瀘州山銀花中綠原酸和總綠原酸的含量測定

瀘州山銀花中綠原酸和總綠原酸的含量測定【摘要】目的建立瀘州山銀花中綠原酸和總綠原酸的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法測定綠原酸，并采用UV法測定總綠原酸。色譜柱為DikmaKromasilC18柱；流動相為乙腈-％磷酸溶液；流速ml·min-1；檢測波長326nm；柱溫30℃；進樣量10μl。結果綠原酸在～μg范圍內具有良好的線性關系，平均回收率為％，RSD為％。結論該方法操作簡便、快速、有效、靈敏、準確、具有良好的重復性和回收率，可作為山銀花中綠原酸和總綠原酸的含量測定方法。

【關鍵詞】高效液相色譜山銀花總綠原酸高效液相色譜

Abstract：ObjectiveToestablishthemethodforcontentdeterminationofChlorogenicAcidandtotalChlorogenicAcidinFlosLonicerae.MethodsThecontentofchlorogenicacidwasdetectedbyHPLC，andtotalchlorogenicacidwasdetectedbyUV.TheseparationwascarriedoutonaDikmaKromasilC18column．Themobilephasewas%phosphoricacid，theflowratewasml·min-1，thedetectionwavelengthwassetat326nm，thecolumntemperaturewas30℃andthesamplesizewas10μl．ResultsThecalibrationcurveshowedgoodlinearityovertherangeof～μg.Theaveragerecoverywas％withRSDwas％.ConclusionThismethodissimple，rapid，efficient，sensitive，accurateandwithgoodrepeatabilityandrecovery，itcanbeusedasaquantitativeanalysismethodforthispreparation．

Keywords:FlosLonicerae；Chlorogenicacid；Totalchlorogenicacid；HPLC

山銀花為忍冬科植物灰氈毛忍冬LoniceramacranthoidesHand.-Mazz.，紅腺忍冬LonicerahypoglaucaMiq.或華南忍冬LoniceraconfuseDC.的干燥花蕾或帶初開的花，具有抗菌消炎、清熱解毒、涼散風熱的功效，主要用于治療癰腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風熱感冒、溫熱發(fā)病等疾?。?］。其主要有效成分為有機酸類。綠原酸含量高低是山銀花內在質量的標志，與藥用價值和臨床療效密切相關。山銀花分布廣泛，而產地不同，綠原酸的含量存在著較大的差異［2~3］。四川瀘州山銀花作為川銀花的一個重要來源，其綠原酸含量測定尚未見報道。為全面了解本地區(qū)山銀花綠原酸的變化及差異，我們采用HPLC首次對瀘州四縣不同產區(qū)采摘的山銀花中所含的綠原酸和總綠原酸進行了含量測定，為開發(fā)利用本地區(qū)的山銀花提供科學依據。

1儀器與試藥1儀器戴安高效液相色譜儀；瑞士Precisa電子天平；CQX25-06超聲波清洗器。2對照品綠原酸，中國藥品生物制品檢定所提供。在選定色譜條件分離后按面積歸一化法計算含量為%，符合含量限度要求，故以含量為100%計算。3試藥甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為重蒸餾水。4樣品山銀花，10批，分別收購于瀘州納溪、敘永、合江和古藺，經作者鑒定均為灰氈毛忍冬LoniceramacranthoidesHand.-Mazz.。

2方法與結果

綠原酸的含量測定

色譜條件色譜柱為DikmaKromasilC18，流動相為乙腈-％磷酸溶液，流速ml/min，柱溫30℃，檢測波長326nm。

對照品溶液的制備取經五氧化二磷減壓干燥至恒重的綠原酸對照品mg，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的制備取山銀花適量，50℃烘約5h，粉碎為細粉。取約g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理45min，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，精密取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

系統(tǒng)適應性實驗分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結果見圖1。從圖1中可見，綠原酸的保留時間約為10min，綠原酸峰與其前后色譜峰的分離度分別為，，均大于，拖尾因子為，理論塔板數以綠原酸峰計為15417，綠原酸峰純度因子為1000。

