FACSCano流式細(xì)胞儀原理

FACSCanto流式細(xì)胞儀原理及應(yīng)用

陳清彬Qingbin_chen@BD公司介紹BD公司是由MaxwellW.Becton和FairleighS.Dickinson于1897年在紐約創(chuàng)立的,總部位于美國(guó)新澤西州BD公司介紹位居財(cái)富周刊500強(qiáng)的大型跨國(guó)公司產(chǎn)品涵蓋諸多醫(yī)療領(lǐng)域生物科學(xué)部:流式細(xì)胞儀及應(yīng)用于生物科學(xué)的試劑、耗材BD公司流式細(xì)胞儀產(chǎn)品FACSVantageSE-大型分選機(jī)FACSAria-高速分選的臺(tái)式機(jī)FACSDiva-高速分選的數(shù)字化大型機(jī)BD公司流式細(xì)胞儀產(chǎn)品FACSCount流式細(xì)胞儀FACSCalibur流式細(xì)胞儀FACSCantoII流式細(xì)胞儀BD公司流式細(xì)胞儀產(chǎn)品BDFACSCantoII流式細(xì)胞儀FACSCantoII流式細(xì)胞儀原理流式細(xì)胞儀可告訴我們一個(gè)細(xì)胞的什么指標(biāo)?細(xì)胞的相對(duì)大?。ㄇ跋蚪巧⑸涔庑盘?hào)，F(xiàn)SC）細(xì)胞的相對(duì)顆粒性及內(nèi)部結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性（側(cè)向散射光信號(hào)，SSC）相關(guān)的熒光強(qiáng)度散射光信號(hào)的特征FSC和SSC當(dāng)顆粒通過(guò)聚集的激光束時(shí)，激光向各個(gè)方向散射。與激光束方向同軸的稱前向角散射光信號(hào)（FSC）。與激光束垂直的稱為側(cè)向角散色光信號(hào)（SSC）。488nm激光激發(fā)產(chǎn)生散射光前向己角散訂射光例信號(hào)認(rèn)FS態(tài)C側(cè)向禮角散環(huán)射光懷信號(hào)謠SS租C散射溝光信胳號(hào)的箱特征紅細(xì)貞胞裂刊解的彩全血熒光死信號(hào)傍的特預(yù)征什么刊是熒假光信蟲(chóng)號(hào)當(dāng)熒蛛光抗宴體或缺其他夢(mèng)染料裕染色難的顆暢粒通丸過(guò)激土光束尾時(shí)，壤染料途吸收冊(cè)光子踩躍遷魄到高深能級(jí)糧，返辨回基鉛態(tài)時(shí)米，染宰料釋烤放出蘭能量賣，大務(wù)部分自以光押的形搜式釋族放。屬這種農(nóng)發(fā)射賄出的黑光稱昂為熒荒光。熒光齊信號(hào)沃的特握征發(fā)射朝光的圾熒光封強(qiáng)度霞與結(jié)造合的翼位點(diǎn)主成正劃比信號(hào)忌產(chǎn)生熒光餅信號(hào)熒光抓信號(hào)脅的特付征常見(jiàn)吊熒光痛染料擊的發(fā)銳射波臣長(zhǎng)直方修圖顯卡示熒慎光信壘號(hào)點(diǎn)圖跡顯示漂熒光憑信號(hào)什么辮是流糊式細(xì)朝胞儀駱？在流噸動(dòng)的精狀態(tài)據(jù)中檢聯(lián)測(cè)細(xì)睬胞各茫種物斗理及改生物靠特征午的一菠種儀雕器；InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid流式讓細(xì)胞歇儀特寶點(diǎn)及挺檢測(cè)響標(biāo)本特異巷性強(qiáng)盜，靈馬敏度骨高，層速度彎快，襲并能好實(shí)現(xiàn)卻多參腥數(shù)分執(zhí)析；可檢胃測(cè)的鄉(xiāng)豐樣本共種類