動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體用

關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體用第1頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三

2002年12月30日，

兩場(chǎng)籌備了10年的“太空婚禮”首次在神舟四號(hào)飛船上舉行，植物細(xì)胞“新人”—黃花煙草和革新一號(hào)煙草葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體，動(dòng)物細(xì)胞“新人”是小鼠B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞，兩批新人同時(shí)在“產(chǎn)房”—電融合儀內(nèi)孕育新生命?！疤栈槎Y”這兩場(chǎng)“太空婚禮”實(shí)質(zhì)是哪兩項(xiàng)細(xì)胞工程技術(shù)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)第2頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物體細(xì)胞雜交過(guò)程示意圖第3頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三A細(xì)胞B細(xì)胞人工誘導(dǎo)1.1動(dòng)物細(xì)胞融合的概念雜交細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合（也稱細(xì)胞雜交）：是指兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞融合形成一個(gè)單核細(xì)胞的過(guò)程。一、動(dòng)物細(xì)胞融合第4頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三閱讀課本P52及識(shí)圖2-23，并完成學(xué)案第1頁(yè)【學(xué)習(xí)過(guò)程】第5頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三細(xì)胞膜的流動(dòng)性滅活病毒、PEG、電激等融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，形成完整的雜交細(xì)胞誘導(dǎo)的手段？融合后細(xì)胞的類型？AB雜種細(xì)胞遺傳物質(zhì)有什么特點(diǎn)？三種AA、AB、BB（A、B）含兩種生物的遺傳物質(zhì)1.2動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程原理？第6頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三1.2動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程為什么滅活的病毒能作誘導(dǎo)劑？滅活喪失感染性保留融合活性第7頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三1.3動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用第8頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三比較項(xiàng)目細(xì)胞融合的原理細(xì)胞融合的方法誘導(dǎo)手段用途植物體細(xì)胞雜交細(xì)胞膜的流動(dòng)性纖維素酶、果膠酶去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合離心、電刺激、振動(dòng)、聚乙二醇克服遠(yuǎn)源雜交不親和，獲得雜種植株動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞膜的流動(dòng)性用胰蛋白酶使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合除應(yīng)用植物細(xì)胞雜交手段外，還有滅活病毒獲得雜種細(xì)胞、制備單克隆抗體1.4比較動(dòng)、植物細(xì)胞雜交技術(shù)第9頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三【例1】能使動(dòng)物細(xì)胞融合的特有的誘導(dǎo)因子是（）A.離心B.滅活的病毒C.電刺激D.振動(dòng)【例2】融合后的雜交細(xì)胞的遺傳物質(zhì)有何特點(diǎn)（）具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息B.能無(wú)限增殖C.可形成新個(gè)體D.培養(yǎng)過(guò)程會(huì)貼壁【例3】動(dòng)物細(xì)胞融合的作用中最重要的是（）A.克服遠(yuǎn)源雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新物種D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞

BB初試牛刀A第10頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三強(qiáng)調(diào)：效應(yīng)B淋巴細(xì)胞是能夠產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞，下文將其簡(jiǎn)稱為B淋巴細(xì)胞抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是漿細(xì)胞（即效應(yīng)B細(xì)胞）。溫故知新二、單克隆抗體B淋巴細(xì)胞效應(yīng)B淋巴細(xì)胞記憶B淋巴細(xì)胞分化第11頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗原反復(fù)注射動(dòng)物從動(dòng)物的血清中分離抗體該法制備抗體的缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。如何解決這個(gè)問題呢？單克隆抗體！第12頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念

人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過(guò)程中，體內(nèi)的B細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬(wàn)種以上的特異性抗體，但是每個(gè)B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)B細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖，即克隆。2.1單克隆抗體的概念單克隆抗體：?jiǎn)蝹€(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體第13頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三提示1：對(duì)B細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？提示2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無(wú)限增殖的？問題：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請(qǐng)嘗試設(shè)計(jì)一個(gè)方案。2.2單克隆抗體的制備

第14頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖雜交瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計(jì)方案：動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆抗體既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖的細(xì)胞1975年英國(guó)科學(xué)家米爾斯坦和柯勒的實(shí)驗(yàn)第15頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三①為什么給小鼠注射特定的抗原蛋白？②會(huì)有幾種融合方式？③雜交瘤細(xì)胞是如何篩選出來(lái)的？有何特點(diǎn)？④是否所有的雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生專一性抗體？⑤如何大規(guī)模進(jìn)行培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？第16頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一選）選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細(xì)胞才能存活獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B細(xì)胞（二選）：選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細(xì)胞√體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。第17頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三單抗制備過(guò)程分哪幾步？請(qǐng)用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過(guò)程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來(lái)。順序是？