圖1山銀花HPLC色譜圖

線性關系考察分別精密吸取綠原酸對照品溶液2，4，6，8，10，15，20μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積A對進樣量C進行回歸，得標準曲線方程：A＝2C+5，r＝9。結果表明，綠原酸在～μg范圍內，峰面積與進樣量有良好的線性關系。

精密度實驗精密吸取同一供試品溶液10μl，按上述色譜條件連續(xù)進樣5次，測得綠原酸峰面積RSD為％。表明儀器精密度良好。

重復性實驗取同一批山銀花，按供試品溶液制備方法制得5份供試品溶液，分別精密進樣測定，測得綠原酸的平均含量為2％，RSD為％。表明本方法重復性良好。

穩(wěn)定性實驗取本品供試品溶液，分別于制備后0，2，4，6，8，10，12，24，36h精密進樣10μl，測得綠原酸的峰面積RSD為％，表明供試品溶液在36h內穩(wěn)定。

加樣回收實驗精密稱取已知含量的山銀花細粉9份，每份約g，分成3組，每組2份，分別精密添加綠原酸對照品溶液3，4，5ml，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，并計算回收率。結果見表1。實驗結果表明，本法具有良好的回收率。

表1加樣回收率實驗測定結果

樣品測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定，紀錄色譜圖，以外標法計算樣品中綠原酸的含量。結果見表2。

總綠原酸的含量測定取山銀花粉末g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理45min，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密取續(xù)濾液ml，置50ml棕色量瓶中，加mol·ml-1鹽酸液稀釋至刻度，搖勻，用mol·ml-1鹽酸液作空白，照分光光度法，在324nm波長處測定吸收度，按綠原酸的吸收系數為526計算［4］，即得。瀘州山銀花中總綠原酸的測定結果見表2。

表2瀘州山銀花中綠原酸含量測定結果

3討論

實驗中針對含量測定配制供試品溶液的不同提取方法，不同提取溶劑，不同溶劑體積及不同提取時間分別考察。結果以50ml50％甲醇超聲提取45min含量最高，雜質峰較少。

采用二極管陣列檢測器在190～380nm范圍內分別掃描綠原酸對照品、供試品溶液中綠原酸峰的紫外吸收，對照品和供試品中的綠原酸的最大吸收峰分別為，nm，故選用326nm作為測定波長。

實驗結果表明瀘州不同產區(qū)所產山銀花，由于綠原酸生長環(huán)境、氣候條件、采收時間、加工方法等因素的不同，造成其綠原酸和總綠原酸含量相差較大。但瀘州地區(qū)山銀花中綠原酸含量總體較其他地區(qū)偏高，特別是古藺山區(qū)所產山銀花，綠原酸最高含量達％，總綠原酸最高含量達％。而文獻［2］報道的湖南懷化、貴州、河北、廣西、山東、河南所產山銀花中綠原酸的含量分別為：％，％，％，％，％，％。文獻［3］報道湖南隆回、廣東連縣、廣西桂林、貴州同仁、四川中江、重慶秀山、江西萍鄉(xiāng)所產山銀花中綠原酸的含量分別為：％，％，％，％，％，％，％?？梢姽盘A銀花作為川銀花的代表，一直以來備受生產廠家的青睞，有其一定科學依據。

研究表明綠原酸和異綠原酸均有抑菌、抗病毒、解熱、抗炎等作用［5］，且近來研究發(fā)現二咖啡?？崴嵘性谥委熞腋渭鞍滩∩嫌酗@著療效［6］，故山銀花藥材，僅以綠原酸含量權衡其質量并不科學，應加上異綠原酸含量或總綠原酸的含量作為評價山銀花藥材質量的依據。

【參考文獻】

［1］國家藥典委員會，中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學工業(yè)出版社，2005：21.

［2］舒勝輝.不同產地山銀花有效成分綠原酸含量的比較研究［J］.中醫(yī)藥導報，2006，12(2)：74.

［3］曹冬紅，張賀文，楊科，等.高效液