逢多樣(1芹)外周是血，姥骨髓鄭，細(xì)川針穿廉刺，鐮洗脫勝液，蛙實(shí)體侍組織睡，培拳養(yǎng)細(xì)晃胞(2寇)血仰清、互血漿接、培爸養(yǎng)上護(hù)清、腐細(xì)胞迎裂解矛液FA狡CS室Ca典nt蟻o條II流式因細(xì)胞堪儀系肺統(tǒng)組鞠成流式安細(xì)胞攜儀液流訴車工作腳站FA灑CS自Ca亡nt周o簡(jiǎn)抱介配置善空冷懼激光兩根放激光裕:4腿88戴nm清、6哲33夢(mèng)nm芝、光路山固定肚，無(wú)炊需調(diào)鋼校液流毯系統(tǒng)信號(hào)您檢測(cè)堆系統(tǒng)八角炮形和拋三角踢形光乏學(xué)收旅集系郵統(tǒng)，嶺將光斗信號(hào)房誠(chéng)轉(zhuǎn)換林成電此信號(hào)電子恥系統(tǒng)劑將電附信號(hào)煌轉(zhuǎn)換繩成數(shù)擊字化丸信號(hào)液流北系統(tǒng)流動(dòng)駱室鞘液工作顫液，啊可選胳PB勞S、尤血球誰(shuí)稀釋蛙液或疲蒸餾渾水。樣本遣流單細(xì)顯胞懸較液，念濃度營(yíng)51羊051奪艙106/m伸L液流銹系統(tǒng)鞘液晶是壓瞎力驅(qū)繭動(dòng)的圖。在嫂壓力山作用星下，盲鞘液慘經(jīng)過(guò)受濾器微進(jìn)入筋流動(dòng)壟室下躁部的桑小室叨中。檢測(cè)匹的樣諷本在秀壓力歌的作桃用下億，也閘進(jìn)入與流動(dòng)跪室下襲部的葡小室?guī)弥校謽颖景駢毫Φ源髰徲谇式枰旱某藟毫W(xué)。在鞘劫液的執(zhí)包裹該下，典樣本魯由下籃向上饞通過(guò)靈流動(dòng)榮室，兇經(jīng)激濾光激酒發(fā)后僑，樣鋪本中棒的顆嚼粒被堪檢測(cè)辱。液流皂系統(tǒng)晴-FL擔(dān)OW界C壇EL倚L(流流動(dòng)念室)InjectorTip熒光信號(hào)聚焦的激光光束鞘液液流竟系統(tǒng)液流頃系統(tǒng)爹-樣林本流泉速樣本撇流速饅的選全擇高流和速：罪一般某用于習(xí)定性狐分析擇，如干免疫撓分型摔。采爐集速緩度快宿,但望分辨列率低發(fā).低流殘速：撇一般秒用于崗對(duì)分鐵辨率廊要求刻較高富的分駁析，骨如D碗NA府分析份。光學(xué)艙系統(tǒng)光學(xué)與系統(tǒng)染色浸的細(xì)拋胞或和其他根顆粒朋通過(guò)爪聚焦襲的激穗光束繼時(shí)，多會(huì)散希射激漫光或鹽熒光獎(jiǎng)。因公為激賓光束家是一點(diǎn)個(gè)小悉斑點(diǎn)叛，顆召?？祓囁偻ㄕ`過(guò)流束動(dòng)室竿，散皆射光放或熒后光持嫂續(xù)的捕時(shí)間全非常緩短-聚只有犬幾微稈秒。傅這些旗短暫撓的光著信號(hào)碌被收乏集、走過(guò)濾丑然后玩被檢旋測(cè)器梨轉(zhuǎn)換贈(zèng)成電矮信號(hào)凈。信號(hào)厘采集許系統(tǒng)激光48毅8n腔m，印63鼻3n各m，激發(fā)礦樣本令中的清顆粒遇或細(xì)擠胞產(chǎn)照生散垮射光嘉信號(hào)線和熒單光信叼號(hào)信號(hào)質(zhì)檢測(cè)頸組件灣-八被角形覺(jué)和三卻角形光學(xué)奸濾片將激受光激帖發(fā)后晚產(chǎn)生耽的散切射光而信號(hào)快和熒魔光信痕號(hào)引搜導(dǎo)至查相應(yīng)館的P反MTPM之T-鍋將光捷信號(hào)遵轉(zhuǎn)換游成電橫信號(hào)常用收熒光炸染料將的特及性熒光攝染料躬激引發(fā)波享長(zhǎng)刊(n掛m)務(wù)發(fā)射吧波長(zhǎng)柱(n什m)豬用羽途宵顏色FI姓TC吳4達(dá)88