藥典無菌檢查法與微生物鑒定

2015版藥典無菌檢查法與微生物鑒定方法藥品檢驗與研究所抗生素室無菌

是指某一物體或某一環(huán)境中不含有活的微生物。無菌檢查法用于檢查藥典要求無菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其他品種是否無菌的一種方法。無菌操作

是指在無菌環(huán)境條件下，在對無菌制品或無菌器械等進行檢驗的過程中，能防止微生物污染與干擾的一種常規(guī)操作方法。無菌技術(shù)

是指在微生物試驗工作中，控制或防止各類微生物的污染及其干擾的一系列操作方法和有關(guān)措施，其中包括無菌環(huán)境設(shè)施、無菌試驗器材及無菌操作。無菌檢查法的局限性由于無菌是一個相對的概念，因此，對無菌檢查的結(jié)果應(yīng)該有一個正確的認識－即產(chǎn)品通過無菌檢查僅僅意味著在該檢驗條件下，供試品未發(fā)現(xiàn)有微生物污染，并不表示所有的產(chǎn)品都是無菌的。反之，當(dāng)供試品中檢出微生物污染，則可以認為批產(chǎn)品的微生物污染風(fēng)險相當(dāng)高。從理論上來說，要確定某批產(chǎn)品的無菌性，應(yīng)對每個容器進行無菌檢查。但是無菌試驗對樣品是破壞性的，因此不可能對每一最小包裝的產(chǎn)品進行檢查。統(tǒng)計概率的局限性：對于低污染水平的產(chǎn)品，其局限性在統(tǒng)計學(xué)上更為明顯。檢驗條件的局限：樣品中污染的微生物的檢出受多種因數(shù)的影響，只有在各檢驗條件符合污染微生物的修復(fù)和生長時，才能保證被檢樣品的無菌檢驗結(jié)果的準確性。污染的檢出率要比實際產(chǎn)品的污染率低。無菌檢查存在檢查失誤的可能性：這可能是因為污染菌濃度太低，或是污染菌生長太慢，或是因為培養(yǎng)基不良等原因，在培養(yǎng)期間污染菌根本就不生長。產(chǎn)品的染菌率愈小，錯判合格的可能性就愈大。所以在評價某個無菌制品的某個批的無菌狀態(tài)時，僅依靠最終產(chǎn)品的無菌檢查是不充分的，局限性較大。對無菌制品來說，生產(chǎn)最終產(chǎn)品的所有系統(tǒng)的工藝才是最重要的。2015版中國藥典無菌檢查法2015版中國藥典無菌檢查法的修訂無菌檢查法的方法適用性試驗無菌檢查法的注意事項2015版中國藥典無菌檢查法的修訂實驗環(huán)境的修訂檢查用培養(yǎng)基的修訂具體修訂內(nèi)容實驗環(huán)境的修訂2010年版2015年版無菌檢查：應(yīng)在潔凈度10000級背景下的局部100級單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進行。無菌檢查：應(yīng)在潔凈度B級背景下的局部A級單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進行。 微生物限度檢查：應(yīng)在潔凈度10000級背景下的局部100級單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行。 微生物限度檢查：應(yīng)在受控潔凈環(huán)境下（不低于D級）的局部不低于B級單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行。修訂的依據(jù)修訂依據(jù)及意義：2010版GMP附錄一《無菌藥品》和附錄三《生物制品》中均規(guī)定，非最終滅菌產(chǎn)品各工序關(guān)鍵操作環(huán)境應(yīng)為B級背景下的A級。無菌檢查的潔凈環(huán)境不得低于生產(chǎn)關(guān)鍵區(qū)的潔凈環(huán)境要求！ICH：檢查方法中要求“試驗應(yīng)在無菌條件下進行，防止微生物污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出”。20艦15版中魔國藥私典通鉆則92唐03藥品迫微生潔物實稠驗室估質(zhì)量住管理彎指導(dǎo)灑原則92么05藥品勾潔凈支實驗桿室微下生物嗓監(jiān)測歸和控液制指兼導(dǎo)原允則92鄙06無菌泄檢查雜用隔娛離系許統(tǒng)驗努證指脖導(dǎo)原擁則GM登P2死01鞠0年版蔽對潔寸凈度腥的規(guī)扇定及井確認記標準－50100200不作規(guī)定不作規(guī)定290003520000D級－25501002900035200002900352000C級555102900352000293520B級<1<1<1<120

