBeAg只存在于血清中HBVC基因分泌到細(xì)胞外2.HBeAg和抗-HBe5本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第5頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分HBV的三種形態(tài)1,HepatitisBvirion(Daneparticle)2,secretedfilament3,secretedsphere6本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第6頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分7HBV自然復(fù)制周期本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第7頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分8生物化學(xué)檢測(cè)1HBV血清標(biāo)志物的檢測(cè)2HBV分子生物學(xué)診斷3HBV臨床藥物療效檢測(cè)4HBV感染的實(shí)驗(yàn)室檢查本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第8頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分1.乙型肝炎的生物化學(xué)檢測(cè)主要指標(biāo)：ALT,AST,ASTm，血清白蛋白，血清膽紅素，膽堿酯酶,甲胎蛋白,凝血酶原時(shí)間(PT)及部分凝血因子；9本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第9頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分方法學(xué)的發(fā)展ELISA：靈敏性高，成本低，適用于普通病人篩查；膠體金免疫層析法(金標(biāo)法)：簡(jiǎn)便易行，可用于急診病人快速檢測(cè)；化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)：價(jià)格昂貴，可用于HBVMs為臨界值的病人的確證；可間接反映宿主HBV的復(fù)制水平，在評(píng)價(jià)抗病毒治療的病毒學(xué)應(yīng)答、療效和判斷預(yù)后方面有重要意義。新增檢測(cè)指標(biāo)Pre–S1、Pre–S2及其相應(yīng)抗體對(duì)乙肝兩對(duì)半的新認(rèn)識(shí)102.HBV血清標(biāo)志物檢測(cè)本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第10頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分11HBV血清標(biāo)志物檢測(cè)方法的成本效果分析(1)本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第11頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分12HBV血清標(biāo)志物檢測(cè)方法的成本效果分析(2)Back本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第12頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分13Terminal

proteinSpacerReverse

Transcriptase

(RT)RNaseHrt1rt344preS1preS2Ss1s266HBsAg本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第13頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分XMutationofS&Pre-SS基因“a”決定簇

