木瓜汁、木瓜酒中微生物的控制和乳酸菌活性的抑制

ADDINCNKISM.UserStyle本科生畢業(yè)論文題目：木瓜汁、木瓜酒中微生物的控制和乳酸菌活性的抑制目錄TOC\o"1-1"\h\z\u\t"標(biāo)題2,1,標(biāo)題3,1,標(biāo)題4,1,標(biāo)題5,1,標(biāo)題6,1,標(biāo)題7,1"摘要： 酸木瓜汁、酒微生物的控制方法和乳酸菌活性的抑制李伍景（楚雄師范學(xué)院資源環(huán)境與化學(xué)學(xué)院云南楚雄675000）摘要：要得到高品質(zhì)的木瓜酒，需要對(duì)木瓜酒的各個(gè)環(huán)節(jié)微生物污染來(lái)源用SO2進(jìn)行殺菌抑菌處理，降低生產(chǎn)過(guò)程中微生物的數(shù)量，從而保證產(chǎn)品的質(zhì)量。乳酸菌可以使木瓜酒的酸度變得柔和，給木瓜酒增加獨(dú)特的風(fēng)味，可以促進(jìn)人體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，但如果不及時(shí)的抑制乳酸菌的生長(zhǎng)繁殖，就會(huì)造成木瓜酒產(chǎn)品的經(jīng)濟(jì)損失。本文通過(guò)加入純化乳酸菌再接種到消毒滅菌后的木瓜酒中，研究乳酸菌在木瓜酒中不同溫度，pH，SO2條件下的生長(zhǎng)代謝情況，通過(guò)乳酸菌的生長(zhǎng)代謝情況來(lái)判斷乳酸菌的活性，找到不適宜乳酸菌生長(zhǎng)繁殖的條件，并且提出相關(guān)的處理措施。關(guān)鍵詞：木瓜；乳酸菌；木瓜酒；微生物；污染；控制MethodforcontrollingmicroorganismsofsourpapayajuiceandpapayawineandinhibitionoflacticacidbacteriaactivityLiWu-jing(CollegeofResources,EnvironmentandChemistry,ChuxiongNormalUniversity,Chuxiong,Yunnan675000,China)Keywords:papaya;lacticacidbacteria;papayawine;microorganisms;pollution;control0引言近年來(lái)，品中的微生物安全事件層出不窮，微生物對(duì)人體的危害非常突出。全世界每年由微生物污染而損失的各類食品逐年增加,我國(guó)每年發(fā)生微生物性的食物中毒事件也屢見(jiàn)不鮮。極大程度上危害了人們的健康，同時(shí)也影響著經(jīng)濟(jì)的正常發(fā)展,微生物污染的出現(xiàn)降低食品食用價(jià)值，在危害食品安全的眾多因素之中占據(jù)了領(lǐng)導(dǎo)者的地位，控制食品中的微生物數(shù)量，從而保證食品安全已經(jīng)成為當(dāng)下的燃眉之急。乳酸菌是一類對(duì)人體有益的益生菌，乳酸菌可以促進(jìn)人體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收、生長(zhǎng)發(fā)育、改善消化功能。如果出現(xiàn)腹脹、腹瀉、便秘等胃腸功能紊亂癥狀時(shí)，可以適當(dāng)服用乳酸菌，改善胃腸功能的紊亂，增加腸道的活性，促進(jìn)人體的健康發(fā)展。因此,做好木瓜酒中的微生物控制和乳酸菌活性的抑制,對(duì)于減少經(jīng)濟(jì)損失，保證食品安全、促進(jìn)人體健康發(fā)展有至關(guān)重要的決定權(quán)。酸木瓜是云南的一種特產(chǎn)水果，外表為金黃色，它散發(fā)出誘人的果香，顏色越黃則香氣越濃郁，有消食的作用。所含的番木瓜堿具有抗菌和抗腫瘤的功效。其次，酸木瓜里面的齊墩果是一種具有護(hù)肝、抗炎和抑菌，降低血脂、軟化血管功能的物質(zhì)ADDINCNKISM.Ref.{86605247D9864c47800F5D9442676822}[1]。木瓜酒病害由各個(gè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)中與微生物的接觸導(dǎo)致微生物大量繁殖而引起，木瓜酒的微生物污染來(lái)源主要是原料和操作人員自身、設(shè)備管道、釀酒容器、過(guò)濾設(shè)備等各工序所需設(shè)備ADDINCNKISM.Ref.