基因工程菌苗

基因工程菌苗第1頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

細(xì)菌一旦獲得耐藥性，存在與細(xì)菌染色體、質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座子中的耐藥基因就可通過(guò)轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、接合和轉(zhuǎn)座等方式，將抗性基因傳播到其他敏感菌，使之成為抗藥菌株，給臨床傳染病的治療帶來(lái)困難。據(jù)WHO1996年報(bào)告，全球每年死亡約5190萬(wàn)人，其中1/3約1730萬(wàn)死于傳染病。第2頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月新病原體不斷出現(xiàn)與鑒定，新的疫苗研制也相繼開(kāi)始。重要病原體全基因測(cè)序的開(kāi)展和完成，及類似生物表型的不同菌屬間的同源序列和異源序列的發(fā)現(xiàn)，對(duì)抗感染研究來(lái)說(shuō)，像進(jìn)行了一場(chǎng)革命，不僅會(huì)促進(jìn)病原體致病和發(fā)病機(jī)制的研究，也會(huì)開(kāi)闊和調(diào)整菌苗研究的策略和思路。目前已完成500余種病毒的全基因測(cè)序。第3頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月完成的正在進(jìn)行的將要進(jìn)行的流感嗜血桿菌（Haemophilusinfluenzae）放線性放線菌（Actinobacillusactinomycetemcomitans）彎曲桿菌（Campylobacterjejuni）生殖道支原體（Mycoplasmagenitolium）枸巢曲霉桿菌（Aspergillusmidulans）流產(chǎn)布氏桿菌（Brucellaabortus）肺炎支原體（Mycoplasmapneumoniae）枯草桿菌（Bacillussubtilis）杜克雷嗜血桿菌（Haemophilusducreyi）幽門螺桿菌（Helicobacterpylori）沙眼衣原體（Chlamydiatrachomatio）鳥(niǎo)分枝桿菌（Mycobacteriumavium）伯氏疏螺旋體（Borreliaburgdorferi）糞腸球菌（Enterococcusfaecalis,E.faecium）多殺巴斯德菌（Pasteurellamultocida）人類重要病原菌全基因測(cè)序現(xiàn)狀

第4頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月E.coliK12軍團(tuán)菌（Legionellapneumopbila）牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonasgingvalis）肺炎球菌（Streptococcuspneumoniae）麻風(fēng)分枝桿菌（Mycobacterunleprae）鼠傷寒沙門氏菌（SalmonellaserotypeTyphimurium）梅毒螺旋體（Treponemepallidun）淋病腦膜炎奈瑟氏球菌（Neisseriagonorrhoeae,N.meningitidis）布氏錐蟲(chóng)（Trypanosomabrucei）

解脲原體（Ureoplasmaurealyticum）亞性瘧（plasmodiumfalciparum）痢疾桿菌（Shigella）綠膿桿菌（Pseudomonasaeruginosa）大型利什曼原蟲(chóng)（Leishmaniamajor）金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）霍亂弧菌（Vibriocholerae）化膿鏈球菌（Streptococcuspyogenes）第5頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)目前應(yīng)用的菌苗及其存在問(wèn)題

一、目前應(yīng)用菌苗的類別

按菌苗所含的成份，菌苗可分為3類，即減毒活菌疫苗、滅活死菌疫苗、純化的多糖或蛋白成份疫苗。第6頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1、減毒活菌疫苗如卡介苗（BCG），是巴斯德研究院A.Calmette和Guerin,C等（1921）將一株牛型強(qiáng)毒結(jié)核菌在甘油-膽汁-馬鈴薯培養(yǎng)基上傳230代后（13年），獲得的對(duì)動(dòng)物不致病，但產(chǎn)生抗結(jié)核免疫反應(yīng)的菌苗即BCG。對(duì)免疫嬰幼兒有保護(hù)效果。后來(lái)發(fā)現(xiàn)對(duì)成人的保護(hù)效果波動(dòng)范圍很大，對(duì)其減毒機(jī)制始終不清。直至近年來(lái)完成結(jié)核分枝桿菌全基因測(cè)序后，與有毒牛型結(jié)核分枝桿菌全基因序列進(jìn)行比較，方知BCG缺失了毒力相關(guān)基因?？傊?，對(duì)胞內(nèi)菌目前還是用減毒的活菌苗。第7頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.滅活死菌疫苗通過(guò)加熱處理或福爾馬林、戊二醛、β-內(nèi)酯等化學(xué)處理得到如霍亂死菌苗，百日咳死菌苗等。死菌苗的主要優(yōu)點(diǎn)是穩(wěn)定，缺點(diǎn)是需要多次免疫才能得到好的保護(hù)效果。滅活死菌苗須加佐劑以提高免疫效果。第8頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.亞單位或成分苗

①?gòu)募?xì)菌培養(yǎng)液中提取、用化學(xué)方法脫毒的類毒素苗，如破傷風(fēng)類毒素（TT）、白喉類毒素（DT），免疫后誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的抗血清能特異中和TT破傷風(fēng)類毒素或DT白喉類毒素，其保護(hù)效果可達(dá)95%以上。由于毒素純化方法的改進(jìn)，產(chǎn)品的副作用很??；

