實驗二細(xì)菌涂片的制備和染色鏡檢

關(guān)于實驗二細(xì)菌涂片的制備和染色鏡檢第1頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三目的要求：1、掌握細(xì)菌抹片的制備方法和常用染色方法。

2、認(rèn)識革蘭氏染色和抗酸性染色的反應(yīng)特性。實驗內(nèi)容：1、

細(xì)菌抹片的制備：玻片準(zhǔn)備：透明、潔凈、無油漬。抹片：液體材料、非液體材料、組織臟器材料的抹片方法講解、示范。干燥固定：火焰固定和化學(xué)固定的示范。講解其目的及注意事項。2、

細(xì)菌涂片的制備：講解并示范涂片、干燥、固定的方法。3、

細(xì)菌常用染色方法：革蘭氏染色法

實驗二：細(xì)菌涂片的制備和染色鏡檢

細(xì)菌抹片的制備第2頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三實驗二：細(xì)菌涂片的制備和染色鏡檢

第3頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三革蘭氏染色法：

1.制片：取待檢病料或細(xì)菌培養(yǎng)物常規(guī)抹（涂）片、干燥、固定。

2.初染：滴加結(jié)晶紫，染色1-2分鐘，水洗。

3.媒染：用碘液沖去殘水，并用碘液覆蓋約1分鐘，水洗。

4.脫色：用濾紙吸取或甩去載玻片上的殘水，將載玻片傾斜，在白色背景下，用滴管流加95%乙醇脫色，直至流出的乙醇無紫色時（20—30秒），立即水洗。

5.復(fù)染：用復(fù)紅液復(fù)染約2分鐘，水洗。

6.鏡檢：用濾紙吸水，干燥后，顯微鏡油鏡觀察。第4頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三革蘭氏染色法原理：

革蘭氏染色法將細(xì)菌分為G＋和G-，這由兩類細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和組成的不同而決定。用結(jié)晶紫初染后，所有的細(xì)菌都染上藍(lán)紫色。碘作為媒染劑能與結(jié)晶紫結(jié)合形成結(jié)晶紫-碘的復(fù)合物，增強(qiáng)了染料與菌體的結(jié)合力。用乙醇脫色處理時，兩類細(xì)菌的脫色效果是不同的。G＋細(xì)菌的細(xì)胞壁主要由肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成，且壁厚、類脂含量低，用乙醇脫色時使細(xì)胞壁脫水、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔徑縮小，通透性降低，使得結(jié)晶紫—碘的復(fù)合物不易被洗脫而保留在細(xì)胞內(nèi)。雖經(jīng)洗脫和復(fù)染仍然保持初染劑的藍(lán)紫色。G-細(xì)菌則不同，由于其細(xì)胞壁肽聚糖層較薄，類脂含量高，所以在脫色處理時，類脂被乙醇溶解，細(xì)胞壁的通透性增大，使結(jié)晶紫—碘的復(fù)合物比較容易被洗脫出來，用復(fù)染劑復(fù)染后，細(xì)胞被染上復(fù)染劑的顏色。

第5頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三G+菌與G-菌細(xì)胞壁的區(qū)別

細(xì)胞壁革蘭陽性菌革蘭陰性菌

強(qiáng)度較堅韌較疏松厚度21~80nm10~15nm

肽聚糖層可達(dá)50層1~2層肽聚糖量50%~80%5%~80%

糖類量約45%15%~20%

脂類量1%~4%11~22%

磷壁酸﹢﹣

外膜﹣﹢第6頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三革蘭氏染色法過程示意圖革蘭氏染色法動畫第7頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三革蘭陽性菌革蘭陰性菌第8頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三第9頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三革蘭氏染色法革蘭氏染色法動畫實驗報告：

1、細(xì)菌抹片或涂片革蘭氏染色的顯微鏡觀察結(jié)果。

2、革蘭氏染色法的具體程序和注意事項。第10頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三第11頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三涂片干燥固定染色1~2min水洗、吸干鏡檢細(xì)菌的單染色第12頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三細(xì)菌抗酸染色1.初染:用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅2-3滴，在火焰高處徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時離開，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，加熱3-5分鐘，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。

2.脫色:3%鹽酸酒精脫色30秒~1分鐘；用水沖洗。

3.復(fù)染：用堿性美蘭溶液復(fù)染1分鐘，水洗