3520203520A級5指手套cfu/手套接觸碟/（f55mm）cfu/≥5.0μm≥0.5μm≥5.0μm≥0.5μm表面微生物沉降菌（f90mm）cfu/4h(2)浮游菌cfu/m3動態(tài)靜態(tài)微生物監(jiān)測的動態(tài)標準(1)懸浮粒子最大允許數(shù)/立方米潔凈度級別無菌以隔離推系統(tǒng)腔的使憶用及者驗證92腳06無菌出檢查溉用隔頂離系微統(tǒng)驗席證指放導(dǎo)原酒則1.操作許驗證2.完整腳性驗熄證3.滅菌罪驗證4.滅菌遺循環(huán)秒驗證5.內(nèi)部窮潔凈松度驗柴證6.儀器俘儀表革驗證培養(yǎng)棒基的佛修訂我國斜藥典沒無菌理檢查無法與葉歐美嘆藥典潤的差槽異20刪15版藥端典的交修訂比較項目ChP2010USP35EP7.0檢驗條件規(guī)定總體10000級、局部100級應(yīng)在無菌條件下進行。應(yīng)在無菌條件下進行。人員要求具備微生物專業(yè)知識，并經(jīng)過無菌技術(shù)的培訓(xùn)經(jīng)培訓(xùn)和認可經(jīng)培訓(xùn)和認可培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件與時間硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基30～35℃；20～25℃(三部）改良馬丁培養(yǎng)基

23～28℃均培養(yǎng)14天，轉(zhuǎn)種后細菌培養(yǎng)2天、真菌培養(yǎng)3天硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基30～35℃胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基20～25℃

培養(yǎng)不少于14天轉(zhuǎn)種后培養(yǎng)不少于4天硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基30～35℃胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基

20～25℃培養(yǎng)不少于14天轉(zhuǎn)種后培養(yǎng)不少于7天培養(yǎng)基靈敏度檢查與方法驗證用菌株金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉檢驗方法只要供試品性狀允許，應(yīng)采用薄膜過濾法性狀允許的樣品采用薄膜過濾，利于抗菌影響去除采用薄膜過濾，利于抗菌影響去除稀釋劑與薄膜過濾沖洗液1、0.1％蛋白胨水溶液；2、pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液3、其他經(jīng)驗證過的溶液1．0.1%蛋白胨水溶液；2．0.1%蛋白胨水溶液＋1ml吐溫803．動物組織消化液＋牛肉浸膏＋吐溫801．0.1％蛋白胨水溶液2．0.1％蛋白胨水溶液＋0.1％（聚乙氧基乙醇、0.1％吐溫-80）3．十四烷酸異丙酯。結(jié)果判斷與復(fù)試規(guī)定一次檢出結(jié)果為準(設(shè)備及環(huán)境不符合要求、實驗過程有可能引起污染的因素、陰性對照有菌生長、分離微生物可明確歸因于無菌實驗過程中所用的材料或技術(shù)錯誤造成的。單倍量重試)2010年版2015年版硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基30～35℃（20～25℃）硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基30～35℃（20～25℃）改良馬丁培養(yǎng)基23～28℃胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基22～25℃營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)壯基的侮主要頸修訂硫乙耐醇酸嬸鹽流爽體培協(xié)養(yǎng)基榆（Fl榜ui麻d氏Th母io職gl擱yc蓬ol央la趴te傘M滲ed筆iu被m）藥典USPBP中國藥典-2015名稱FluidThioglycollateMedium硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基FluidThioglycollateMedium硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基FluidThioglycollateMedium硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基目的培養(yǎng)需氧、厭氧和微需氧微生物（主要是厭氧菌）培養(yǎng)需氧、厭氧和微需氧微生物（主要是厭氧菌）培養(yǎng)需氧、厭氧微生物培養(yǎng)條件14天于30-35°C及20-25°C配方PancreaticDigestofCasein(胰酪蛋白胨)....................15.0gYeastExtract(酵母浸出粉)..................................5.0gDextrose(葡萄糖)............................................5.0gSodiumChloride(氯化鈉).....................................2.5gL-Cystine(L-胱氨酸).......................................0.5gSodiumThioglycollate(硫乙醇酸鈉)..........................0.5gAgar(瓊脂).................................................0.75gResazurin(刃天青).........................................1.0mgWater（水）................................................1000ml大豆喚胰酪預(yù)胨培把養(yǎng)基(T暢SB謎)旅&改良嘩馬丁孫培養(yǎng)磚基藥典USP36BP-2013中國藥典2010版中國藥典2015版名稱TrypticSoyBroth（Soybeancaseindigestmedium)大豆－胰酪胨培養(yǎng)基改良馬丁培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基配方胰酪蛋白胨..…………….…..7.0g大豆木瓜蛋白酶消化物………………….3.0g氯化鈉…..…………….…….…5.0g磷酸氫二鉀…....2.5g一水葡萄糖……………….……2.5g蛋白胨……………..5.0g酵母浸出粉…….…2.0g葡萄糖…………....20.0g磷酸氫二鉀………..1.0g硫酸鎂(MgSO4.7H2O)….0.5g胰酪胨?????17.0g大豆木瓜蛋白酶水解物?????????3.0g氯化鈉??????5.0g磷酸氫二鉀?????2.5g葡萄糖/無水葡萄糖???????2.5g/2.3g目的支持廣泛微生物的生長,包括需氧菌專性和兼性厭氧菌、真菌（主要是需氧菌）用于培養(yǎng)真菌支持廣泛微生物的生長,包括需氧菌、專性和兼性厭氧菌、真菌（主要是需氧菌）培養(yǎng)條件14天于30-35°C及20-25°C14天于20-25°C14天于30-35°C及20-25°C2010年版2015年版金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌的新鮮培養(yǎng)物接種到胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物接種至改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物接種至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基菌液障制備赴用培法養(yǎng)基毀的修鞋訂2010年版2015年版硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌生孢梭菌硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌生孢梭菌改良馬丁培養(yǎng)基：白色念珠菌黑曲霉胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基：枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉培養(yǎng)陽基靈友敏度俗檢查無菌蹤蝶檢查鳳方法秩的整罷合以20窯10年版魄藥典玻二部克為基沿礎(chǔ)，僑整合奔保留激了生質(zhì)物制屆品無魚菌檢插查法從的特煌點，代在檢回驗數(shù)芳量、決檢驗艱量、鵲陽性棉對照蜂、培共養(yǎng)溫晝度方積面互梅相兼狹顧。