血清尿素氮（BUN）谷氨酸脫氫酶測定法

血清尿素氮（BUN）谷氨酸脫氫酶測定法實驗原理脲酶-谷氨酸脫氫酶（Urease-GLDH）連續(xù)監(jiān)測法。尿素被脲酶水解產(chǎn)氨。在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反應(yīng)生成谷氨酸，NADH同時被氧化成NAD＋。NADH的減少和樣品中尿素濃度成正比。本法是連續(xù)監(jiān)測法。脲酶尿素+2H2O2NH4＋+2HCO3－谷氨酸脫氫酶NH4＋+α-酮戊二酸+NADHL-谷氨酸+NAD＋+H2O2標(biāo)本：2.1病人準(zhǔn)備：血清無特殊要求。要留取24小時尿樣。2.2類型：血清、血漿（不可使用肝素銨）、新鮮尿液。無溶血和凝塊的血清，如果必須使用血漿，建議使用無銨離子的抗凝血劑，如EDTA和肝素鈉。用新鮮尿液作樣品時，用蒸餾水作1:100稀釋。3.標(biāo)本存放：血清或血漿穩(wěn)定性：4～25℃保存可穩(wěn)定7天；-20℃保存可穩(wěn)定1年。尿液穩(wěn)定性：20～25℃保存可穩(wěn)定2天；4～8℃保存可穩(wěn)定7天；-20℃保存可穩(wěn)定1個月。4.標(biāo)本運輸：常溫條件下保存運輸。5.標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌污染的標(biāo)本。6.實驗材料6.1試劑：申能尿素測定試劑盒劑1：6×64ml＋試劑2：6×16ml）6.1.1試劑組成試劑1：Tris緩沖液pH7.8120mmol/Lα-酮戊二酸7mmol/LADP0.6mmol/L谷氨酸脫氫酶≥1000U/L脲酶≥6000U/L試劑2：NADH0.25mmol/L6.1.2試劑準(zhǔn)備：試劑為即用式。6.1.3試劑穩(wěn)定性與貯存試劑保存于2～25℃，若無污染，可穩(wěn)定至失效期。試劑不可冰凍。6.1.4變質(zhì)指示：當(dāng)試劑有看得見的微生物生長，有濁度，或者未開蓋的液體有沉淀時，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。6.1.5注意事項：此試劑為體外診斷用。不要入口，吞下有害。保護(hù)劑為疊氮鈉，避免接觸皮膚及粘膜，與下水管中的鉛反應(yīng)形成爆炸性化合物，即使只含有少量的疊氮鈉，如果排向下水道請用大量的水沖洗。應(yīng)采取必要的預(yù)防措施使用試劑。6.2校準(zhǔn)品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校準(zhǔn)品對自動分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)，具體參見生化檢驗校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件。6.3質(zhì)控品：具體參見生化檢驗校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件。7.儀器：奧林巴斯AU1000生化分析儀8.操作步驟8.1項目基本參數(shù)：參見生化檢驗奧林巴斯AU1000生化分析儀項目測定參數(shù).SOP文件8.2儀器操作步驟：參見生化檢驗奧林巴斯AU1000生化分析儀操作規(guī)程.SOP文件9.檢驗結(jié)果的判斷與分析10.質(zhì)量控制：在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把非定值血清水平I與II質(zhì)控做為未知標(biāo)本進(jìn)行分析，以2S為質(zhì)控警告限，3S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參見生化室室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SOP文件。11.計算方法：以TruCalU復(fù)合校準(zhǔn)品尿素氮校準(zhǔn)值校準(zhǔn)儀器后，在病人結(jié)果可報告范圍內(nèi)，儀器直接報告可靠的檢測結(jié)果，以mmol/L報告。將尿素量乘以系數(shù)2.8可以換算成尿素氮量；將尿素氮量乘以系數(shù)0.357可以換算成尿素量。手工測定計算方法為：Au尿素氮濃度（mmol/L）＝×校準(zhǔn)液濃度As12.參考值范圍血清/血漿[1]成人（mmol/L）全球2.8～7.2女性<50歲2.6～6.7女性>50歲3.5～7.5男性<50歲3.2～7.3男性>50歲3.0～9.2兒童1～3歲1.8～6.04～13歲2.5～6.014～19歲2.9～7.5尿素/肌酐比率[1]25～40[(mmol/L)/(mmol/L)]尿液[2]0.43～0.72mol/d（注：各實驗室應(yīng)有自己的參考范圍。）