G145R

變異，與抗-HBs的親和力降低S基因變異可導(dǎo)致隱匿性HBV感染(occultHBVinfection)，表現(xiàn)為血清HBsAg陰性，但仍可有HBV低水平復(fù)制(血清HBVDNA常<104拷貝/ml)獻(xiàn)血員人群，隱匿性HBV感染的檢出率可達(dá)0.19%14本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第14頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分15本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第15頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分16Pre–S1檢測(cè)的臨床價(jià)值前S1蛋白主要存在于Dane顆粒和管型顆粒上，在HBV感染宿主細(xì)胞過(guò)程及在病毒復(fù)制和刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)中起重要作用;前S1抗原與HBeAg之間有高度相關(guān)性，并可區(qū)別因變異種及其他原因造成的乙肝病毒e抗原(HBeAg)假陰性，可作為HBeAg假陰性補(bǔ)充，從而準(zhǔn)確反映患者體內(nèi)病毒復(fù)制情況；可作為HBV感染及復(fù)制的標(biāo)注，與其它血清標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)，相互補(bǔ)充。Back本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第16頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分17大三陽(yáng)小三陽(yáng)vs本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第17頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分HBV血清學(xué)標(biāo)志檢測(cè)結(jié)果分析16本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第18頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分19類(lèi)型HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb樣本數(shù)(n)構(gòu)成比(%)1＋－－－＋40.212＋－＋－＋231.203＋－－＋＋985.114－－－－＋462.405－－－＋＋683.556－＋－＋＋1849.607－＋－－＋633.298－＋－－－47024.539－－－－－96050.10合計(jì)1257172335048619161001916例HBV血清標(biāo)志物陽(yáng)性類(lèi)型分布模式本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第19頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分20本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第20頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分21本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第21頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分22HBVDNA定量檢測(cè)病毒復(fù)制水平最可靠，最直接的證據(jù)，與傳染性和疾病進(jìn)展密切相關(guān)；主要用于HBV感染的判斷，治療適應(yīng)癥的選擇及抗病毒療效的判斷。HBV基因分型基因分型的必要性；基因分型的主要方法；HBV耐藥突變的檢測(cè)3.HBV分子生物學(xué)診斷本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第22頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分慢性HBV感染治療適應(yīng)癥的選擇HBeAg陽(yáng)性，HBVDNA載量>105copies/ml,ALT>2×ULN;HBeAg陰性，HBVDNA載量>104copies/ml,ALT>2×ULN;HBVDNA持續(xù)陽(yáng)性，年齡>40歲，ALT大于正常上限，也可給予抗病毒治療；HBVDNA持續(xù)陽(yáng)性，年齡>40歲，ALT持續(xù)正常，應(yīng)密切隨訪，動(dòng)態(tài)觀察疾病進(jìn)展，必要時(shí)行肝組織檢測(cè)，有病變證據(jù)時(shí)，可以給予抗病毒治療；23本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第23頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分HBV感染抗病毒治療的療效評(píng)估治療終點(diǎn)：HBVDNA明顯下降或低于檢測(cè)下限，并伴有ALT正常；HBVDNA水平治療開(kāi)始后3個(gè)月內(nèi)持續(xù)下降1log以上才說(shuō)明治療有效；每日0.5mg恩替卡韋治療1年時(shí),HBeAg陽(yáng)性和陰性慢性乙型肝炎患者HBVDNA檢測(cè)不到率分別為67%和90%,恩替卡韋的HBeAg轉(zhuǎn)換率為21%,與其他口服抗病毒藥相似。并不以HBeAg轉(zhuǎn)陰或HBsAg轉(zhuǎn)陰為治療終點(diǎn)或目標(biāo)。24本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第24頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分HBVDNA定量檢測(cè)試劑盒的性能對(duì)比25本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第25頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分26同時(shí)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)HCV,HIV-1,衣原體，及淋病的一體化檢測(cè)Back本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第26頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分病毒基因突變疾病進(jìn)展臨床表現(xiàn)對(duì)干擾素應(yīng)答耐藥變異生化學(xué)改善HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換HBVDNA清除急性乙型肝炎慢性乙型肝炎肝硬化(LC)肝細(xì)胞癌(HCC)27HBV基因型/基因亞型本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第27頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分分型方法優(yōu)缺點(diǎn)序列測(cè)定法最直接，最可信，是HBV基因分型的金標(biāo)準(zhǔn)，但繁瑣費(fèi)時(shí)而且價(jià)格昂貴，混合型檢測(cè)能力差，不適于大樣本檢測(cè)。聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析法(PCR-RFLP)較測(cè)序法簡(jiǎn)便，適于大樣本檢測(cè)，但由于需要進(jìn)行酶切，所以操作仍較為繁瑣，成本較高，并存在酶切不徹底等問(wèn)題。pre-S2單克隆抗體酶聯(lián)免疫測(cè)定(mAbsEIA法)簡(jiǎn)單、快速，已商品化，適于大樣本檢測(cè)，但檢測(cè)費(fèi)用較高并不能有效鑒別有些混合型感染和HBsAg低表達(dá)及某些表位表達(dá)不充分的標(biāo)本。分子探針雜交法簡(jiǎn)單、快速，對(duì)混合型檢測(cè)非常敏感，已商品化，適于大樣本檢測(cè)，但檢測(cè)費(fèi)用較高而且靈敏度和特異度還有待提高。型特異性引物PCR法簡(jiǎn)單、快速，成本低，具有較高的靈敏度，適于流行病學(xué)研究和臨床大樣本檢測(cè)。但特異度還有待提高。常用HBV基因分型方法比較28本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第28頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分B型特異性“引物對(duì)”的特異度分析B型特異性引物HB（正義鏈）：5’-ACCGTGAACGCCCACMGGAA-3’29Back本文檔共32頁(yè)；當(dāng)前第29頁(yè)；編輯于星期一\12點(diǎn)46分4.HBV臨床藥物治療監(jiān)測(cè)乙肝病毒的耐藥性檢測(cè)，是精準(zhǔn)治療乙肝的關(guān)鍵??！目前由于治療不夠規(guī)范，造成我國(guó)目前超過(guò)95%的乙肝患者發(fā)生耐藥、病毒變異、病毒耐藥，變異檢測(cè)勢(shì)在必行！拉米夫定是第一個(gè)被批準(zhǔn)治療慢性乙型肝炎的口服抗病毒藥,已在全世界廣泛應(yīng)用。但其耐藥發(fā)生率高,治療1年時(shí)耐藥發(fā)生率為23%,2年為46%,3年為55%,4和5年分別為65%和