{B8D3A871B71B44998C731ABB6042BBD8}[2]。在木瓜酒釀造過(guò)程中，適量的微生物可以增強(qiáng)木瓜酒的口感和風(fēng)味，但如果在木瓜酒釀造過(guò)程中沒(méi)有控制好微生物的數(shù)量，微生物與液體原料之間發(fā)生一系列的理化反應(yīng)，改變了酒體原本的組成成分，導(dǎo)致整個(gè)木瓜酒質(zhì)量受損，品質(zhì)病變，使酒品質(zhì)降低，造成經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)?duì)人們的生命安全造成威脅ADDINCNKISM.Ref.{239B469DA31C43a59F2AB77057814674}[3]。微生物污染的時(shí)期大概可以分為發(fā)酵前中后三個(gè)時(shí)期。因此，我們需要對(duì)生產(chǎn)中的三個(gè)階段進(jìn)行全方位的用SO2進(jìn)行消毒處理ADDINCNKISM.Ref.{019CEA6D37AA494c947280AC7BF72B54}[4]，做到在木瓜酒制作的各個(gè)過(guò)程中對(duì)微生物的污染的控制，對(duì)各發(fā)生接觸環(huán)節(jié)中的設(shè)備以及人員做好殺菌消毒處理，將微生物的數(shù)量縮小到可控的范圍之內(nèi)，從而保證產(chǎn)品的質(zhì)量控制防護(hù)措施，保證木瓜酒的品質(zhì)。為了保證木瓜酒的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和食用安全,需要我們預(yù)防和控制各種微生物對(duì)木瓜酒的污染和腐敗，同時(shí)控制乳酸菌活性，讓乳酸菌作為益生菌保留在木瓜酒里面，促進(jìn)人體腸道的安全，促進(jìn)人體的生長(zhǎng)發(fā)育，同時(shí)保證人體健康。適量的乳酸菌可以使木瓜酒的酸度變得柔和，給木瓜酒增加獨(dú)特的風(fēng)味，同時(shí)促進(jìn)人體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收、生長(zhǎng)發(fā)育、改善消化功能，促進(jìn)人體健康發(fā)展。但如果不及時(shí)的抑制乳酸菌的生長(zhǎng)繁殖，控制乳酸菌的活性，就會(huì)造成木瓜酒產(chǎn)品的敗壞，造成經(jīng)濟(jì)損失，因此我們需要研究它在不同的pH、SO2濃度、溫度下的活性，對(duì)其進(jìn)行活性抑制，保證木瓜酒的品質(zhì)ADDINCNKISM.Ref.{9314A4E534994627961477B77D726F5A}[5]。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1實(shí)驗(yàn)原料酸木瓜，產(chǎn)自云南臨滄。1.1.2實(shí)驗(yàn)試劑表SEQ表\*ARABIC1實(shí)驗(yàn)試劑及濃度Table1Experimentalreagentsandconcentrations試劑名稱濃度氫氧化鈉溶液0.05mol/L鹽酸溶液1+1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液2.5g/L次甲基藍(lán)指示液10g/L酚酞指示液10g/L斐林A液-斐林B液-KCl緩沖液ph1.0CH3CO2Na?3H2O緩沖液ph4.5牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基-1.1.3實(shí)驗(yàn)設(shè)備表SEQ表\*ARABIC2實(shí)驗(yàn)儀器Table2Experimentalinstruments儀器名稱廠家型號(hào)生化培養(yǎng)箱上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠SPX-100電熱恒溫水浴鍋上海一橫科學(xué)儀器有限公司HWS-12立式壓力蒸汽滅菌器上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