微生物室管理制度

年4月19日微生物室管理制度文檔僅供參考微生物實(shí)驗(yàn)室管理制度文件編號：版本號：修訂號：起草人審核人批準(zhǔn)人起草日期審核日期批準(zhǔn)日期頒發(fā)部門分發(fā)編號生效日期目的：規(guī)范微生物室管理規(guī)范，以保證微生物實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。范圍：適用于微生物實(shí)驗(yàn)室依據(jù)：GB/T19489-《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》；執(zhí)行部門：化驗(yàn)室微生物檢驗(yàn)室職責(zé)：1.微生物檢驗(yàn)員負(fù)責(zé)微生物實(shí)驗(yàn)室的管理。2.實(shí)驗(yàn)室主管負(fù)責(zé)對微生物實(shí)驗(yàn)室管理情況進(jìn)行檢查。內(nèi)容：本中心微生物實(shí)驗(yàn)室管理制度包括微生物實(shí)驗(yàn)室人員管理制度、微生物室出入管理制度、微生物室環(huán)境管理制度、微生物室的使用管理制度。微生物實(shí)驗(yàn)室藥品管理制度。微生物實(shí)驗(yàn)室的人員管理微生物實(shí)驗(yàn)室由微生物檢驗(yàn)員管理及使用,其它人員須經(jīng)主管人員批準(zhǔn)后方可進(jìn)入和使用。微生物實(shí)驗(yàn)室的人員需經(jīng)過相關(guān)的培訓(xùn)。微生物實(shí)驗(yàn)室出入管理人員出入管理：人員進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室潔凈區(qū)前，需要洗手消毒；在一級緩沖室換實(shí)驗(yàn)服、戴帽子、換鞋后，進(jìn)入風(fēng)淋室，風(fēng)淋后，進(jìn)入二級緩沖室準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)操作前須帶上無菌手套和口罩。物料出入管理：物料進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室以前，脫去外包裝或者用酒精棉球擦拭后，放置于傳遞窗中。物料放置于傳遞窗后，開啟紫外0.5小時，同時將微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的凈化系統(tǒng)、紫外燈打開。紫外開啟0.5小時以后，關(guān)閉紫外，并將物品轉(zhuǎn)移于實(shí)驗(yàn)操作臺上。實(shí)驗(yàn)完畢后，微生物實(shí)驗(yàn)室物品經(jīng)傳遞窗傳出后，經(jīng)高溫滅菌后廢液、廢物倒入廢液桶處理。微生物實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境管理微生物實(shí)驗(yàn)室的清潔管理微生物實(shí)驗(yàn)室的清潔分為一般清潔及徹底清潔，其具體的清潔部位、方式方法、頻率見下表所示：清潔方式清潔部位清潔方法清潔周期一般清潔實(shí)驗(yàn)設(shè)備、操作臺面每次使用前用消毒液由上往下、由內(nèi)而外的擦拭兩遍開啟凈化系統(tǒng)及紫外燈0.5小時每次試驗(yàn)前徹底清潔頂棚、墻面用純化水由上往下、由內(nèi)而外的擦拭兩遍后，再用消毒液按上述順序擦拭一遍。開啟凈化系統(tǒng)及紫外燈0.5小時每周生物安全柜實(shí)驗(yàn)設(shè)備、操作臺面日光燈地面紫外燈用濕布擦拭一次，去除積塵。微生物實(shí)驗(yàn)室常見消毒劑及其配制消毒液名稱用途配制方法使用期限75%酒精擦拭設(shè)備表面量取95％濃度的醫(yī)用酒精，用純化水稀釋至75％濃度（用酒精比重計測量），混勻。七天0.1%新潔爾滅擦拭墻面、地面及臺面用量筒量取5％新潔爾滅100ml，用純化水稀釋至2500ml，混勻。一個月84消毒液擦拭墻面、地面及臺面按所用84消毒液瓶身標(biāo)簽的稀釋方法1：55配制所需量，混勻。一個月微生物實(shí)驗(yàn)室的使用管理微生物實(shí)驗(yàn)室使用之前，應(yīng)先開啟微生物實(shí)驗(yàn)室自凈系統(tǒng)30分鐘。每次使用前應(yīng)用消毒液擦拭超凈工作臺及其它一切可能引起污染的死角，然后開紫外燈滅菌30分鐘，同時開啟超凈工作臺。操作完畢后，用消毒液擦拭臺面，做好衛(wèi)生，開紫外燈30分鐘，并記錄紫外燈照射時間。注：當(dāng)紫外燈使用1000小時應(yīng)更換。微生物實(shí)驗(yàn)室使用時，應(yīng)同時進(jìn)行沉降菌監(jiān)測，將含有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)皿在各監(jiān)測點(diǎn)正向放置，打開蓋子，暴露30分鐘，然后蓋上，將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基放入30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，觀察結(jié)果，每皿菌落數(shù)應(yīng)≤1個，否則應(yīng)加強(qiáng)清潔消毒工作，必要時驗(yàn)證生物安全柜微生物實(shí)驗(yàn)室藥品及培養(yǎng)基管理制度藥品及培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗(yàn)是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。藥品及培養(yǎng)基的采購及接收微生物實(shí)驗(yàn)室所用的藥品及培養(yǎng)基必須是符合國家相關(guān)資質(zhì)的公司所出產(chǎn)的。實(shí)驗(yàn)室根據(jù)檢驗(yàn)需要申購所需的培養(yǎng)基并做好相應(yīng)的接收記錄。5.1培養(yǎng)基的接收 微生物檢驗(yàn)室應(yīng)指定專人負(fù)責(zé)培養(yǎng)基的管理，在接收培養(yǎng)基時，應(yīng)核對培養(yǎng)基的品名、來源、批號、生產(chǎn)日期、有效期、數(shù)量，脫水培養(yǎng)基應(yīng)附有處方和使用說明，并做好接收記錄。5.2培養(yǎng)基的制備