夸5斥25襯免頸疫熒燃光巷綠倒色PE園(R潤(rùn)D1杠)豈48衰8留57帶5株免疫排熒光宇橙色Pe盯rC揉P宵4芳88肚6弄70箭免疫凈熒光地深紅AP嶼C腔63頃3宜67知0敬免疫拒熒光括紅色PI吉48艘8秧62助0岔D培NA月染色橙紅EC為D醫(yī)4男88策6緊20媽免蟲(chóng)疫熒炎光顆橙筆紅Pe純Cy晉5陰48量8松67斜5五免疫擔(dān)熒光拖紅常用污熒光吧染料慨(4筆88貝nm干,6證33票nm免激發(fā)疏)Fl孤uo帥re編sc諒ei時(shí)n癥Is捉ot咬hi土oc里ya劣na誕te肅(稿FI浮TC賴)異硫巴氰酸奪熒光趨素Ph貞yc元oe啞ry擠th醫(yī)ri甜n季(P低E)藻紅荷素Al裕lo漸ph耐yc訂oc掘ya鄙ni考n泥(A懂PC辰)異藻成藍(lán)蛋且白Pe設(shè)ri疾di睡ni鄰n-列Ch鄉(xiāng)豐lo海ro貢ph針yl告l具Pr悄ot沿ei濁n色(P銹er磚CP起)多甲致藻黃吳素-謊葉綠鴨素蛋嫩白Ta螺nd畝em康D資ye性sPE絲式-T慘ex情as嫂R找ed異(頸EC茫D)PE劍-C巧y5泥(吊PC械5)PE系-C生y5評(píng).5箏(杯PC修5.半5)光(艦fu碧tu雖re好s)PE秧-C海y7貞(拒PC聽(tīng)7)占(煩fu套tu姜re傍s)FA賠CS省Ca坑nt截oⅡ信號(hào)殲檢測(cè)閉組件種類八角別形三角壟形構(gòu)成檢測(cè)資器濾片F(xiàn)A喇CS伐Ca港nt遙oⅡ信號(hào)倡檢測(cè)叨組件八角愉形檢納測(cè)組燃件FA殲CS澇Ca猴nt斃oⅡ信號(hào)氏檢測(cè)功組件三角呆形檢綱測(cè)組友件FA畏CS究Ca顆nt欣oⅡ信號(hào)抖檢測(cè)孔組件檢測(cè)扇器鞘液棵流中飲的顆榜粒通踩過(guò)激唇光束婦時(shí)會(huì)把產(chǎn)生貫光信另號(hào)，競(jìng)光信司號(hào)到撈達(dá)檢注測(cè)器提生成甚電脈酷沖信耗號(hào)，陣電子按系統(tǒng)援對(duì)電框脈沖毫信號(hào)認(rèn)進(jìn)一加步處槐理。FA虹CS脅Ca屢nt事o側(cè)兩類辨檢測(cè)柱器光電癥二極貿(mào)管：眾FS瞇C光電冬倍增揮管P玻MT辭：S訂SC所和熒詠光信哨號(hào)FA貞CS窮Ca數(shù)nt蹦oⅡ信號(hào)兔檢測(cè)繼組件光學(xué)占濾片皇用于睡調(diào)整摔光譜丘的分砌布。當(dāng)光燃子遇估到濾渾片時(shí)里，光膠子或梢通過(guò)許濾片給，或雁被濾委片吸億收，滋或被完濾片鋼反射辨。FA越CS詳Ca超nt裝oⅡ的濾鞋片長(zhǎng)通飽濾片章（L戰(zhàn)P）耀：長(zhǎng)逗于設(shè)耽定波平長(zhǎng)的鍬光通騾過(guò)，醒并反眼射短逝于設(shè)刮定波羞長(zhǎng)的俱光FA顯CS圓Ca溝nt近oⅡ的濾號(hào)片帶通才濾片利：允足許一檢定帶直寬波允長(zhǎng)的擱光通綿過(guò)。FA創(chuàng)CS料Ca哈nt午oⅡ的濾亞片F(xiàn)A郊CS酬Ca露nt帶oⅡ的濾銳片F(xiàn)A鑰CS稍Ca裂nt縱oⅡ電子鋼系統(tǒng)將與霉電脈遼沖信發(fā)號(hào)強(qiáng)弱盛相關(guān)貿(mào)的電嫌壓數(shù)字歉化有三攜類電扶脈沖泉信號(hào)高度脈信號(hào)坦H面積膚信號(hào)崖A寬度姐信號(hào)野W幾個(gè)殲概念信號(hào)線放大PM兄T將格光信捎號(hào)轉(zhuǎn)判換成懷電信點(diǎn)號(hào)，博調(diào)整紐奉PM片T的苗電壓具，信禁號(hào)強(qiáng)總度將帶隨之莖改變修。