參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實驗室經(jīng)驗，每個實驗室應(yīng)建立自己的參考值。13.臨床意義：尿素是蛋白質(zhì)分解代謝的含氮終產(chǎn)物。高尿素血癥或氮血癥表現(xiàn)為血液中尿素水平升高。鑒別腎前和腎后氮血癥時可以同時檢測尿素和肌酐。因脫水、蛋白質(zhì)代謝增加、皮質(zhì)醇治療或腎臟灌注減少等引起的腎前氮血癥，表現(xiàn)為尿素水平升高而肌酐水平正常。由泌尿管道阻塞引起的腎后氮血癥，表現(xiàn)為尿素和肌酐水平都升高，但肌酐升高程度較小。發(fā)生腎病時，腎小球濾過作用明顯下降或蛋白質(zhì)攝入量大于200g/天都會導(dǎo)致尿素濃度升高。尿素氮的檢測用于診斷和治療某些腎臟疾病和代謝紊亂。尿素氮大約占血液中非蛋白氮的75%。它通過肝臟中的氨進(jìn)行合成，是蛋白質(zhì)脫氨作用的產(chǎn)物。通過腎小球從血液中過濾尿素到尿中，是消除體內(nèi)多余氮的主要方法。血液尿素氮（BUN）水平是腎功能以及腎前狀態(tài)和腎后狀態(tài)的度量標(biāo)準(zhǔn)，腎前因素引起的BUN的升高包括心臟代償失調(diào)，缺水或增加的蛋白質(zhì)分解代謝。水平增加的腎臟因素有急性腎小球腎炎，慢性腎炎，多囊腎，腎纖維化和腎小管壞死。任何類型的泌尿道的梗塞受阻是BUN水平升高的腎后因素1。腎小球清除尿素和肌酸酐，但是，尿素隨后部分地被腎小管重吸收，然而肌酸酐卻不會。因此，血清尿素氮和血清肌酸酐測定經(jīng)常同時用于腎功能的不同診斷中。14.操作性能14.1線性范圍：0.3～50mmol/L14.2精密度：精密度的評估是根據(jù)NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法，AU1000批內(nèi)不精密度小于3%，總不精密度小于5%。用于分析的質(zhì)控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS的規(guī)則。批內(nèi)精密度n=20(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)天間精密度n=20(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)樣品14.960.275.41樣品15.230.305.79樣品28.770.273.13樣品28.770.343.87樣品319.480.251.27樣品319.480.552.8614.3方法學(xué)比較：本公司的試劑(y)與某商品化試劑(x)，同時對68個樣品進(jìn)行Urea檢測，將檢測結(jié)果作方法學(xué)比較，其統(tǒng)計結(jié)果如下：y=0.99x+0.176mmol/L；r=0.999。14.4靈敏度：本試劑的檢測限為0.3mmol/L。14.5病人結(jié)果可報告范圍：0.3～50mmol/L15.超出范圍結(jié)果處理：本法線性上限血清/血漿為50mmol/L、尿液為5mol/L。如樣品測定值超過上限時，應(yīng)將樣品用0.9%的氯化鈉溶液作1:2稀釋，重新測定，結(jié)果乘以3。16.病危報警值的處理：當(dāng)尿素氮測定值>36mmol/L時，在經(jīng)過復(fù)查等確認(rèn)手段處理后應(yīng)及時向臨床主管醫(yī)生匯報。17.方法局限性17.1本法線性上限血清/血漿為50mmol/L、尿液為5mol/L。如樣品測定值超過上限時，應(yīng)將樣品用0.9%的氯化鈉溶液作1:2稀釋，重新測定，結(jié)果乘以3。17.2干擾物質(zhì)：當(dāng)樣品中抗壞血酸濃度1704mol/L，膽紅素濃度684mol/L，血紅蛋白濃度5.00g/L，甘油三酯濃度22.6mmol/L時沒有觀察到干擾。銨離子會影響檢測結(jié)果，因此收集血漿時勿用肝素銨抗凝！18.補(bǔ)救措施：當(dāng)儀器發(fā)生故障時，迅速聯(lián)系儀器廠家進(jìn)行維修。19.參考文獻(xiàn)ThomasL,editor.Clinicallaboratorydiagnostics.1sted.Frankfurt:TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.374-7.BurtisCA,AshwoodER.editors.Tietztextbookofclinicalchemistry.3rded.Philadelphia:W.B.SaundersCompany;1999.p.1838.3.TalkH,SchubertGE.EnzymatischeHarstoffbestimmunginBlutundSerumimoptischenT