第9頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月②莢膜細(xì)菌純化的多糖菌苗，可誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體能保護(hù)機(jī)體抵抗入侵莢膜菌的感染。如嗜血性流感桿菌b(Hib)、傷寒桿菌Vi多糖等多糖苗，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生T細(xì)胞非依賴的抗體反應(yīng)，其特點(diǎn)是誘導(dǎo)產(chǎn)生短期的IgM抗體，缺乏免疫記憶，對(duì)不到18個(gè)月幼兒的多糖苗免疫原性差，而沒(méi)有保護(hù)效果。因此多糖類的菌苗急需改進(jìn)。第10頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月③目前，將多糖與載體蛋白共價(jià)連接，通過(guò)載體蛋白提供適當(dāng)?shù)腡細(xì)胞表位，由T細(xì)胞協(xié)助B細(xì)胞產(chǎn)生多糖特異性抗體，使T細(xì)胞非依賴性抗原轉(zhuǎn)變?yōu)門細(xì)胞依賴抗原，這類菌苗稱為多糖-蛋白結(jié)合苗。如嗜血流感桿菌b(Hib)的結(jié)合苗已在幾個(gè)國(guó)家獲得證書，證明對(duì)不到18個(gè)月的兒童有很高的免疫原性，能誘導(dǎo)免疫記憶，免疫球蛋白的類型轉(zhuǎn)換及抗體親和力成熟，明顯減少Hib菌的入侵感染與發(fā)病。第11頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月目前可用于人群的菌苗

菌苗類型預(yù)防的疾病國(guó)內(nèi)國(guó)外1卡介苗（BCG）活菌苗結(jié)核病i.di.d2布氏病菌苗（104M）活菌苗布氏菌病d.s—3鼠疫菌苗（EV）活菌苗鼠疫d.s—4炭疽菌苗（A16R,CTN-1,V770-NP-1）活芽胞苗炭疽d.s—

炭疽菌苗滅活菌苗炭疽s.c第12頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月菌苗類型預(yù)防的疾病國(guó)內(nèi)國(guó)外5百日咳菌苗類毒素滅活菌苗百日咳炭疽i.m—

—

i.m6腦膜炎球菌苗（A、C群）多糖成分腦膜炎i.ms.c7腦膜炎球菌苗（A/C/Y/W-35群）多糖成分腦膜炎—

s.c8流腦A群多糖-破傷風(fēng)蛋白結(jié)合菌苗多糖-蛋白結(jié)合苗流行性腦脊髓膜炎i.m—

9傷寒菌苗（Ty21a）傷寒菌苗（Ty21a）傷寒Vi多糖苗活菌苗滅活全菌苗多糖成分傷寒傷寒傷寒—

—

i.mp.os.ci.m10精制破傷風(fēng)菌苗類毒素破傷風(fēng)i.mi.m11精制白喉菌苗類毒素白喉i.m—

第13頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月菌苗類型預(yù)防的疾病國(guó)內(nèi)國(guó)外12白-百-破三聯(lián)苗（DTP）類毒素白喉，百日咳i.m滅活全苗破傷風(fēng)—

i.m13白-破-百三聯(lián)（DTaP）類毒素白喉，百日咳i.m白-破-百三聯(lián)苗滅活全苗破傷風(fēng)—

i.m14白-破二聯(lián)苗（DT或Td）類毒素白喉，破傷風(fēng)

i.mi.m15鉤端螺旋體菌苗外膜成苗鉤端螺旋體病s.c—

16霍亂弧菌（O139）滅活全菌苗霍亂s.cS,c/i.d17CVD103HgR基因工程活苗霍亂—

p.o18肺炎球菌（23型）多糖成分肺炎—

p.o第14頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月菌苗類型預(yù)防的疾病國(guó)內(nèi)國(guó)外19嗜血流感桿菌B型（Hib）類毒素腦膜炎—i.m20

DTP-嗜血流感桿菌B型結(jié)合苗滅活的全菌苗白喉，百日咳，—i.m（DTP-Hib）細(xì)菌多糖-蛋白結(jié)合菌苗破傷風(fēng)，腦膜炎—i.m21

福氏2a與宋內(nèi)雙價(jià)痢疾菌苗（FSM2117）基因工程活苗痢疾p.o—F2a與宋內(nèi)雙價(jià)痢疾菌苗（FS）基因工程活苗痢疾p.o

—22萊姆病菌苗（OspA）重組OspA萊姆病s.c注：i.d皮內(nèi)，s.c皮下，d.s劃痕，i.m肌注，p.o口服

第15頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）研制菌苗的新方法（Newmethodofproducebacteriavaccine）1、研制菌苗的新方法（newmethods）對(duì)細(xì)菌感染發(fā)病機(jī)制認(rèn)識(shí)的深入及涉及許多病原體毒力決定簇如黏附素、侵襲素、莢膜多糖、脂多糖、毒素等編碼基因及其產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能的分析與鑒定，是不斷設(shè)計(jì)和研制新型疫苗的重要基礎(chǔ)。針對(duì)不同的病原體致病特點(diǎn)和毒力決定簇的特點(diǎn)，發(fā)展和產(chǎn)生了不同的菌苗研制方法，得到不同類型的菌苗。現(xiàn)將目前研制菌苗的新方法及可能的后選菌苗列于表5-4。第16頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月表6-4目前研制菌苗的新方法及可能的候選菌苗1