培養(yǎng)基可按處方配制，也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。

在制備培養(yǎng)基時，應(yīng)選擇質(zhì)量符合要求的脫水培養(yǎng)基或單獨(dú)配方組分進(jìn)行配制。脫水培養(yǎng)基應(yīng)附有處方和使用說明，配制時應(yīng)按使用說明上的要求操作以確保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求，不得使用結(jié)塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基。脫水培養(yǎng)基或單獨(dú)配方組分應(yīng)在適當(dāng)?shù)臈l件下貯藏，如低溫、干燥和避光，所有的容器應(yīng)密封，特別是盛放脫水培養(yǎng)基的容器。商品化的成品培養(yǎng)基除了應(yīng)附有處方和使用說明外，還應(yīng)注明有效期、貯藏條件、適用性檢查試驗(yàn)的質(zhì)控菌和用途。

為保證培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定可靠，各脫水培養(yǎng)基或各配方組分應(yīng)準(zhǔn)確稱量，并要求有一定的精確度。配制培養(yǎng)基最常見的溶劑是純化水，特殊情況下，可能需要用去離子水和蒸餾水。應(yīng)記錄各稱量物的重量和水的使用量。

配制培養(yǎng)基所用容器和配套器具應(yīng)潔凈，可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質(zhì)的殘留，對熱敏感的培養(yǎng)基如糖發(fā)酵培養(yǎng)基其分裝容器一般應(yīng)預(yù)先進(jìn)行滅菌，以保證培養(yǎng)基的無菌性。

脫水培養(yǎng)基應(yīng)完全溶解于水中，再行分裝與滅菌。配制時若需要加熱助溶，應(yīng)注意不要過度加熱，以避免培養(yǎng)基顏色變深。如需要添加其它組分時，加入后應(yīng)充分混勻。應(yīng)按照生產(chǎn)商提供或使用者驗(yàn)證的參數(shù)進(jìn)行培養(yǎng)基的滅菌。商品化的成品培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方法的資料。培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術(shù)，特殊培養(yǎng)基可采用薄膜過濾除菌。