司YXQ-70A電子天平舜宇恒平儀器JA1003九陽(yáng)智能原汁機(jī)九陽(yáng)JYZ-V18A電熱鼓干燥箱上海一橫科學(xué)儀器有限公司紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上海元析儀器有限公司UV-5500酸度計(jì)賽多利科學(xué)儀器（北京）有限公司PB-10BSC系列生物安全柜北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1木瓜汁、木瓜酒的制備木瓜酒的制作工藝木瓜汁樣品制作：選用成熟度良好，沒(méi)有病蟲害，形態(tài)均勻的木瓜，沖洗2~3次，再用蒸餾水清洗。對(duì)木瓜進(jìn)行去籽、粉碎，然后進(jìn)行壓榨過(guò)濾，放至冰箱冷藏。木瓜酒的制備：選用成熟度良好，無(wú)病蟲害，形態(tài)均勻的木瓜，沖洗2~3次，再用蒸餾水清洗。對(duì)木瓜進(jìn)行去籽、粉碎，然后進(jìn)行壓榨過(guò)濾，得到木瓜汁存在酸高糖度低兩大缺陷，需要我們進(jìn)行降酸和加糖處理，將得到的木瓜汁進(jìn)行發(fā)酵制備木瓜酒。(1)將木瓜清洗消毒之后切碎榨汁。(2)加入果膠酶進(jìn)行果汁澄清處理24h。(3)加入18g/L的碳酸鈣進(jìn)行降酸處理。(4)加入蔗糖調(diào)節(jié)木瓜汁的糖分。(5)活化酵母加入到木瓜汁里面進(jìn)行AF,監(jiān)測(cè)發(fā)酵液比重的變化。1.2.2酸木瓜汁、酒微生物的控制方法的研究發(fā)酵前微生物來(lái)源：木瓜自身表皮由于暴露于空氣之中，其表面附著著豐富的微生物，運(yùn)輸中腐壞的木瓜為微生物的生存提供了必須的營(yíng)養(yǎng)成分，讓微生物得以滋生，造成微生物的嚴(yán)重污染，在收到木瓜的第一時(shí)間，需要對(duì)木瓜進(jìn)行清洗并用濃度為6%的亞硫酸溶液進(jìn)行消毒。同時(shí)，由于操作者的手暴露于空氣中，在去籽、破碎、壓榨、過(guò)濾、取汁的過(guò)程中需要觸碰多種設(shè)備及工具，在接觸的過(guò)程中造成微生物的播污染，所以要保證在各個(gè)接觸發(fā)生的環(huán)節(jié)中進(jìn)行嚴(yán)格的消毒處理ADDINCNKISM.Ref.{52C0DC40DB3842cfB6D2B389F12CA42B}[6]。另一方面，榨汁機(jī)存在比較難清洗的角落，且常年處于閑置狀態(tài)，容易滋生大量的微生物，在榨汁的過(guò)程中木瓜與其接觸會(huì)導(dǎo)致微生物的污染，所以在生產(chǎn)過(guò)程中，我們需要對(duì)原料，操作人員雙手以及榨汁過(guò)程中所用到的榨汁機(jī)和容器進(jìn)行2~3次清洗再進(jìn)行嚴(yán)格的消毒處理。將木瓜汁分兩組制備，一是在對(duì)設(shè)備、原料行消毒之后進(jìn)行制備，二是在沒(méi)有進(jìn)行任何消毒處理的情況下進(jìn)行制備，各取五份樣品在25℃恒溫箱中進(jìn)行微生物的培養(yǎng)48h，以生理鹽水為稀釋液，將樣品進(jìn)行梯度稀釋，將1mL的樣品加入到9mL的生理鹽水當(dāng)中，搖勻，再?gòu)闹形?mL稀釋液加入到9mL生理鹽水中,依次進(jìn)行梯度稀釋，吸取10-5、10-6、10-7的稀釋液1mL于滅菌處理后的培養(yǎng)皿中進(jìn)行涂布平板，25℃的恒溫箱中培養(yǎng)3天，經(jīng)培養(yǎng)后，由單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，即可計(jì)算出樣品中的含菌數(shù)。計(jì)算其中的活菌數(shù)量ADDINCNKISM.Ref.{459888BE8F364645852B26A6D1532B94}[7]，對(duì)比二組微生物數(shù)量的差異。如果經(jīng)消毒后的微生物數(shù)量明顯低于未經(jīng)消毒的微生物數(shù)量，則說(shuō)明該方法有效可行。發(fā)酵中微生物來(lái)源：發(fā)酵罐罐體存在微生物及其孢子，會(huì)進(jìn)入到木瓜汁里進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖，就會(huì)使木瓜酒微生物含量上升ADDINCNKISM.Ref.