細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)

T細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)機(jī)體接受外來抗原及自身抗原刺激后，通過細(xì)胞免疫和體液免疫及相關(guān)系統(tǒng)協(xié)同作用，對(duì)抗原產(chǎn)生應(yīng)答。T細(xì)胞應(yīng)答：T細(xì)胞增殖分泌細(xì)胞因子細(xì)胞毒效應(yīng)表達(dá)特定表面標(biāo)志淋巴細(xì)胞DNA合成分化母細(xì)胞刺激物細(xì)胞變大細(xì)胞漿擴(kuò)大空泡核仁明顯核染色質(zhì)疏松一、淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)1、原理（1）形態(tài)學(xué)檢測(cè)2、檢測(cè)方法方法學(xué)評(píng)價(jià)優(yōu)點(diǎn)：形態(tài)學(xué)方法簡(jiǎn)便易行，普通光學(xué)顯微鏡便能觀察結(jié)果，適于基層實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。缺點(diǎn)：是依靠肉眼觀察形態(tài)學(xué)變化，判斷結(jié)果易受主觀因素影響，重復(fù)性和準(zhǔn)確性較差。（2）3H-TdR摻入法（MTT法）PHA淋巴細(xì)胞（54h）3HTdR摻入（MTT被還原）收集細(xì)胞，檢測(cè)β射線（490nm吸光度）優(yōu)點(diǎn)：3H-TdR摻入法敏感性高，客觀性強(qiáng)，重復(fù)性好。缺點(diǎn)：但需一定設(shè)備條件，同時(shí)還存在放射性核素污染問題。

原理：CFSE等染料可連結(jié)到細(xì)胞內(nèi)蛋白的氨基酸群（PKH26能插入脂膜），并隨細(xì)胞分裂而分配到子代細(xì)胞中，每分裂一次，熒光強(qiáng)度減少一倍。方法學(xué)評(píng)價(jià)優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單；重復(fù)性強(qiáng)；安全；缺點(diǎn)：CFSE可能干擾細(xì)胞增殖（3）CFSE（PKH26等）染色法二、T細(xì)胞分泌功能的檢測(cè)T細(xì)胞經(jīng)各種絲裂原或特異性抗原刺激后,分泌的各種細(xì)胞因子,可借助免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)分別檢測(cè)細(xì)胞因子含量、生物學(xué)活性或基因表達(dá)水平，從而間接反映T細(xì)胞功能。1、生物活性檢測(cè)對(duì)于依賴于該細(xì)胞因子而增殖的細(xì)胞，細(xì)胞增殖程度與細(xì)胞因子含量呈正相關(guān)。方法學(xué)評(píng)價(jià)優(yōu)點(diǎn)：敏感（pg）；顯示細(xì)胞因子的活性；缺點(diǎn)：影響因素多（同一細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子，多種細(xì)胞因子呈現(xiàn)相同功能，細(xì)胞因子及其相應(yīng)受體同時(shí)分泌）；2、免蘇疫學(xué)被檢測(cè)（1）EL矩IS彩A:操作烘簡(jiǎn)單腥，非番特異杏性影堤響大粉；（2）EL告IS鼻PO哨T:高度鏈的敏吐感性睜，可賞重復(fù)長(zhǎng)性強(qiáng)蔥，抗綿原特值異性事精確壯；（3）IC邊S：可普同時(shí)唇檢測(cè)岔產(chǎn)生餓細(xì)胞題因子體的細(xì)匠胞表啞型；形需要寨樣本育量大月于EL嶺IS料PO淡T，破請(qǐng)膜后戀的細(xì)嫂胞不啞能做既進(jìn)一織步功凍能檢伐測(cè)；優(yōu)點(diǎn)涉：簡(jiǎn)蝕單，放適用理性廣讓，應(yīng)方用特姿異的拔單克筑隆抗適體，登可檢押測(cè)單解一細(xì)貞胞因省子的屢含量丑；缺點(diǎn)脅：無促法反歐應(yīng)細(xì)蘋胞因垮子的身生物螺活性戴；不很同單錘克隆政抗體拖檢測(cè)畜的結(jié)鵲果不萌同；狡敏感鈴性稍腫差（10長(zhǎng)0p炭g）方法孫學(xué)評(píng)崖價(jià)（1）Re址al鞋ti爸me孫-P輩CR（2）分勵(lì)子雜晴交2、分梳子生層物學(xué)廳檢測(cè)三、T細(xì)胞股介導(dǎo)園的細(xì)犯胞毒蠅實(shí)驗(yàn)特異絲式性細(xì)幣胞毒菠性T淋巴悟細(xì)胞察（CT錘L）識(shí)講別靶格細(xì)胞壘表面仆特異絞性抗抹原，霸通過Fa美s途徑網(wǎng)及顆須粒酶呼途徑依，介欠導(dǎo)靶半細(xì)胞嫁溶解田。1、51Cr釋放獄實(shí)驗(yàn)鉻酸繳鈉（Na251Cr矛O4）中狡的六芝價(jià)鉻忘能被果活細(xì)慨胞攝亡取，街并在囑細(xì)胞毫溶解系后以效三價(jià)獲鉻的激形式匠被釋窯放。方法吳學(xué)評(píng)涌?jī)r(jià)優(yōu)點(diǎn)渠：靈延敏、逆特異幟，是CT袖L活性寇測(cè)定摧的經(jīng)銳典方梅法；缺點(diǎn)逝：操卷作繁姥瑣；放電射性歡；靶精細(xì)胞51Cr自發(fā)梨釋放悲；2、IC嚇A貞ss辨ay（In秘v嶄iv滋o征cy條to漁to擇xi仇ci技ty啟A販ss富ay）表達(dá)要特定森抗原盆的腫餅瘤細(xì)甲胞系棒經(jīng)CF咐SE標(biāo)記喂后，就皮下竹注射魔入小踐鼠，蠢被小扣鼠體飯內(nèi)抗相原特拐異性CT溉L作用24小時(shí)醒后，之取出掩腫瘤阻細(xì)胞再，檢拳測(cè)其CF黎SE含量螞。方法刻學(xué)評(píng)雙價(jià)優(yōu)點(diǎn)溫：反搶應(yīng)體料內(nèi)殺添傷效尤果；缺點(diǎn)化：影貧響因飛素多；四、T細(xì)胞豆表面獨(dú)標(biāo)志挎的檢積測(cè)特異壺性T淋巴衰細(xì)胞量活化浙需要德第一崖信號(hào)蒸和第常二信染號(hào)。俘因此饒檢測(cè)CT置L表面好特異咐性受堅(jiān)體或械相關(guān)掛的表街面標(biāo)祖志可翁以反只映CT擾L的活讓化狀雞態(tài)。1、Te警tr使am異er技術(shù)模擬T細(xì)胞百活化會(huì)的第商一信藏號(hào)，賣構(gòu)建戶熒光星標(biāo)記援的MH悟C-肽復(fù)肅合物友，被娘特異坑性T細(xì)胞周識(shí)別栗。通廣過檢漁測(cè)標(biāo)夢(mèng)記的也熒光膊，反煉應(yīng)活熱化的映特異照性T細(xì)胞山。方法寶學(xué)評(píng)太價(jià)優(yōu)點(diǎn)糕：簡(jiǎn)故便，莖快速紙，敏押感缺點(diǎn)飯：成軋本高尋，受HL元A型別云的限事制2、表廈面標(biāo)酸志CD稱10約7a邁/b的檢述測(cè)CD槍10哄7a避/b表達(dá)折于T細(xì)胞抄內(nèi)的浙質(zhì)膜塵上，燈隨著骨脫顆跡粒作高用，逝一過撐性表冶達(dá)于姓細(xì)胞茫表面槐；T細(xì)胞啟表面CD瘦10雁7a英/b的檢