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關(guān)于高中生物選修一月季的花藥培養(yǎng)人教版選修第1頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三1、被子植物定義:凡是種子有果皮包被著,胚珠有子房壁包被著的植物,就叫做被子植物一、被子植物和裸子植物2、裸子植物定義:凡是胚珠裸露,外面沒有子房壁包被,種子外面沒有果皮包被的植物稱為裸子植物實例:玉米、大豆、梨、杏實例:松、杉、柏第2頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三第3頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三第4頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三第5頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三3、花的結(jié)構(gòu)第6頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三花的結(jié)構(gòu):花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊第7頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三4、花的作用被子植物的有性生殖是在花里進(jìn)行的,雌蕊和雄蕊是進(jìn)行有性生殖的主要部分二、被子植物花粉粒的形成花絲花藥:囊狀結(jié)構(gòu),內(nèi)有很多花粉粒1、雄蕊的結(jié)構(gòu)雄蕊:第8頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三藥隔:花藥中部,由薄壁細(xì)胞構(gòu)成,內(nèi)有維管束花藥花粉囊(4或2)囊壁花粉粒表皮纖維層2、花藥的結(jié)構(gòu)第9頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三第10頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三3、花藥的發(fā)育周緣細(xì)胞(初生壁細(xì)胞)外:體積較大藥室內(nèi)壁中:一層或幾層細(xì)胞內(nèi):絨氈層分裂孢原細(xì)胞造孢細(xì)胞花粉母細(xì)胞(小孢子母細(xì)胞)有絲分裂絨氈層:為花粉粒的發(fā)育提供營養(yǎng),最后消失藥室內(nèi)壁:多量淀粉,發(fā)育成纖維層中層:早期分解,吸收,消失第11頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三花粉是小孢子母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的,因此,花粉是單倍體的生殖細(xì)胞4、被子植物的花粉發(fā)育②花粉粒的形成花粉母細(xì)胞(小孢子母細(xì)胞)減數(shù)分裂①經(jīng)歷時期:四分體時期、單核期、雙核期第12頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三四分體時期(進(jìn)入單核期)有絲分裂單核靠邊期(小孢子)單核居中期(小孢子)
小孢子(單核花粉粒)第13頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三精子精子有絲分裂花粉管細(xì)胞核生殖細(xì)胞核生殖細(xì)胞營養(yǎng)細(xì)胞雙核期兩個精子和一個營養(yǎng)核的基因型相同第14頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三1花粉母細(xì)胞4個小孢子減分有分4個花粉管細(xì)胞核4個生殖細(xì)胞核有分8個精子第15頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三第16頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三③花粉粒類型一個成熟的花粉粒即為雄配子體,有兩種情況:二核花粉粒:成熟的花粉粒中,只含花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核。(精子在花粉管中形成)三核花粉粒:有些植物的花粉,在成熟前,生殖細(xì)胞進(jìn)行一次有絲分裂,形成兩個精子,這樣的花粉在成熟時,含有一個營養(yǎng)核和兩個精子。第17頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三三、被子植物胚囊的形成1、雌蕊的組成柱頭、花柱、子房2、子房的結(jié)構(gòu)第18頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三被子植物子房的結(jié)構(gòu)胚珠的結(jié)構(gòu)花粉管精子卵細(xì)胞極核子房壁珠被珠孔第19頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三胚珠的外層是珠被,里面是胚囊。胚囊是由胚珠內(nèi)的胚囊母細(xì)胞(大孢子母細(xì)胞)發(fā)育而成。胚囊母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂,產(chǎn)生四個細(xì)胞,稱為大孢子,每個大孢子內(nèi)的染色體數(shù)目都比胚囊母細(xì)胞減少一半。這4個細(xì)胞排成一行,其中靠近珠孔的3個細(xì)胞退化,最里面的發(fā)育為胚囊細(xì)胞,胚囊細(xì)胞的核連續(xù)進(jìn)行三次有絲分裂,但是每次核分裂后,并不接著進(jìn)行細(xì)胞質(zhì)分裂,就形成了8個細(xì)胞核的胚囊。開始,這8個細(xì)胞核分別位于胚囊的兩端,每端4個,接著,每端各有1個細(xì)胞核移到胚囊的中央,這就是極核,所以再胚囊中的8個核中遺傳物質(zhì)是一樣的。3、卵細(xì)胞的形成第20頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三以后靠近珠孔端的3個細(xì)胞核發(fā)育成3個細(xì)胞,其中最大的一個是卵細(xì)胞,其余的是2個助細(xì)胞,另一端3個細(xì)胞核也發(fā)育成3個細(xì)胞,成為反足細(xì)胞第21頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三第22頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三花粉落到雌蕊柱頭上以后,在柱頭上黏液的刺激下,花粉開始萌發(fā)并形成花粉管,花粉管沿著花柱向胚珠方向生長,到達(dá)胚珠后從珠孔繞過卵細(xì)胞進(jìn)入胚囊,到達(dá)胚囊中卵細(xì)胞和極核之間,這時花粉管的前端破裂,兩個精子釋放出來,其中一個精子與兩個極核結(jié)合形成受精極核,另一個精子與卵細(xì)胞結(jié)合形成受精卵,這是被子植物特有的雙受精現(xiàn)象4、受精過程第23頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三第24頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三第25頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三花雄蕊雌蕊花藥花粉粒精子精子子房胚珠胚囊子房壁珠被卵細(xì)胞兩個極核受精卵受精極核胚胚乳種皮種子果皮果實有絲分裂有絲分裂1n1n2n1n3n2n2n2n2n胚是一個新個體的幼體5、發(fā)育結(jié)果第26頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三第27頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三四、產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑第28頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三五、影響花藥培養(yǎng)的因素1、材料的選擇接種的花藥時期不同植物的誘導(dǎo)成功率很不相同,就同一種植物來說親本的生理狀況對誘導(dǎo)成功率也有直接影響選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關(guān)鍵①選材第29頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三②選擇合適的花粉發(fā)育時期是提高誘導(dǎo)成功率的重要因素因為并不是任何時期的花粉都可以經(jīng)過培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷組織或胚狀體,花粉發(fā)育的過程中,只有某一個時期對離體刺激敏感。