{E9502685870241b4A09F7B7C4EF4742C}[8]。同樣的操作人員自身的微生物以及發(fā)酵設(shè)備上的殘留物引起的微生物生長(zhǎng)繁殖都會(huì)引起發(fā)酵階段微生物數(shù)量的上升ADDINCNKISM.Ref.{350BDB9F6945438cAF82CD17BD7336AD}[9]。這就需要我們嚴(yán)格的對(duì)發(fā)酵罐以及操作人員雙手進(jìn)行消毒。將消毒處理后制成的木瓜汁55～60℃殺菌后分兩組發(fā)酵，一是對(duì)發(fā)酵罐進(jìn)行徹底消毒之后再加入木瓜汁進(jìn)行發(fā)酵，二是加入到不進(jìn)行消毒處理的發(fā)酵罐里面進(jìn)行發(fā)酵，各取3份樣品在25℃恒溫箱中進(jìn)行微生物的培養(yǎng)48h，以無(wú)菌水為稀釋液，將樣品進(jìn)行梯度稀釋，將1mL的樣品加入到9mL的無(wú)菌水當(dāng)中，搖勻，再?gòu)闹形?mL稀釋液加入到9mL無(wú)菌水中,依次進(jìn)行梯度稀釋，吸取10-5、10-6、10-7的稀釋液1mL于滅菌處理后的培養(yǎng)皿中進(jìn)行涂布平板，于25℃的恒溫箱中培養(yǎng)3天，經(jīng)培養(yǎng)后，由單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，計(jì)算其中的活菌數(shù)量，對(duì)比二組微生物數(shù)量的差異發(fā)酵后微生物來(lái)源：發(fā)酵后的微生物來(lái)源主要來(lái)源于儲(chǔ)藏設(shè)備及其包裝攜帶的雜菌，同時(shí)要密切關(guān)注設(shè)備有無(wú)泄露現(xiàn)象，運(yùn)輸管道中的雜菌在酒體的運(yùn)輸過(guò)程中會(huì)摻雜到其中，該過(guò)程中的操作要嚴(yán)格執(zhí)行，對(duì)運(yùn)輸管道，儲(chǔ)存容器和操作人員的雙手要嚴(yán)格消毒ADDINCNKISM.Ref.{DFDFC5AF712C448895066DED8F3DBBA9}[10]。將中對(duì)發(fā)酵罐等進(jìn)行消毒處理制成的木瓜酒55～60℃殺菌后分兩組儲(chǔ)藏，一是對(duì)運(yùn)輸管道、操作人員、儲(chǔ)藏罐進(jìn)行徹底消毒之后再加入木瓜酒，二是加入到不進(jìn)行消毒處理的儲(chǔ)藏罐里面進(jìn)行，放置三天后，各取3份樣品在25℃下培養(yǎng)48h，以無(wú)菌水為稀釋液，將樣品進(jìn)行梯度稀釋，將1mL的樣品加入到9mL的無(wú)菌水當(dāng)中，搖勻，再?gòu)闹形?mL稀釋液加入到9mL無(wú)菌水中,依次進(jìn)行梯度稀釋，吸取10-5、10-6、10-7的稀釋液1mL于滅菌處理后的培養(yǎng)皿中進(jìn)行涂布平板，25℃的恒溫箱中培養(yǎng)3天，經(jīng)培養(yǎng)后，由單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，計(jì)算其中的活菌數(shù)量，對(duì)比二組微生物數(shù)量的差異。1.2.3乳酸菌活性的研究將發(fā)酵結(jié)束的木瓜酒接種乳酸菌，進(jìn)行蘋果酸—乳酸發(fā)酵，檢測(cè)不同發(fā)酵環(huán)境下乳酸菌的活性。溫度對(duì)乳酸菌活性的影響參照熊素玉等人ADDINCNKISM.Ref.{DD3B3BB57D93409eB33870988D8B8916}[11]方法，略作修改。將木瓜酒加熱到55～60℃，可以殺死部分菌，進(jìn)行滅菌處理后，把純化接種到木瓜酒中，攪拌均勻，均勻的分成5組，用保鮮膜密封，分別于25℃、30℃、35℃、40℃、45℃恒溫水浴鍋中培養(yǎng)5天ADDINCNKISM.Ref.{86C4EACD4FE3479c9A5BE267F4937FA3}[12]。用的方法將木瓜酒進(jìn)行梯度稀釋，取10-5、10-6、10-7的稀釋液進(jìn)行涂布平板法ADDINCNKISM.Ref.