生物覽制品太的無友菌檢弦查中刻硫乙步醇酸遍鹽流童體培民養(yǎng)基扯為雙洞份，迫分別洪置30～35℃、20～25訓(xùn)℃兩個獻溫度牌培養(yǎng)鞋。US買P/鎮(zhèn)EP戲/B礙P/尋JP展/I矮CH無菌尿檢查纖法中病對生遵物制萄品均污沒有芝作出支特殊后規(guī)定咳。無菌敬檢查街方法期的主心要修陪訂“方砌法驗業(yè)證試夸驗”此修訂再為“價方法濕適用頂性試鋒驗”“若錘該產(chǎn)作品的藥組分袍或原暴檢驗數(shù)條件岸發(fā)生浙改變集時，拳檢驗描方法益應(yīng)重意新驗慨證”雅修訂還為“這若檢豪驗程瞞序或靠產(chǎn)品憶發(fā)生獎變化杯可能庫影響除檢驗賄結(jié)果奇時，誰應(yīng)重澇新進汁行方杰法適鄙用性測試驗困?！薄胺捷^法適訴用性打試驗竹”培沙養(yǎng)時藝間由歸“3～5天”蘋修訂罪為不勻得超陣過5天。2010年版2015年版硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基接種小于100cfu的菌液：金黃色葡萄球菌大腸埃希菌枯草芽孢桿菌生孢梭菌硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基接種小于100cfu的菌液：金黃色葡萄球菌大腸埃希菌生孢梭菌改良馬丁培養(yǎng)基接種小于100cfu的菌液：白色念珠菌黑曲霉胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基接種小于100cfu的菌液：枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉方法肥適用僑性試赴驗的退修訂檢驗戴數(shù)量跨：是霉指一焦次試穴驗所濕用供盈試品全最小隱包裝鳴容器謠的數(shù)先量。絨成品濟每亞腐批均店應(yīng)進梳行無固菌檢片查。20灘15版藥津典四逝部通名則11見01表2，上熟市抽乖驗樣蝴品的商最少純檢驗余數(shù)量吧，除蠻抗生攔素和火血液龜制品株外，V≥10病0m施l液體市制劑溪的最或少檢有驗數(shù)數(shù)量由20婚10年版巖藥典6瓶/支修襖訂為10瓶/支。筋即所船有上耗市抽拉驗樣派品除遮抗生曉素和氏血液蛋制品成外的悄最少墊檢驗疾數(shù)量捧為10瓶/支。橡增加異了供砌試品掌檢驗艙數(shù)量緒。2010年版2015年版硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：4種金黃色葡萄球菌大腸埃希菌枯草芽孢桿菌生孢梭菌硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：3種金黃色葡萄球菌大腸埃希菌生孢梭菌改良馬丁培養(yǎng)基：2種白色念珠菌黑曲霉胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基：3種枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉方法宅適用金性試駝驗用留菌株無菌痰檢查岡法的跨方法頑適用奏性試語驗菌液訓(xùn)制備丸要點新鮮呀培養(yǎng)筆物，桂混勻家。每一宗稀釋創(chuàng)劑更秒換吸習(xí)管。生孢曠梭菌尊可以畏用硫筆乙醇凡酸鹽雕流體周培養(yǎng)辭基計樹數(shù)，炎一般16～18籌h內(nèi)觀取察。菌液創(chuàng)制備硬要點采用告瓊脂磚斜面站上的訴培養(yǎng)忽物制巖備菌臨液時美，盡浪量使羨菌苔權(quán)分散顛。黑曲什霉可燦制成傅穩(wěn)定玻的孢寶子懸旅液保宜存在2～8℃。對于合同一調(diào)份試蠶驗菌概培養(yǎng)懲物，沫采用務(wù)相同慎的稀欲釋步腳驟，海不同替的實稀驗人敗員對究菌數(shù)極的測抵定結(jié)進果可燥能存希在較曉大的蹤蝶差異艇。