淺論異基因造血干細胞移植治療再生障礙性貧血

淺論異基因造血干細胞移植治療再生障礙性貧血【摘要】目的：評價異基因造血干細胞移植治療再生障礙性貧血的臨床療效。方法：3例再障患者，其中重型再障2例，再障-PNH綜合征1例，均為HLA全相合親緣供者。預(yù)處理方案：重型再障患者為CTX+ATG方案，再障-PNH綜合征患者加用白消安、氟達拉賓，急性移植物抗宿主病預(yù)防方案為環(huán)孢菌素A加氨甲喋呤聯(lián)合方案，以前列素E1預(yù)防肝靜脈閉塞病，以巨細胞病毒抗原血癥監(jiān)測和更昔洛韋預(yù)防CMV病。結(jié)果：3例患者經(jīng)DNA短串聯(lián)重復(fù)序列多態(tài)性分析證明為供髓植入，中性粒細胞大于×109/L的平均天數(shù)為16d，血小板大于20×109/L的平均天數(shù)為20d。發(fā)生Ⅱ度aGVHD1例，未發(fā)生cGVHD，未發(fā)生移植排斥。中位隨訪時間248d，全部患者均無病生存。結(jié)論：allo-HSCT是治療再生障礙性貧血的有效方法。

【關(guān)鍵詞】貧血再生障礙性造血干細胞移植移植排斥

再生障礙性貧血(AA)是臨床常見的難治性血液病，尤其是重型再生障礙性貧血(SAA)，發(fā)病急，病情重，以往病死率極高。異基因造血干細胞移植(allo-HSCT)是治療SAA的有效手段，其治愈率可達75%～80%[1-2]。由于SAA病情進展極快，HLA相合供者來源缺乏，在我國，已開展allo-HSCT治療SAA的單位不多，我們應(yīng)用allo-HSCT治療再生障礙性貧血3例，取得較好療效，現(xiàn)報告如下。

1資料和方法

一般資料

我們在2007年11月-2008年11月，共開展allo-HSCT治療再生障礙性貧血3例，其中SAA2例，再障-陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿綜合征1例，均為HLA全相合親緣供者?；颊叩呐R床資料和供、受者之間的關(guān)系見表1。

方法

供者造血干細胞采集：病例1體重達150kg，供者為其胞妹，體重為45kg。為采集足夠數(shù)量的造血干細胞，采用外周血+骨髓聯(lián)合移植，采用重組粒細胞集落刺激因子5μg·kg-1·d-1動員。于動員的第4天在連續(xù)硬膜外麻醉下采集骨髓，采集到單個核細胞×108/kg，CD34+細胞×106/kg；分別于動員的第5天、第7天用CS3000血細胞分離機(Baxter公司)采集外周血MNC，采集到MNC×108/kg，CD34+細胞×106/kg，共輸入MNC×108/kg，CD34+細胞×106/kg。病例2、病例3均只采用rhG-CSF動員，采集外周血干細胞。

預(yù)處理方案：病例1、病例2采用環(huán)磷酰胺+抗胸腺細胞球蛋白方案，CTX60mg·kg-1·d-1，-5至-2d；ATG5mg·kg-1·d-1；-5至-2d。病例3預(yù)處理方案為白消安200mg，-8至-6d；CTX，-5至-4d；氟達拉賓50mg，-5至-3d；ATG100mg，-5至-1d，輸液量＞4500mL/d，堿化尿液及美司鈉預(yù)防出血性膀胱炎。

急性移植物抗宿主病預(yù)防方案：采用環(huán)孢素A(CsA)聯(lián)合短療程甲氨蝶呤(MTX)的經(jīng)典方案。CsA從-1d開始mg·kg-1·d-1，微泵持續(xù)靜脈滴注，胃腸道癥狀改善后，改為5mg·kg-1·d-1口服，每周監(jiān)測1次全血CsA濃度，維持在200～300ng/mL。MTX用法：+1d為15mg/m2，+3、+6、+11d為10mg/m2，靜脈給藥。