閾值信號(hào)當(dāng)放大榆過(guò)程認(rèn)會(huì)產(chǎn)確生不面需要寇的脈廳沖信娘號(hào)，包通常紙來(lái)自悄于碎緊片。益通過(guò)軌設(shè)定億某一宜信號(hào)有的最莖低強(qiáng)點(diǎn)度值嗎，可面將不蹈需要跳的脈夾沖信鼻號(hào)去介除，爆這一較設(shè)定奧值稱講為閾意值。幾個(gè)安概念顏色疼補(bǔ)償采用驢合適眨的方夠法校盾正熒膠光染敘料之臺(tái)間疊顯加所耀造成街的誤河差。芝在完陶成雙嗎色以委上熒石光標(biāo)棗記的略樣本車時(shí)，艇都需長(zhǎng)要作佛顏色鎮(zhèn)補(bǔ)償輩。顏色精補(bǔ)償FI攤TC恩主要等由F商IT騰C的挽檢測(cè)割器檢基測(cè)，穴但部懶分光絨也會(huì)宴進(jìn)入魄PE鄰檢測(cè)今器幾個(gè)概概念顏色踐補(bǔ)償帶通多濾片央接受咐的是火一定浙帶寬州波長(zhǎng)竄的熒朽光，觸故會(huì)嗓有干貧擾光歇同時(shí)摟被接樸收，唱然后即一同鴿進(jìn)入嫩PM煩T進(jìn)烘行光郵電轉(zhuǎn)凈換并緒放大趣。幾個(gè)怖概念顏色干補(bǔ)償通常皆干擾驅(qū)光占軟該染紫料所遠(yuǎn)發(fā)出妄熒光雕總量攀的X卷%補(bǔ)償謊模型類圖顏色酸補(bǔ)償驕判斷叔標(biāo)準(zhǔn)未作災(zāi)顏色鳴補(bǔ)償顏色刊補(bǔ)償紋判斷治標(biāo)準(zhǔn)補(bǔ)償斗后怎樣省進(jìn)行煤顏色瓣補(bǔ)償Co俘mp測(cè)B辦ea言ds用于凈流式諒細(xì)胞污儀多絡(luò)色分曲析時(shí)草調(diào)整串熒光鈴補(bǔ)償種。含依兩種綠微球術(shù)，抗雖小鼠避/大徒鼠免干疫球?qū)鞍祖湹臐{微球倆，可傍與小筋鼠/講大鼠賄免疫腦球蛋懸白的鏈結(jié)咱合；鑼及陰扒性對(duì)亦照微拾球，憐不與宜免疫使球蛋玻白結(jié)滋合。跟這兩囑種微惱球與間鼠源漂性的勝熒光碰抗體誓混合拉時(shí)，售顯示椅為清淺晰的蠟陽(yáng)性障群與泊陰性災(zāi)群（趣背景句熒光篇），挑可據(jù)頂此手吹動(dòng)調(diào)度整顏閥色補(bǔ)共償。An蘿ti紐奉-M勉ou奶se紗I考g補(bǔ)隊(duì)償微下球組漂合，疼產(chǎn)品勿號(hào)：裂55哈28蛋43An撫t(yī)i市-R齡at柳I航g補(bǔ)盾償微往球組永合，閘產(chǎn)品肺號(hào)：真55辮28某44An良ti筒-R襯at表/h揪am樣st旨er店Ig炕補(bǔ)償炒微球塑組合粉，產(chǎn)柳品號(hào)紡：5紐奉52塔84刷5儀器康運(yùn)作飲需要佛的質(zhì)帥控品儀器撕校準(zhǔn)頸需要鳴微球BD遵F厚AC霸S丸7-榮Co腥lo貢r(shí)犬Se型tu炭p鋸Be肺ad排s（Ca虧t抬No歐.3伏35吼77號(hào)5）補(bǔ)償冰調(diào)整摧需要欣微球BD枕C拳om林pB刊ea糟ds杰A膜nt叨i-絕Mo資us吳e倒Ig淡,(C足at裝N筒o.綢55植28吃43挖)BD絨C史om胳pB愁ea毫ds臣A渠nt錦i-戰(zhàn)Ra材t聞Ig蓮,(C銅at櫻N握o.滴55嘉28界44開(kāi))儀器綁清潔BD超F(xiàn)雕AC飯SR全in嶄se漂白原水流式擁細(xì)胞斃儀的佩應(yīng)用流式盞細(xì)胞揭儀可另以告炮訴我掃們什即么？細(xì)胞橫內(nèi)和觸細(xì)胞劈燕外發(fā)采生了洗什么癢事件處？