{E507628186854ab09FDA5B1BF6F78753}[12]，計(jì)算不同溫度下培養(yǎng)的乳酸菌數(shù)量待微生物培養(yǎng)完成后，用1.2.4中的方法對(duì)各溫度培養(yǎng)的木瓜酒進(jìn)行總糖，菌落總數(shù)，滴定酸等各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)，反復(fù)測(cè)定三次取平均值，實(shí)驗(yàn)之前需要先做小試。pH對(duì)乳酸菌活性的影響將木瓜酒進(jìn)行滅菌處理后，把純化乳酸菌接種到木瓜酒中，攪拌均勻，均勻的分成5組，分別調(diào)整pH為2.5、3.0、3.5、4.0、4.5，用保鮮膜密封，在25℃的恒溫水浴鍋中培養(yǎng)5天ADDINCNKISM.Ref.{0D7E317EA46043a4958F354E732C1812}[13]，用的方法將木瓜酒進(jìn)行梯度稀釋，取10-5、10-6、10-7的稀釋液進(jìn)行涂布平板法，計(jì)算不同ph下培養(yǎng)的乳酸菌數(shù)量。待微生物培養(yǎng)完成后，用1.2.4中的方法對(duì)各溫度培養(yǎng)的木瓜酒進(jìn)行還原糖和總糖，菌落總數(shù)，滴定酸的指標(biāo)檢測(cè)，反復(fù)測(cè)定三次取平均值，實(shí)驗(yàn)之前需要先做小試。不同SO2濃度對(duì)乳酸菌的影響將木瓜酒進(jìn)行滅菌處理后，把純化乳酸菌接種到木瓜酒中，攪拌均勻，均勻的分成5組，分別加入濃度為20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、60mg/L的SO2，用保鮮膜密封，在25℃的恒溫水浴鍋中培養(yǎng)5天ADDINCNKISM.Ref.{85718A556889472bA8087D3DE9885C2B}[14]，用的方法將木瓜酒進(jìn)行梯度稀釋，取10-5、10-6、10-7的稀釋液進(jìn)行涂布平板法，計(jì)算不同SO2濃度下培養(yǎng)的乳酸菌數(shù)量。待微生物培養(yǎng)完成后，用1.2.4中的方法對(duì)各溫度培養(yǎng)的木瓜酒進(jìn)行還原糖和總糖，菌落總數(shù)，滴定酸的指標(biāo)檢測(cè)，反復(fù)測(cè)定三次取平均值，實(shí)驗(yàn)之前需要先做小試。正交實(shí)驗(yàn)，得出最優(yōu)的抑制方案組合正交水平表編號(hào)溫度(℃)pHSO2濃度(mg/L)結(jié)果11112122313341445212622172348243931310324113311234213414144232結(jié)果與分析2.1不同處理對(duì)發(fā)酵前木瓜汁微生物數(shù)量及種類影響表SEQ表\*ARABIC3木瓜汁發(fā)酵前微生物數(shù)量Table3Numberofmicroorganismsbeforefermentationofpapayajuice微生物數(shù)量微生物種類123平均值123平均值消毒25431121未消毒101212114454圖SEQ圖\*ARABIC1發(fā)酵前微生物數(shù)量及種類對(duì)比Figure1Comparisonofthenumberandtypesofmicroorganismsbeforefermentation取木瓜汁進(jìn)行微生物培養(yǎng)，在三組平行實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過(guò)嚴(yán)格消毒的這組微生物數(shù)量都低于未經(jīng)過(guò)消毒處理的。其次，微生物種類也存在一定的差距，經(jīng)過(guò)消毒組的三個(gè)平行實(shí)驗(yàn)微生物種類都低于未經(jīng)過(guò)消毒處理的。說(shuō)明對(duì)榨汁機(jī)以及原料的消毒處理可以從源頭上很好的抑制木瓜汁中的微生物數(shù)量。