其他并發(fā)癥預(yù)防：患者從移植前9d開始口服復(fù)方新諾明、氟康唑、黃連素進行腸道除菌。采用前列腺素E1預(yù)防肝靜脈閉塞病，PGE140μg/d，從移植后0d到45d靜脈滴注。預(yù)防巨細胞病毒感染方案：更昔洛韋～g/d，-8至-1d，從0d開始改用阿昔洛韋g/d，0至+30d，每周檢測CMV抗原血癥，CMV-pp65抗原陽性，對陽性患者以更昔洛韋g/d預(yù)防性治療，直至CMV抗原血癥轉(zhuǎn)陰2周停藥。例1用羥乙基淀粉去除供者骨髓紅細胞。

支持治療：全部患者均住空氣層流無菌病房。移植后第6天開始皮下注射rhG-CSF5μg·kg-1·d-1，至中性粒細胞≥×109/L停用。移植后10d開始予高糖、脂肪乳劑、復(fù)方氨基酸等支持治療，至患者基本能正常飲食后停用。當(dāng)患者血小板低于20×109/L時輸注單采血小板，血紅蛋白低于80g/L時輸注洗滌紅細胞，所有血制品輸注前均行照光或用過濾器去除白細胞。

植入證據(jù)檢測：移植后連續(xù)3d外周血中性粒細胞大于×109/L為植入成功。使用短串重復(fù)序列聚合酶鏈反應(yīng)(STR-PCR)行移植后植入鑒定。移植后1、2和3個月行骨髓細胞學(xué)、染色體及血型檢查，以后每3個月行骨髓細胞學(xué)檢查。

2結(jié)果

造血重建

移植物有核細胞平均數(shù)為(～)×108/kg，CD34+細胞平均數(shù)為×106/kg。移植后患者中性粒細胞大于×109/L的平均天數(shù)為16d，血小板大于20×109/L的平均天數(shù)為20d。

供髓植入證據(jù)

3例移植患者經(jīng)DNA短串聯(lián)重復(fù)序列以及染色體檢測、ABO血型檢測均為供髓完全植入。

并發(fā)癥

病例1移植過程中發(fā)生出血性膀胱炎，積極對癥治療后好轉(zhuǎn)。移植后+89d發(fā)生皮膚型II度aGVHD，使用甲基潑尼龍80mg/d，+96d好轉(zhuǎn)，未發(fā)生慢性GVHD(cGVHD)。移植后+92d患者出現(xiàn)皮膚皰疹病毒感染，經(jīng)抗病毒治療后治愈。移植后半年，患者出現(xiàn)反復(fù)副鼻竇炎、上呼吸道感染，經(jīng)抗感染治療后好轉(zhuǎn)。病例2移植后+2d出現(xiàn)發(fā)熱、腹痛，以下腹部為主，考慮為急性胃腸炎，予抗感染、對癥支持治療后好轉(zhuǎn)，+7d出現(xiàn)發(fā)熱、咽痛，考慮上呼吸道感染，予亞胺培南和萬古霉素針抗炎治療后好轉(zhuǎn)。例3移植后+4d出現(xiàn)中上腹疼痛，考慮為急性胃黏膜損傷，予對癥治療后好轉(zhuǎn)，+11d出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽，考慮為上呼吸道感染，予美洛培南和萬古霉素針抗炎治療后好轉(zhuǎn)。+30d患者出現(xiàn)低熱，偶有咳嗽、無咳痰，胸部CT檢查提示：肺部真菌感染，予伏立康唑針200mg靜脈滴注，每日2次，+35d體溫恢復(fù)正常，2周后改予伏立康唑片200mg口服，每日2次，共4周，+55d復(fù)查胸部CT正常。+33d患者出現(xiàn)腹瀉，大便涂片檢查可見白細胞，革蘭氏染色以陽性桿菌為主，考慮為難辨梭狀芽孢桿菌性腸炎可能，口服去甲萬古霉素，g，每日4次，+35d腹瀉好轉(zhuǎn)。3例患者均未發(fā)生VOD和間質(zhì)性肺炎。

