高效液相色譜法簡(jiǎn)單的

高效液相色譜法簡(jiǎn)單的2023/6/26第一頁，共十四頁，編輯于2023年，星期六液相色譜是以液體為流動(dòng)相的色譜分析方法。英文縮寫：LC。按其固定相的不同，又可分為液固色譜（LSC）和液液色譜（LLC）液相色譜簡(jiǎn)介2023/6/26第二頁，共十四頁，編輯于2023年，星期六

氣相色譜只適合分析較易揮發(fā)、且化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的有機(jī)化合物，而HPLC則適合于分析那些用氣相色譜難以分析的物質(zhì)，如揮發(fā)性差、極性強(qiáng)、具有生物活性、熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)?，F(xiàn)在，HPLC的應(yīng)用范圍已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過氣相色譜，位居色譜法之首。在所有色譜技術(shù)中，液相色譜法是最早（1903年）發(fā)明的，但其初期發(fā)展較慢，在液相色譜普及之前，紙色譜法、氣相色譜法和薄層色譜法是色譜分析法的主流。到了20世紀(jì)60年代后期，將已經(jīng)發(fā)展得比較成熟的氣相色譜的理論與技術(shù)應(yīng)用到液相色譜上來，使液相色譜得到了迅速的發(fā)展。特別是填料制備技術(shù)、檢測(cè)技術(shù)和高壓輸液泵性能的不斷改進(jìn)，使液相色譜分析實(shí)現(xiàn)了高效化和高速化。具有這些優(yōu)良性能的液相色譜儀于1969年商品化。從此，這種分離效率高、分析速度快的液相色譜就被稱為高效液相色譜法（highperformanceliquidchromatography，HPLC），也稱高壓液相色譜法或高速液相色譜法。

液相色譜的發(fā)展2023/6/26第三頁，共十四頁，編輯于2023年，星期六液相色譜的分類

廣義地講，固定相為平面狀的紙色譜法和薄層色譜法也是以液體為流動(dòng)相，也應(yīng)歸于液相色譜法。不過通常所說的液相色譜法僅指所用固定相為柱型的柱液相色譜法。

通常將液相色譜法按分離機(jī)理分成吸附色譜法、分配色譜法、離子色譜法和凝膠色譜法四大類。2023/6/26第四頁，共十四頁，編輯于2023年，星期六

類型主要分離機(jī)理主要分析對(duì)象或應(yīng)用領(lǐng)域吸附色譜吸附能，氫鍵異構(gòu)體分離、族分離，制備分配色譜疏水分配作用各種有機(jī)化合物的分離、分析與制備凝膠色譜溶質(zhì)分子大小高分子分離，分子量及其分布的測(cè)定離子交換色譜庫侖力無機(jī)離子、有機(jī)離子分析離子排斥色譜Donnan膜平衡有機(jī)酸、氨基酸、醇、醛分析離子對(duì)色譜疏水分配作用離子性物質(zhì)分析疏水作用色譜疏水分配作用蛋白質(zhì)分離與純化手性色譜立體效應(yīng)手性異構(gòu)體分離，藥物純化親和色譜生化特異親和力蛋白、酶、抗體分離，生物和醫(yī)藥分析表5－1液相色譜分類返回2023/6/26第五頁，共十四頁，編輯于2023年，星期六液相色譜儀（1）2023/6/26第六頁，共十四頁，編輯于2023年，星期六液相色譜儀（2）2023/6/26第七頁，共十四頁，編輯于2023年，星期六液相色譜儀（3）2023/6/26第八頁，共十四頁，編輯于2023年，星期六液相色譜儀（4）2023/6/26第九頁，共十四頁，編輯于2023年，星期六一、高效液相色譜法的特點(diǎn)

特點(diǎn)：高壓、高效、高速高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。2023/6/26第十頁，共十四頁，編輯于2023年，星期六二、流程及主要部件1.流程2023/6/26第十一頁，共十四頁，編輯于2023年，星期六2.主要部件(1)高壓輸液泵主要部件之一，壓力：15～35×106Pa。為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液體的流動(dòng)相高速通過時(shí)，將產(chǎn)生很高的壓力，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一。應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性2023/6/26第十二頁，共十四頁，編輯于2023年，星期六選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問題（1）盡量使用高純度試劑作流動(dòng)相，防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測(cè)器噪聲增加。（2）避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。（3）試樣在流動(dòng)相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。（4）流動(dòng)相同時(shí)還應(yīng)滿足檢測(cè)器的要求。當(dāng)使用紫外檢測(cè)器時(shí)，流動(dòng)相不應(yīng)有紫外吸收。返回2023/6/26第十三頁，共十四頁，編輯于2023年，星期六

應(yīng)用領(lǐng)域分析對(duì)象舉例環(huán)境常見無機(jī)陰陽離子、多環(huán)芳烴、多氯聯(lián)苯、硝基化合物、有害重金屬及其形態(tài)、除草劑、農(nóng)藥、酸沉降成分。農(nóng)業(yè)土壤礦物成分、肥料、飼料添加劑、茶葉等農(nóng)產(chǎn)品中無機(jī)和有機(jī)成分。化工無機(jī)化工產(chǎn)品、合成高分子化合物、表面活性劑、洗滌劑成分、化妝品、染料。食品無機(jī)陰陽離子、有機(jī)酸、氨基酸、糖、維生素、脂肪酸、香料、甜味劑、防腐劑、人工色素、病原微生物、霉菌毒素、多核芳烴。生物氨基酸、多