2.2不同處理對(duì)發(fā)酵液微生物數(shù)量及種類影響表SEQ表\*ARABIC4發(fā)酵中微生物數(shù)量及種類Table4Numberandtypesofmicroorganismsinfermentation微生物數(shù)量微生物種類123平均值123平均值消毒1902132092042222未消毒8179058968734555圖SEQ圖\*ARABIC2發(fā)酵中微生物數(shù)量及種類對(duì)比Figure.2Comparisonofthenumberandtypesofmicroorganismsinfermentation取發(fā)酵液進(jìn)行微生物培養(yǎng)，在三組平行實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過(guò)嚴(yán)格消毒的這組微生物數(shù)量都低于未經(jīng)過(guò)消毒處理的。在微生物種類方面，經(jīng)過(guò)消毒組的三個(gè)平行實(shí)驗(yàn)微生物種類都低于未經(jīng)過(guò)消毒處理的。說(shuō)明對(duì)發(fā)酵罐以及操作人員雙手的消毒處理可以很好的抑制發(fā)酵液中的微生物數(shù)量。2.3不同處理對(duì)瓶?jī)?chǔ)微生物數(shù)量及種類影響表SEQ表\*ARABIC5瓶?jī)?chǔ)后微生物數(shù)量及種類Table5Numberandtypesofmicroorganismsafterstorage微生物數(shù)量微生物種類123平均值123平均值消毒2402232362332222未消毒5415575635534454圖SEQ圖\*ARABIC3瓶?jī)?chǔ)后微生物數(shù)量及種類對(duì)比Figure3Comparisonofthenumberandtypesofmicroorganismsafterstorage取瓶?jī)?chǔ)后的酒液進(jìn)行微生物培養(yǎng)，在三組平行實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過(guò)嚴(yán)格消毒的這組微生物數(shù)量都低于未經(jīng)過(guò)消毒處理的。微生物種類也一樣，經(jīng)過(guò)消毒組的三個(gè)平行實(shí)驗(yàn)微生物種類都低于未經(jīng)過(guò)消毒處理的。說(shuō)明對(duì)儲(chǔ)存罐以及罐裝管道、操作人員雙手的消毒處理可以很好的抑制酒液中的微生物數(shù)量。2.4三個(gè)階段中微生物數(shù)量及種類影響圖SEQ圖\*ARABIC4三個(gè)階段微生物數(shù)量平均值及種類平均值對(duì)比Figure4Comparisonoftheaveragenumberofmicroorganismsandtheaverageofspeciesinthethreestages在發(fā)酵前，發(fā)酵中以及瓶?jī)?chǔ)后三個(gè)階段中，各階段都表現(xiàn)出：對(duì)各階段的接觸點(diǎn)進(jìn)行嚴(yán)格消毒處理的微生物數(shù)量以及微生物的種類都明顯的低于不進(jìn)行消毒處理的，說(shuō)明對(duì)原料、發(fā)酵容器、運(yùn)輸管道以及存儲(chǔ)容器等實(shí)驗(yàn)器材的消毒處理可以在一定的程度上有效的抑制釀造過(guò)程中微生物的滋生。2.5不同溫度對(duì)乳酸菌活性的影響影2.6不同pH對(duì)乳酸菌活性的影響2.7不同SO2濃度對(duì)乳酸菌活性的影響3討論4結(jié)論ADDINCNKISM.LBib參考文獻(xiàn)[1]羅文靜,李燮昕,張羽晨,等.酸木瓜資源利用及加工技術(shù)的研究進(jìn)展[J].新農(nóng)業(yè),2018,(17):35-39.[2]蘆榮華,李軻.分析農(nóng)業(yè)食品加工中的微生物污染及其控制[J].食品界,2021,(5):84-85.[3]陳敏,劉新環(huán),劉冬,等.果酒的病害與敗壞的原因及其防治方法[J].釀酒科技,2003,(3):75-76.[4]黃酒釀造過(guò)程中微生物污染控制[J].[5]王鵬宇.農(nóng)業(yè)食品加工中的微生物污染及其控制研究[J].南方農(nóng)機(jī),2021,52(3):73-74.[6]孫勇,張芝鳳.加強(qiáng)奶車奶槽清洗,防止微生物污染[J].中國(guó)奶牛,2006,(7):46-47.[7]史迪,黨娜,武岳,等.阿尤恩地區(qū)自然發(fā)酵牛乳中乳酸菌分離鑒定及多樣性研究[J].中國(guó)乳品工業(yè),2021,49(3):4-9,41.