銅綠假單胞菌[CMCC(B)10104]大腸埃希菌[CMCC(B)44102]金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]生孢梭菌[CMCC(B)64941]枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]G-桿菌G+球菌酵母菌霉菌兼性需氧菌專性厭氧菌專性需氧菌白色念珠菌[CMCC(F)98001]黑曲霉[CMCC(F)98003]G+芽孢右桿菌大腸信埃希暫菌、搖金黃矛色葡替萄球艦菌、餓銅綠蓋假單亮胞菌削需氧例層厭傳氧層柜均生難長?？莶輷а挎呗敆U菌執(zhí)僅在攤需氧遍層生曾長。生孢寄梭菌枯僅在本厭氧鄭層生對長。取樣券量的澆確定例：呀批蜘生產(chǎn)夫量>5折00個的育規(guī)格速為1m恥l的注沫射液享，表1規(guī)定趁接種瀉每種龍培養(yǎng)牽基的放最少包檢驗歡數(shù)量渴為20個或2％（監(jiān)取較嶼少者撫），萍表3規(guī)定腔全量飽接種遷。直接韻接種搜法勾每吉管培貓養(yǎng)基盜接種定樣品程的量×6驗證煌（一免次）薄膜降過濾腳法哨每謀株菌20瓶，6株菌12攀0瓶直接照接種巴法40瓶+陽性無菌乳檢查薄膜秤過濾栗法40瓶+單20瓶（養(yǎng)陽性城）=6單0瓶方法匪適用朗性試兩驗結(jié)辟果的腎判斷滅：與對帶照管俘比較晝，如串含供媽試品模的各灶試驗藝管的芹實驗遺菌均描生長炊良好息，可廉照此臂檢查殿法和哭檢查翅條件企進行魚供試亮品的翁無菌弓檢查腳。如含番供試挖品的源任一挖試驗既管的凈實驗仁菌生素長微索弱、歲緩慢坊或不散生長猴，可志采用譜增加持沖洗么量、罪增加裁培養(yǎng)然基用鑄量、足使用火中和賣劑、貌更換松濾器卵品種憐等方賊法，高重新葉進行央方法詞驗證球。無菌榮檢查喚法的舟注意維事項培養(yǎng)護基的夾要求推：靈敏瘡度檢芬查符慢合規(guī)題定。硫乙議醇酸爭鹽流麥體培穩(wěn)養(yǎng)基蟻氧化沿層：接種畢前：充培養(yǎng)噸基氧干化層它的高庫度不檢超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C）醫(yī)學(xué)朝微生愧物菌騰種保糖藏管盞理中顧心（CM筆CC）微生觸物鑒陶定條忌件待鑒虧定的葬微生芒物必樸須是中純種邀微生炭物，六在鑒懂定前抹，需遵將菌啞株純港化，泄獲得誓純培枕養(yǎng)物橫。選取詞權(quán)威綁鑒定慶手冊夾。選擇崇適當(dāng)灰鑒定忍方法忙，確和定主絮要測恥試項瓣目。微生逃物鑒馬定程惹序待檢黨菌的劣分離耗純化初篩處試驗表型壟微生偉物鑒敗定基因貞型微茅生物腳鑒定經(jīng)典閉鑒定盟方法形態(tài)錦特征乏：大芳小，側(cè)排列砌，分丹化，著結(jié)構(gòu)背，染束色等培養(yǎng)航特征沃：營暈養(yǎng)要宵求，將生長全的物調(diào)理環(huán)歌境（犁酸堿育度盜，溫尖濕度己），許菌落苗，菌趟苔，怪液體瞇培銳養(yǎng)特象征。代謝葵特征續(xù)：微緩生物喝生命芒活動用的方銀式。凡如：化學(xué)溪組成深特征藝：細慎胞主償要特累征性眠化學(xué)膝成分彩的鑒侄定記如：御細胞黎壁成哪分、球細胞齒內(nèi)含雜物抗原備特征庸：抗福原成門為化風(fēng)學(xué)組統(tǒng)成的欺一個雕特殊勞方面辟，微依生物巖具有題許多業(yè)不同辯類型伶的抗忠原。生態(tài)時特征宗：與跪其他岔生物腸的關(guān)蛇系、屢自然豎界的霸分布胃、致光病性雨等待檢袍菌的偶分離笑純化最常邪用的分遙離純蓋化方要法是厚挑取儲待檢認菌在伯適宜擠的固喊體培會養(yǎng)基向上連械續(xù)劃線分茂離純紹化，禮以獲施取待贏檢菌嘴的純界培養(yǎng)啊物（秤單個掘菌落密）。各類市微生廊物的偏菌落匹特征微生物類別菌落特征單細胞微生物菌絲狀微生物細菌酵母菌放線菌霉菌主要特征細胞形態(tài)特征小而均勻、個別有芽孢大而分化細而均勻粗而分化相互關(guān)系單個分散或按一定方式排列單個分散或假絲狀絲狀交織絲狀交織菌落含水情況很濕或較濕較濕干燥或較干燥干燥外觀特征小而突起或大而平坦大而突起小而緊密大而疏松或大而致密參考特征菌落透明度透明或稍透明稍透明不透明不透明菌落與培養(yǎng)基結(jié)合度不結(jié)合不結(jié)合牢固結(jié)合較牢固結(jié)合菌落的顏色多樣單調(diào)十分多樣十分多樣菌落正反面顏色差別相同相同一般不同一般不同細胞生長速度一般很快較快慢一般較快氣味一般有臭味多帶酒香常有泥腥味霉味初篩習(xí)試驗常規(guī)斯的微交生物鴿鑒定迷，一醫(yī)般要捕先進戶行初燒篩試陶驗確擋定待更檢菌秤的基舟本微析生物樓特征奔，將軋待檢奶菌做披初步嫌分類詢。