培養(yǎng)基若采用不適當(dāng)?shù)募訜岷蜏缇鷹l件，有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或pH的改變。因此，培養(yǎng)基應(yīng)采用驗(yàn)證的滅菌程序滅菌，培養(yǎng)基滅菌方法和條件，應(yīng)經(jīng)過無菌性試驗(yàn)和促生長試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。另外，對高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗(yàn)證，以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導(dǎo)致培養(yǎng)基的過熱，過度滅菌可能會破壞絕大多數(shù)的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)基促生長的質(zhì)量。滅菌器中培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此，應(yīng)根據(jù)滅菌培養(yǎng)基的特性，進(jìn)行全面的滅菌程序驗(yàn)證。

應(yīng)確定每批培養(yǎng)基滅菌后的pH值（冷卻至室溫25℃測定）。若培養(yǎng)基處方中未列出pH值的范圍，除非經(jīng)驗(yàn)證表明培養(yǎng)基的pH值允許的變化范圍很寬，否則，pH值的范圍不能超過規(guī)定值士0.2。

制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行下列檢查：容器和蓋子不得破裂，裝量應(yīng)相同，盡量避免形成氣泡，固體培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪，在冷藏溫度下不得形成結(jié)晶，不得污染微生物等。應(yīng)檢查和記錄批數(shù)量、有效期及培養(yǎng)基的無菌檢查。5.3培養(yǎng)基的貯藏自配的培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記名稱、批號、配制日期等信息，并在已驗(yàn)證的條件下貯藏。商品化的成品培養(yǎng)基標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)有名稱、批號、生產(chǎn)日期、失效期及培養(yǎng)基的有關(guān)特性，生產(chǎn)商和使用者應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基使用說明書上的要求進(jìn)行貯藏，所采用的貯藏和運(yùn)輸條件應(yīng)使成品培養(yǎng)基最低限度的失去水分并提供機(jī)械保護(hù)。

培養(yǎng)基滅菌后若貯藏在高壓滅菌器中，質(zhì)量可能會受影響，一般不提倡這種存放法。瓊脂培養(yǎng)基不得在O℃或O℃以下存放，因?yàn)槔鋬隹赡芷茐哪z特性。培養(yǎng)基應(yīng)避光保存，若要長期保存，應(yīng)置于密閉容器中以防止水分流失。瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如置冰箱保存，一般不超過1周，且應(yīng)密閉包裝，若延長保存期限，保存期需經(jīng)驗(yàn)證確定。

固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許1次，以避免因過度受熱造成培養(yǎng)基質(zhì)量下降或微生物污染。培養(yǎng)基的再融化一般采用水浴或流通蒸汽加熱。若使用微波爐，應(yīng)避免培養(yǎng)基過度受熱及水分的蒸發(fā)，更要注意安全。融化的培養(yǎng)基應(yīng)置于45～50℃的水浴中，不得超過8小時。傾注培養(yǎng)基時，應(yīng)擦干培養(yǎng)基容器外表面的水分，避免容器外壁的水滴進(jìn)人培養(yǎng)基中造成污染。

使用過的培養(yǎng)基（包括失效的培養(yǎng)基）應(yīng)按照國家污染廢物處理相關(guān)規(guī)定進(jìn)行。5.4質(zhì)量控制試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對試驗(yàn)用培養(yǎng)基建立質(zhì)量控制程序，以確保所用培養(yǎng)基質(zhì)量符合相關(guān)檢測的需要。

實(shí)驗(yàn)室配制或商品化的成品培養(yǎng)基的質(zhì)量依賴于其制備過程，采用不適宜方法制備的培養(yǎng)基將影響微生物的生長或復(fù)蘇，從而影響試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

所有配制好的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項目是pH、適用性檢查試驗(yàn)，定期的穩(wěn)定性檢查以確定有效期。培養(yǎng)基在有效期內(nèi)應(yīng)依據(jù)適用性檢查試驗(yàn)確定培養(yǎng)基質(zhì)量是否符合要求。有效期的長短將取決于在一定存放條件下（包括容器特性及密封性）的培養(yǎng)基其組成成分的穩(wěn)定性。

除藥典附錄另有規(guī)定外，在實(shí)驗(yàn)室中，若采用已驗(yàn)證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗(yàn)可只進(jìn)行1次。如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng)驗(yàn)證，那么每一批培養(yǎng)基均要進(jìn)行適用性檢查試驗(yàn)，試驗(yàn)的菌種可根據(jù)培養(yǎng)