你學(xué)會(huì)了嗎？第18頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三2.3單克隆抗體的應(yīng)用診斷試劑——最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，并能大量制備。第19頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三“生物導(dǎo)彈”＝單克隆抗體＋藥物單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭治療疾病和運(yùn)載藥物主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞。第20頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三【例4】科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（）A.經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞C.經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞B.不經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞D.不經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞【例5】單克隆抗體是由下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的（）B淋巴細(xì)胞B．T淋巴細(xì)胞C．骨髓瘤細(xì)胞D．雜交瘤細(xì)胞A初試牛刀D第21頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三【例6】用動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，下列實(shí)驗(yàn)步驟中錯(cuò)誤的是（）A．將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞B．用纖維素酶處理B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞C．用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合D．篩選雜交細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體B初試牛刀×第22頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三兩個(gè)過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法－－滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)本節(jié)小結(jié)重點(diǎn)第23頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三謝謝第24頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三(1)若A細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞，則B細(xì)胞是取自小鼠體內(nèi)的

細(xì)胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之前，應(yīng)給小鼠注射_____________類物質(zhì)。（2）d過(guò)程是一個(gè)_____________過(guò)程，該過(guò)程的進(jìn)行常用_____________或_____________的誘導(dǎo)。(3)假設(shè)僅考慮某兩個(gè)細(xì)胞的融合，則可形成

種類型的C細(xì)胞，因此需用__________培養(yǎng)基篩選出D細(xì)胞用于培養(yǎng)，D細(xì)胞的名稱是

，其特點(diǎn)是_________________________________________。效應(yīng)B

抗原

細(xì)胞融合

聚乙二醇滅活的病毒

選擇性3既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體

雜交瘤細(xì)胞第25頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三(4)在培養(yǎng)時(shí)通過(guò)________分裂方式大量繁殖。D細(xì)胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答5項(xiàng)）__________________________________。（5）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預(yù)防方面，與常規(guī)抗體相比，其特點(diǎn)是_________________。特異性強(qiáng)、靈敏度高

有絲無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境；充足的營(yíng)養(yǎng)；適宜的溫度和pH；適宜的氣體環(huán)境

第26頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三15、（1）單克隆抗體是指

。（2）制備單克隆抗體的步驟：①將__________注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟中獲得淋巴細(xì)胞，其中至少1個(gè)淋巴細(xì)胞帶有抗該抗原的抗體。②將步驟①獲得的B淋巴細(xì)胞與步驟②培養(yǎng)的骨髓瘤細(xì)胞在_________________的誘導(dǎo)下融合。③將誘導(dǎo)后產(chǎn)生的多種細(xì)胞，放在_______培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。④這樣獲得的雜交瘤細(xì)胞既具有B淋巴細(xì)胞_____________的能力，又具有________________的本領(lǐng)。⑤檢測(cè)和分離帶有抗X抗體的陽(yáng)性細(xì)胞，培養(yǎng)板中每孔放一個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。⑥將陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行增殖，從而制備出大量抗該抗原的單克隆抗體。化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)的抗體

抗原

聚乙二醇選擇性

無(wú)限增殖

產(chǎn)生專一抗體第27頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三（3）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：①體外培養(yǎng)法，可獲得10μg/mL的抗體；②動(dòng)物體內(nèi)誘生法可獲得5~20mg/mL的抗體。你選擇的方法及原因是

。（4）用本法制備出的單克隆抗體仍具有局限性，因?yàn)樗怯眯∈蟮腳______細(xì)胞制備的，其化學(xué)本質(zhì)是___________，應(yīng)用于人體，會(huì)作為

產(chǎn)生

，解決這個(gè)問題的方法是_____________________________。大量生產(chǎn)選①，小規(guī)模生產(chǎn)選②效應(yīng)B蛋白質(zhì)異物免疫反應(yīng)采用人的效應(yīng)B細(xì)胞制備第28頁(yè)，講稿共33頁(yè)，2023年5月2日，星期三15、右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案。據(jù)圖回答：

（1）該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？

。原因是

______________________________________________。

（2）圖中②為

過(guò)程，常用

作為誘導(dǎo)劑。該細(xì)胞繼承了_____________________

，因此不僅能分泌

___________，還有

本領(lǐng)。

不能

沒有將抗