[8]賈丹丹,趙娟.釀造車間微生物的控制[J].啤酒科技,2007,(5):32-33.[9]張霞.釀造車間的純生啤酒微生物管理[J].啤酒科技,2014,(5):55-57.[10]啤酒生產(chǎn)過(guò)程中的微生物控制[J].[11]熊素玉,姚新奎,譚小海,等.不同溫度及pH條件對(duì)乳酸菌生長(zhǎng)影響的研究[J].新疆農(nóng)業(yè)科學(xué),2006,(6):533-538.[12]張曉黎,王琛,高雅,等.不同溫度條件對(duì)乳酸菌發(fā)酵酸菜效果的影響[J].農(nóng)業(yè)科技與裝備,2019,(6):34-35,38.[13]尚天翠.溫度及pH條件對(duì)乳酸菌生長(zhǎng)影響的研究[J].伊犁師范學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2011,(3):32-36.[14]溫度及so2處理對(duì)采后葡萄灰霉菌抑制作用研究[J].附錄1.2.4木瓜酒指標(biāo)檢測(cè)各水果ph山楂青梅檸檬酸棗楊梅蘋果7.3~7.43.23~3.252~2.55.5~選用酸度較高的檸檬作為參照微生物菌落總數(shù)菌落總數(shù)是指木瓜酒檢樣經(jīng)過(guò)稀釋涂布平板法[15]，在一定條件下培養(yǎng)后所得1mL檢樣中所含細(xì)菌菌落的總數(shù)。它可以反應(yīng)木瓜酒的新鮮度、被細(xì)菌污染的程度、生產(chǎn)過(guò)程中木瓜酒是否變質(zhì)和木瓜酒生產(chǎn)的一般衛(wèi)生狀況等。因此它是判斷木瓜酒衛(wèi)生質(zhì)量的重要依據(jù)之一。計(jì)算公式為：菌落總數(shù)其中：C表示某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)V表示涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)M代表稀釋倍數(shù)。相關(guān)微生物數(shù)量指標(biāo)（檸檬酒的微生物指標(biāo)）項(xiàng)目指標(biāo)菌落總數(shù)，（CFU/Ml）≤50大腸菌群,（MPN/100Ml）≤3腸道致病菌（指沙門氏菌、志賀氏菌，金黃色葡萄球菌）不得檢出總糖和還原糖測(cè)定：（1）標(biāo)定:吸取斐林A、B液各5.00mL于250mL三角燒瓶中，加50mL水，2~3顆玻璃珠，搖勻，在電爐上加熱至沸，在沸騰狀態(tài)下用制備好的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，當(dāng)溶液的藍(lán)色將消失呈紅色時(shí)，加2滴次甲基藍(lán)指示液，繼續(xù)滴至藍(lán)色消失，記錄消耗的面萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。另吸取斐林A、B液各5.00mL于250mL三角燒瓶中，加50mL水，加2~3顆玻璃珠，搖勺，再加比上述試驗(yàn)少0.5~1mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，加熱至沸，并保持2min,加2滴次甲基藍(lán)指示液，在沸騰狀態(tài)下于1min內(nèi)用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液以1滴/3~4s的速度滴定至終點(diǎn)，如果達(dá)不到滴定速度與時(shí)間的要求，則需調(diào)整預(yù)先加人葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的數(shù)量，重新進(jìn)行試驗(yàn)，直到符合要求，同時(shí)做平行試驗(yàn)，記錄消耗的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積。斐林A、B液各5mL相當(dāng)于葡萄糖的克數(shù)按一下公式計(jì)算F=式中F—斐林A、B液各5mL相當(dāng)于葡萄糖的克數(shù)m—稱取葡萄糖的質(zhì)量，gV—消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積，mL（2）試樣制備①測(cè)總糖用試樣準(zhǔn)確吸取一定量的樣品(V1)于100mL燒杯中[15]，加水至25mL,再加5mL鹽酸溶液(1+1)，攪勻。