常見赴的初伍篩試勒驗包飄括革具蘭染停色、復(fù)芽孢醉染色戒、鏡謹檢觀成察染帝色結(jié)槍果和艘細胞訂形態(tài)傳、重收要的亦生化激反應(yīng)順等。區(qū)分威葡萄威球菌(過氧灣化氫右酶陽染性）燙和鏈納球菌(過氧貸化氫碧酶陰闖性）過氧托化氫供酶及攀過氧旨化物森酶實副驗：2H2O2過氧院化氫禮酶2H2O+蹈O2過氧紋化物遲酶：RH2+H2O2過氧吉化物蝕酶R+塘2H2O陽性箱：細灰菌變唱為黑塞褐色屬，有緣瑞氣泡煌產(chǎn)生親；陰性嘩：呀不變慰色。陽性陰性區(qū)分自不發(fā)釣酵的錢革蘭僚陰性烤桿菌扶（氧詠化酶冬陽性漠）和腸鉛道菌椒（氧晚化酶般陰性悟）細胞斑色素徹氧化疼酶實挑驗：細胞徹色素C細胞圣色素宵氧化逆酶氧化甲型細厲胞色吉素C兆+對苯葵二胺+--奈酚腐靛秋酚蘭變（藍薯色）陽性復(fù)：2分鐘與內(nèi)生嘗成藍肯色為陽陽性頸；陰性鄰：無正變化已。陽性陰性凝固脫酶實采驗：區(qū)分賊凝固羞酶陰摘性葡碑萄球獨菌（版可卵推測濤為非算致病凡性）且和凝殊固酶爪陽性粗葡萄葛球菌(很可舍能為仔致病玻片粗法性）體。試管港法檸檬疏酸鹽禮實驗顯（枸你櫞酸賄鹽實箱驗）：一些競微生回物可蛾以以撫銨鹽漢作為藏唯一稀的氮址源，付以檸厲檬酸網(wǎng)鹽作吳為唯寄一的止碳源貢，在餡檸檬木酸鹽兵培養(yǎng)舅基上寶生長鉆，分魚解檸接檬酸俯鹽生城成碳惠酸鹽債，使寶培養(yǎng)翠基變壇成堿揮性，州酸堿吵指示回劑變偷色。陰性陽性甲基種紅實盒驗（MR實驗場）畫：一些際細菌統(tǒng)分解皺葡萄款糖產(chǎn)獎生丙夢酮酸反，丙局酮酸極可被辦進一勢步分如解為消甲酸盤、乙迅酸、誤乳酸匹和琥勵珀酸雨而使弊培養(yǎng)斧基的pH值下裙降到4.析5以下耕，加武入甲墨基紅統(tǒng)指示輝劑出苗現(xiàn)紅近色反旅應(yīng)。陰性陽性V-況P實驗霸：一些歌細菌面分解蝕葡萄蘿糖為從丙酮王酸，訊進一村步脫池羧產(chǎn)尸生乙蜜酰甲稿基甲乓醇，夢乙酰嫁甲基息甲醇須在堿葛性溶敗液中量被空爆氣中徒的氧蔑氧化圍成二繞乙酰爬丁二鋼酮，俗進而版與培疊養(yǎng)基網(wǎng)內(nèi)蛋杏白胨剖中所觸含的藝精氨起酸的鈔胍基見發(fā)生妥反應(yīng)底生成寇紅色丹化合諸物。陰性陽性表型并微生釀物鑒衡定表型它微生滿物鑒謊定在表謠型鑒享定時巧應(yīng)注廉意采停用的域培養(yǎng)稠基、吳培養(yǎng)烘時間偉和傳葉代次抱數(shù)對敞鑒定待結(jié)果抽的影貞響。籍目前羨已有釘?shù)幕τ谔悸吩蠢坑煤途S生化湖反應(yīng)稼特征迷的鑒客定方堆法，澇如氣曲相色檔譜法左分析槳微生南物的天脂肪墾酸特吧征、MA賺LD宰1-諒TO啄F質(zhì)譜瓜法分煩析微儀生物習(xí)蛋白古等微喚生物謠鑒定氣系統(tǒng)軟，在差進行飾結(jié)果弄判斷抖時需姑借助曾于系氣統(tǒng)自孤身的撒鑒別呢數(shù)據(jù)汪庫，挑還依億賴特濁定的覽培養(yǎng)復(fù)基和欠培養(yǎng)蛋方法鋒以確霸保鑒薄定結(jié)方果的獅一致攝性。生長營在固織體培養(yǎng)診基上喇的菌志落全細封胞MA涉LD斜I-組TO灑F譜圖數(shù)據(jù)盤庫中晴參考裕譜圖輸出建可信竄鑒定灣結(jié)果找到阿匹配炸度最煤可信屆的譜士圖各菌耽種代懲表性防峰型弓分布冶存在彩顯著筑差異受，有然助于寒鑒定旅各個飯菌種央！基因末型微它生物餃鑒定與表模型特執(zhí)征不錫同，庫微生家物基屢因型狠通常務(wù)不受艱生長線培養(yǎng)桐基或俘分離飼物活起性的駱影響報，只錦需分誓離到劫純菌拋落便遷可用若于分煌析。由于哥大部塊分微鼓生物潛物種袖中核贈酸序醬列是瓜高度懷保守奮的，毯所以DN鉤A-軌D耽NA雜交窗、聚凳合酶涌鏈反摔應(yīng)、16薦S割rR艱NA序霉列唱和18航S駱rR詠NA序列繩、多震位點惠序列植分型逼、焦界磷酸瞞測序瀉、DN每A探針新和核粉糖體其分型截分析萄等基歇因型旁微生干物鑒嗽定方若法理府論上母更值掌得信術(shù)賴?；虺硇偷膬A鑒定陪可通鈴過DN或A雜交溫、限東制性廢酶切歉片段夾圖譜蒼的阿比較貫和/或D薪NA探針是完成湊，若DN業(yè)A劑-D下