流式夜細(xì)胞傲術(shù)的糖應(yīng)用細(xì)胞辱生理艷學(xué)研蝦究細(xì)胞肚膜表蕉面標(biāo)飯記胞內(nèi)槐標(biāo)記細(xì)胞咐周期楚分析凋亡真分析分選CB災(zāi)A細(xì)胞閥生理尖學(xué)研睛究細(xì)胞木相對(duì)殖大小色和顆相粒性胞內(nèi)素pH斗值檢告測(cè)Ca選++遍流動(dòng)候性檢企測(cè)膜電敬勢(shì)檢碌測(cè)細(xì)胞興活性起檢測(cè)細(xì)胞最活力蘋(píng)(增捧殖能囑力)砌的檢酒測(cè)細(xì)胞你生理尺學(xué)研古究細(xì)胞委相對(duì)捎大小賊和顆甩粒性負(fù)分析細(xì)胞染生理島學(xué)研秤究胞內(nèi)梁pH阿值的雁檢測(cè)細(xì)胞桶生理項(xiàng)學(xué)研護(hù)究Ca2+流動(dòng)痕性檢辯測(cè)Ca2+是非謎常重首要的北細(xì)胞訓(xùn)內(nèi)離糕子，溜在胞黨膜到黨胞漿轟的信濱號(hào)轉(zhuǎn)搏導(dǎo)中葉起重炭要的齒作用時(shí)。細(xì)最胞受險(xiǎn)到刺王激后驅(qū)，胞莫內(nèi)C飛a2+濃度塑會(huì)發(fā)糾生改痕變。最常禿用的副染料In模do布-1暴ex鍬ci界te沫d孩at弊U復(fù)VFl禿uo厚-3旁ex薦ci晉te銜d增at應(yīng)4幼88企nmFu厭ra滾r曬ed勸e政xc診it樹(shù)ed編a模t由48進(jìn)8n黃m細(xì)胞蹄生理霞學(xué)研余究Ca2+流動(dòng)倍性檢俯測(cè)細(xì)胞匠生理星學(xué)研蹄究細(xì)胞耍膜電兔位的閥改變超極顫化的垮細(xì)胞嫂攝取寒更多趴的染神料，周細(xì)胞辮總的獄熒光抬強(qiáng)度揚(yáng)增大津；細(xì)背胞去受極化敲時(shí)，標(biāo)染料航釋放甜到細(xì)歐胞外摔，總棄的熒巧光強(qiáng)殿度減謎少。染料傷和試徐劑Di嗓OC6(3傻)約Di環(huán)OC5(3者)揮D設(shè)iO遇C1(3抬)悉D猴iO確C1(5希)Va維li娃no抖my任ci市n陵Gr勇am望ic灑id辮in弱D懸CC徹CP細(xì)胞四生理拼學(xué)研獄究細(xì)胞草膜電論位的杏改變細(xì)胞先生理劃學(xué)研蠶究細(xì)胞烤活性鋒分析Fl卡uo罪re赴sc柏ei賴n暮Di纖ac樹(shù)et碌at月e進(jìn)清入活詞細(xì)胞富后,喂被胞伴內(nèi)酯門(mén)酶降界解,偵生成普熒光津底物羊.活缸細(xì)胞蝕會(huì)發(fā)想綠色療熒光細(xì)胞莊生理希學(xué)研冤究細(xì)胞桶活力胃分析CF改SE蘭(疲Ca所rb快ox泡yf賄lu拿or危es毀ce燭in肅S浩uc搏ci早ni序mi誕dy熟l徒es雞te霧r)是一蒙種親狡脂性餃染料闖，可絡(luò)被細(xì)胡胞膜調(diào)吸收旨。細(xì)崖胞標(biāo)猜記C秩FS疑E后車再誘凳導(dǎo)增兄殖，遷分裂汁后的斃細(xì)胞薦將含殼半量喂的C擠FS尚E，碼如此間可監(jiān)司控細(xì)劣胞分抵裂的綁數(shù)目擊。細(xì)胞右生理異學(xué)研赤究細(xì)胞離活力裂分析上圖丹中人臺(tái)T細(xì)脾胞被扭標(biāo)記享并刺孫激后闊，可箭跟蹤違六代權(quán)的分頸裂。核如果率配合祥使用碑Mo先df循it肌軟件啄分析鍛，可址確定千每代傳的細(xì)疏胞數(shù)駁。細(xì)胞菠膜表片面標(biāo)敵記CD柜2CD蝦4CD#=clusterdesignationnumber細(xì)胞錦內(nèi)標(biāo)茫記胞內(nèi)且多種皆肽類背已被夫成功黃標(biāo)記螺，包爐括病金毒顆棋粒、榨免疫打球蛋瞎白、裝雌激界素受紐奉體、貴細(xì)胞斷因子