放置于(68土1)℃水浴中水解15min,取出冷卻。加人2滴配酞指示劑。用氫氧化鈉溶液(200g/L)中和至酚酞指示劑變?yōu)榧t色，將試液完全轉(zhuǎn)人容量瓶中并定容至刻度(V2)，搖勻。通過(guò)調(diào)整V1，和V2使試液中還原糖的含量為2~4g/L。②測(cè)還原糖用試樣準(zhǔn)確吸取一定量的樣品(V1)于一定量的容量瓶中，加水定容至刻度(V2),搖勻。試液中還原糖的含量應(yīng)控制在2~4g/L范圍。（3）檢驗(yàn)步驟①用試樣直接滴定以試樣代替葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，按標(biāo)定斐林溶液的方法同樣操作，記錄消耗試樣的總體積(V3)。②用葡萄酒標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定對(duì)于含糖量低的樣品(制備的試樣還原糖濃度低于2g/L)，按上述步驟進(jìn)行操作，但在滴定時(shí)用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液代替試液滴定至終點(diǎn)，加人試樣的體積(V3)，滴定消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(V)。（3）結(jié)果計(jì)算用試樣直接滴定時(shí)，樣品中的含糖量按1式進(jìn)行計(jì)算，用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定時(shí)，樣品中的含糖量按2式計(jì)算。1、X=F2、X=式中X一樣品中總糖或還原糖的含量，g/LF—斐林A、B液各5mL相當(dāng)于葡萄糖的克數(shù)，gV1一吸取樣品的體積，mLV2-樣品稀釋后或水解定容的體積，mLV3-消耗試樣的體積，mLG-一葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的準(zhǔn)確濃度，g/mLV-消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL所得結(jié)果應(yīng)表示至一位小數(shù)，在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的2%。相關(guān)指標(biāo)項(xiàng)目要求總糖（以葡萄糖計(jì)），（g/L）干檸檬酒≤5.0半干檸檬酒5.1~15.0半甜檸檬酒15.1~50.0甜檸檬酒≥.3酒度測(cè)定：（1）試樣制備用一潔凈的100mL容量瓶，準(zhǔn)確量取100mL待測(cè)酒樣(液溫20℃)于500mL蒸餾瓶中，用50mL水分三次沖洗容量瓶，洗液全部并人蒸餾瓶中，再加幾顆玻璃珠，連接冷凝器，以取樣用的容量瓶作接收器(外加冰浴)。開(kāi)啟冷卻水，緩慢加熱蒸餾。收集餾出液接近刻度，取下容量瓶，蓋塞。于20℃+0.1℃水浴中保溫30min,補(bǔ)加水至刻度，混勻，備用[11]。（2）檢驗(yàn)步驟①密度瓶質(zhì)量的測(cè)定：將密度瓶清洗干凈，在35℃~40℃的干燥箱中干燥、完全驅(qū)除水分，冷卻，然后稱重。重復(fù)干燥和稱重，直至恒重，得到密度瓶的質(zhì)量(m)。②蒸餾水質(zhì)量的測(cè)定將煮沸冷卻至15℃左右的蒸餾水注滿密度瓶，插上溫度計(jì)，瓶中不得有氣泡。將密度瓶浸人(20.0+0.1)℃的恒溫水浴中，待內(nèi)容物溫度達(dá)20℃并保持20mIm不變后，用濾紙吸去側(cè)管溢出的液體，使側(cè)管中的液面與側(cè)管管口齊平，蓋好側(cè)孔帽，取出密度瓶，用濾紙徹底擦干瓶壁上的水，立即稱量。得出密度瓶加蒸餾水的質(zhì)量(m1)。③試樣質(zhì)量的測(cè)定：用制備好的試樣將密度瓶沖洗2~3次，然后注滿，外壁用蒸餾水沖洗干凈，按蒸餾水質(zhì)量的測(cè)定同樣操作，稱量，得出密度瓶加試樣的質(zhì)量(m2)。④計(jì)算公式試樣的密度按公式、進(jìn)行計(jì)算:ρA=式中