隨訪

平均隨訪時間248d，全部患者均無病生存。最長患者已無病生存465d。

3討論

Allo-HSCT是治療SAA的有效方法。移植排斥是其存在的主要問題，早期移植排斥的發(fā)生率高達30%～60%，預(yù)處理方案加入ATG和CTX后，移植排斥的發(fā)生率降至5%左右。國內(nèi)翟衛(wèi)華等報道，異基因造血干細胞移植治療16例再生障礙性貧血患者，14例獲得造血重建，移植排斥2例。本組3例患者均采用CTX+ATG為預(yù)處理方案，其中1例再障-PNH綜合征患者加用白消安、氟達拉賓，3例患者均獲得完全植入，未發(fā)生移植排斥。移植排斥的發(fā)生還與移植物造血干細胞數(shù)量有關(guān)。一般移植中心要求移植物MNC達到×108/kg，本組3例患者均達到該標(biāo)準(zhǔn)，病例1體重達150kg，而供者體重僅45kg，相差3倍以上，我們采用外周血+骨髓聯(lián)合移植的方法，采集到足夠數(shù)量的造血干細胞，保證移植物成功植入。此外，移植排斥的發(fā)生還與移植前多次輸血、機體處于致敏狀態(tài)有關(guān)。SAA患者病情重，進展迅速，需大量成分輸血支持治療，本組病例1、病例2移植前曾多次輸單采血小板、濃縮紅細胞，所有血制品均采用照光或過濾的方法去除白細胞，有效減少了機體致敏狀態(tài)的發(fā)生。

aGVHD是Allo-HSCT治療SAA的主要并發(fā)癥之一，發(fā)生率約在30%～40%，不僅影響生存率，也嚴(yán)重影響患者移植后的生活質(zhì)量[1]。隨機研究表明，聯(lián)合應(yīng)用MTX+CSA方案優(yōu)于單用MTX方案，目前為止，MTX+CSA仍然是AA患者預(yù)防GVHD最常用的方案。本組患者均采用MTX+CSA預(yù)防GVHD，僅1例患者發(fā)生II度aGVHD，經(jīng)常規(guī)劑量激素治療后好轉(zhuǎn)，未發(fā)生cGVHD。另2例患者因隨訪時間尚短，cGVHD尚有待觀察。

異基因造血干細胞移植是PNH患者唯一治愈方法。年齡較輕、嚴(yán)重血細胞減少或反復(fù)發(fā)生血栓的患者是移植最合適人選。清除PNH克隆可采用清髓或非清髓預(yù)處理方案。本組病例3為AA-PNH綜合征，病史長達16年，以接觸苯后出現(xiàn)視物不清、乏力起病，血常規(guī)及骨髓常規(guī)檢查提示AA，予CSA為主免疫抑制治療后好轉(zhuǎn)；10年前出現(xiàn)血尿，外周血細胞流式細胞儀檢查CD55、CD59缺失，診斷為AA-PNH綜合征，移植前2個月，出現(xiàn)腹瀉，粒缺，經(jīng)CSA、G-CSF及抗感染治療，感染控制，但仍為粒缺，達SAA標(biāo)準(zhǔn)，具有移植指征。為清除PNH克隆，我們在ATG+CTX預(yù)處理方案基礎(chǔ)上加用白消安、氟達拉賓，患者成功獲得供髓植入，外周血細胞流式細胞儀檢查未檢測到CD55、CD59缺失克隆。

【參考文獻】

[1]ArmandP,AntinJH.Allogeneicstemcelltransplantationforaplasticanemia[J].BiolBloodMarrowTransplant,2007,13(5):505-516.

InamotoY,SuzukiR,KuwatsukaY,etal.Long-termout-comeafterbonemarrowtransplantationforaplasticane-miausingcyclophosphamideandtotallymphoidirradiationasconditioningregimen[J].BiolBloodMarrowTransplant,2008,14(1):43-49.

StorbR,EtzioniR,AnasettiC,etal.Cyclophosphamidecom-binedwithantithymocyteglobulininpreparationforallo-geneicmarrowtransplantsinpatientswithaplasticanemia[J].Blood,1994,84(3):941-949.

翟衛(wèi)華,王玫,周征,等.異基因造血干細胞移植治療再生障礙性貧血16例臨床觀察[J].中華血液學(xué)雜志,2007,28(2):78-82.

ChamplinRE,HorowitzMM,vanBekkumDW,etal.Graftfailurefollowingbonemarrowtransplantationforsevereaplasticanemia:riskfactorsandtreatmentresults[J].Blood,1989,73(2):606-613.

LocatelliF,BrunoB,ZeccaM,etal.CyclosporinAandshort-termmethotrexateversuscyclosporinAasgraftver-sushostdiseaseprophylaxisinpatientswithsevereaplasticanemiagivenallog