探討酵母菌涂片半定量檢測在診斷真菌感染中的價值

探討酵母菌涂片半定量檢測在診斷真菌感染中的價值【摘要】目的探討酵母菌涂片半定量檢測在診斷真菌感染中的重要性。方法對不同稀釋度的酵母菌菌液分別進(jìn)行半定量涂片檢測，同時應(yīng)用CHR0magar念珠菌顯色培養(yǎng)基進(jìn)行半定量培養(yǎng)。結(jié)果當(dāng)酵母菌濃度10cfu／ml時，半定量涂片、培養(yǎng)與計數(shù)成正相關(guān)。結(jié)論酵母菌檢出數(shù)量與菌液濃度呈正相關(guān)，涂片半定量與培養(yǎng)有良好的相關(guān)性。直接涂片染色鏡檢對真菌感染的早期診斷能提供科學(xué)的依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】真菌感染；酵母菌涂片；半定量檢測

近20年來，隨著高效廣譜抗生素的廣泛應(yīng)用，侵襲性真菌感染的發(fā)生率呈上升趨勢［1］。在美國，1992～1993年與1980～1982年相比，念珠菌的發(fā)病率由/106增至/106。真菌感染患者的上升率占所有病原感染患者上升率的首位。在我國，近幾年真菌檢出率亦呈明顯上升趨勢。加之真菌感染的臨床表現(xiàn)缺乏特異性，早期診斷非常困難，患者大多為免疫力低下患者，所以病情嚴(yán)重，發(fā)展迅速，治療困難，病死率相當(dāng)高［2］。因此，需要檢驗工作人員盡快、準(zhǔn)確地檢出病原為臨床確診真菌感染提供科學(xué)的依據(jù)。目前，對真菌感染性疾病進(jìn)行病原學(xué)診斷的常用方法為直接涂片鏡檢和接種培養(yǎng)基分離培養(yǎng)。由于直接涂片染色鏡檢具有簡便和早期快速的特點，因此已在結(jié)核分枝桿菌等抗酸性細(xì)菌感染的早期初步診斷中廣泛應(yīng)用［3］。本文擬采用涂片直接鏡檢與分離培養(yǎng)法對含有不同濃度真菌的標(biāo)本進(jìn)行檢查，旨在探討涂片半定量對真菌感染標(biāo)本的診斷價值。

1材料與方法

材料菌種白色念珠菌為本室保存菌種。培養(yǎng)基為法國科瑪嘉培養(yǎng)基，按說明書配置傾注平板。日本OLYMPUS光學(xué)顯微鏡。BASO快速革蘭染液。

方法

改良牛鮑計數(shù)盤計數(shù)用無菌生理鹽水將白色念珠菌配成一定濃度的菌懸液，吸取菌液充滿計數(shù)盤計數(shù)區(qū)，在低倍顯微鏡下計數(shù)，使?jié)舛葹?05／ml，再加入生理鹽水稀釋為104、103、102、101／ml。

半定量涂片檢查于酒精燈火焰上燒灼載玻片以炭化污染菌，待冷；用接種環(huán)無菌操作，取不同稀釋度菌液一環(huán)分別涂片，每個稀釋度涂片5張，革蘭染色后鏡檢。按下述標(biāo)準(zhǔn)記錄半定量結(jié)果：全片未見為，≤2個／100視野為極少量，3～9個／100視野為少量，1～9個／10視野為，1～9個／視野為，10～99個／視野為，≥100個／視野為。

分離培養(yǎng)以無菌操作取不同稀釋度菌液一接種環(huán)，分別劃線接種于法國科瑪嘉培養(yǎng)基平板，每稀釋度菌液接種于兩個科瑪嘉平板，置溫箱35℃培養(yǎng)24h后計數(shù)菌落數(shù)。

2結(jié)果

涂片半定量結(jié)果見表1表1不同稀釋度菌液半定量涂片與培養(yǎng)的結(jié)果

培養(yǎng)與涂片的關(guān)系菌液濃度≥10cfu／ml時涂片鏡檢能獲得陽性結(jié)果，此時分離培養(yǎng)亦獲得陽性結(jié)果。

五張涂片結(jié)果通過每稀釋度菌液五張涂片結(jié)果發(fā)現(xiàn)，每次結(jié)果不完全一致。

3討論

由表1可知，涂片半定量相當(dāng)于菌液濃度104～105cfu／ml，相當(dāng)于菌液濃度為103～104cfu／ml，相當(dāng)于菌液濃度為102～103cfu／ml，相當(dāng)于菌液濃度為101～102cfu／ml，當(dāng)真菌濃度≥10cfu／ml時，半定量涂片、培養(yǎng)與計數(shù)呈正相關(guān)，并有良好的相關(guān)性。

直接涂片鏡檢具有快速、簡便、經(jīng)濟、實用等特點，易于推廣，且可幫助確定真菌的臨床意義，指導(dǎo)標(biāo)本的正確采集和培養(yǎng)方法的選擇［2］。這就彌補了培養(yǎng)法易受污染，并且出結(jié)果時間長等不足，符合快速診斷真菌感染的要求。

由于正常人口腔、消化道及泌尿道中存在酵母菌，如果涂片看到真菌，不一定是感染菌，應(yīng)警惕定植或過路菌。涂片只能初步判斷是否存在真菌，因此報告結(jié)果時應(yīng)該半定量，給臨床醫(yī)師提供一個量的概念，以便醫(yī)師通過涂片就能初步判斷是感染還是定植，這樣可以做到早期診斷、早期治療。對呼吸道標(biāo)本，在保證標(biāo)本合格以及臨床癥狀、體征和醫(yī)學(xué)影像檢查不能除外呼吸道真菌感染的前提下，直接涂片鏡檢≥少量即可確診［5］。所以直接涂片染色鏡檢時應(yīng)該報告真菌的量，即做到半定量。

為了提高直接涂片鏡檢的陽性率，應(yīng)該正確采集標(biāo)本，涂片應(yīng)取標(biāo)本中的異常部位，液體標(biāo)本離心后取沉渣涂片［4］。鏡檢時應(yīng)低倍鏡下觀察全片以免漏檢。一次取材、一張涂片的檢出率僅為55％，即通常所做的涂片方法有45％的漏檢率，用三張涂片的檢出率為75％，因此要增加取材次數(shù)，每次多張涂片鏡檢［4］。臨床醫(yī)師不應(yīng)因一次涂片檢測陰性而排除診斷，應(yīng)該多張涂片多次送檢。如果在抗酸染色等其他染色方法時觀察到真菌應(yīng)報告臨床，提請醫(yī)生注意。

綜上所述，由于酵母菌半定量涂片直接、客觀、快速、影響因素少等特點，可以為臨床快速、早期診斷真菌感染提供科學(xué)依據(jù)。酵母菌涂片應(yīng)做到半定量報告臨床，以便幫助臨床醫(yī)生迅速判斷有無真菌感染，從而采取適當(dāng)?shù)闹委煼椒?，來挽救病人生命，減輕病人痛苦，節(jié)省經(jīng)濟開支。

【參考文獻(xiàn)】

1劉偉，李若瑜.抗真菌藥物敏感性試驗在真菌感染防治中的作用.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2005，28：349-351.

2盧先雷.臨床真菌檢驗方法的選擇和組合.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2004，27：201-203.

3朱以勇，王和.感染性標(biāo)本涂片鏡檢與分離培養(yǎng)相關(guān)性的研究.貴州