第30頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三一般來說,在單核期,細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時期,花藥培養(yǎng)的成功率最高。即:最適合花藥培養(yǎng)的小孢子發(fā)育時期為單核靠邊期選擇單核期以前的花藥接種,質(zhì)地幼嫩,極易破碎;選擇單核期之后的花藥接種,花瓣已有些松動,又給材料的消毒帶來困難,且難以挑選到單核期的花藥。③花藥培養(yǎng)時期的選擇④其它時期選擇的缺點第31頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三⑦花藥培養(yǎng)時間為了挑選到單核期的花藥,通常選擇完全未開放的花蕾。盛開的或略微開放的花,都不宜選作實驗材料。⑥選擇完全未開放花蕾的原因完全未開放的花蕾,可挑選到單核期的花藥,菌少、易消毒⑤單核期花藥的挑選一般月季的花藥培養(yǎng)時間選在五月初到五月的中旬,即月季的初花期。初花期的花蕾營養(yǎng)狀態(tài)及生理狀態(tài)會比較好,可能提高花粉的誘導(dǎo)成功率第32頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三例題:月季花藥培養(yǎng)時的花粉粒最好是()
A、四分體時期B、單核居中期
C、單核靠邊期D、二核或三核花粉粒C2、培養(yǎng)基:花藥培養(yǎng)基所采用的培養(yǎng)基可能因植物的不同而有所變化小麥中為N6,馬鈴薯、月季中為MS,油菜中為B5培養(yǎng)基3、其他因素親本植株的生長條件、材料的低溫預(yù)處理以及接種的密度等對誘導(dǎo)成功都有一定的影響第33頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三六、實驗操作(一)材料的選取②某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色,需采用焙花青-鉻礬法,這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。①最常用的方法有醋酸洋紅法1、方法第34頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三①醋酸洋紅法染色機(jī)理醋酸洋紅為堿性染色劑,而花粉細(xì)胞內(nèi)有染色體,染色體主要成分是DNA和蛋白質(zhì),易被堿性染料著色染成紅色
。將體積分?jǐn)?shù)45%的醋酸100ml煮沸,緩緩加入1g洋紅,在加熱回流8h,冷卻至50℃,過濾即可。②醋酸洋紅的配置2、醋酸洋紅法第35頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三第36頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三將花藥放在載玻片上,加一滴質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%的醋酸洋紅,用鑷柄將花藥搗碎,蓋上蓋玻片在顯微鏡下檢查。③染色操作3、焙花青—鉻釩法將無水酒精與冰醋酸按體積比為3:1的比例混勻①卡諾氏固定液的配制方法第37頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三花藥應(yīng)該在卡諾氏固定液中固定20min,然后取出放在載玻片上,加焙花青—鉻釩溶液染色,蓋上蓋玻片后在顯微鏡下檢查。將5g鉻明礬[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸餾水中,溶解后加入0.1g焙花青,混勻并加熱至沸騰,煮沸5分鐘后冷卻至室溫,過濾,加蒸餾水定容至100ml。②焙花青—鉻釩溶液的配制方法③染色操作第38頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三(二)材料的消毒1、酒精處理①花蕾用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精浸泡30秒,立即取出。②無菌水清洗③無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分第39頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三2、消毒液處理①放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中2~4分鐘(也可質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液)②無菌水沖洗3~5次用于培養(yǎng)花藥,實際上多數(shù)未熟,由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護(hù),通常處于無菌狀態(tài),所以只要將整個花蕾或幼穗消毒即可。第40頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三在無菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥②要徹底去除花絲,因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成立即將花藥接種于培養(yǎng)基上,通常每瓶接種花藥7-10個。1、剝?nèi)』ㄋ帰傥饟p傷花藥,以免誘導(dǎo)出非花粉愈傷組織2、接種注意:(三)接種和培養(yǎng)第41頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三①培養(yǎng)條件:溫度控制在25℃左右,不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。
3、培養(yǎng)②培養(yǎng):一般經(jīng)過20-30天培養(yǎng)后,會發(fā)現(xiàn)花藥開裂,長出愈傷組織或釋放出胚狀體長出愈傷組織則將愈傷組織及時轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上,以便進(jìn)一步分化出再生植株③注意:如果花藥開裂釋放出胚狀體,則一個花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大量幼小植株,必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開,分別移植到新的培養(yǎng)基上,否則這些植株將很難分開。第42頁,講稿共45頁,2023年5月2日,星期三在花藥培養(yǎng)中,特別是通過愈傷組織形成的花粉植株,常常會出現(xiàn)染色體倍性的變化(主要原因是營養(yǎng)核和生殖核融合造成的)4、鑒定和篩選第43頁,講稿共45
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