純化亞單位成份嗜血流感桿菌（莢膜多糖）（H.influenze）奈氏腦膜炎球菌（莢膜多糖）(N.meningitidia)百日咳菌血凝素（Hemagglutinin）2

合成肽

淋球菌（黏附菌毛）（N.gonorihoeae,Adhernce-pili）肺炎鏈球菌（Streptococcus）3核酸疫苗結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis）產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌（L.monocytogenes）沙眼衣原體（Chlamydiatrachomatio）伯氏疏螺旋體（Borreliaburgdorferi）第17頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4構(gòu)建突變株（化學(xué)、輻射、點(diǎn)突變或轉(zhuǎn)座子插入等）傷寒菌苗Ty21a(S.typhi,Ty21a)霍亂菌苗（V.Cholerae）CVD103HgRETEC苗5與CT-B，LT，TT，DT等化學(xué)結(jié)合

傷寒Vi抗原痢疾菌苗,嗜血流感桿菌苗6構(gòu)建重組細(xì)菌載體

重組病毒載體HbsAg腸沙門氏菌載體宋內(nèi)氏痢疾菌LPS痢疾菌載體痢疾多價(jià)菌苗耶爾森氏菌載體

BCG載體幽門螺桿菌溶酶素腺病毒載體霍亂菌載體第18頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.目前菌苗存在的問(wèn)題（1）盡管疫苗免疫取得了巨大的成功，但小于5歲的嬰幼兒每年死于傳染病的數(shù)目仍然很高。如瘧疾幾種腹瀉病等均無(wú)有效疫苗，雖然卡介苗（BCG）使用幾十年了，甚至納入WHO的計(jì)劃免疫，但其效果波動(dòng)很大0%-80%。因此急需安全有效的結(jié)核菌苗問(wèn)世。第19頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（2）與病毒相比,基因工程菌苗及細(xì)菌核酸苗報(bào)導(dǎo)明顯為少。至今國(guó)際上還沒(méi)有成功滿意的重組細(xì)菌苗提供人群使用。關(guān)于細(xì)菌毒素的分子及其編碼基因與調(diào)控機(jī)制都比較清楚，因此，有關(guān)毒素的基因工程菌苗的構(gòu)建或載體構(gòu)建等均無(wú)問(wèn)題。但細(xì)菌外膜上的其它結(jié)構(gòu)如黏附分子，侵襲蛋白，鞭毛及脂多糖等分子結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜，編碼基因多呈叢分布，如LPS的表達(dá)涉及近30個(gè)基因的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，操作起來(lái)尚有困難。因此還有毒力相關(guān)或保護(hù)相關(guān)基因的分離、克隆和表達(dá)等基因工程菌苗研制的前期工作要做。第20頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月理想菌苗的條件P192安全，無(wú)毒性遺傳性狀穩(wěn)定，無(wú)致癌性，無(wú)致畸變或致流產(chǎn)性。結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單清楚，可生物降解，有生物相容性，與組織抗原無(wú)免疫學(xué)交叉反應(yīng)。對(duì)各年齡組人群均有長(zhǎng)時(shí)間的免疫保護(hù)作用。多價(jià)，有更大的覆蓋面，最好一次性免疫。能口服，能有效誘導(dǎo)黏膜免疫。為大量人群應(yīng)用，疫苗必須廉價(jià)。易于生產(chǎn)，儲(chǔ)存及服務(wù)，不需冷藏。第21頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)重要細(xì)菌基因工程苗的研究進(jìn)展P193

現(xiàn)有傳統(tǒng)菌苗對(duì)重要細(xì)菌感染性疾病存在的問(wèn)題：①現(xiàn)有菌苗保護(hù)效果不好；②副反應(yīng)大；③難以培養(yǎng)的細(xì)菌；④可誘發(fā)癌變，有嚴(yán)重后遺癥；⑤新出現(xiàn)的病原體或新變異病原菌。第22頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、霍亂菌苗P193霍亂是由革蘭氏陰性霍亂弧菌引起的烈性腸道傳染病。臨床表現(xiàn)輕重不一，輕者僅有輕度腹瀉；重者劇烈吐瀉大量米泔水樣排泄物，并引起嚴(yán)重脫水、肌肉痙攣，酸鹼失衡、周圍循環(huán)衰竭及急性腎功能衰竭。第23頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一.分類：O1群霍亂弧菌：古典生物型和埃爾托生物型。不典型O1群霍亂弧菌非O1群霍亂弧菌：O139第24頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月根據(jù)菌體抗原成份可分三種血清型根據(jù)弧菌O抗原不同，分成多個(gè)血清群。第Ⅰ群有A、B、C三種主要抗原成分，A抗原為特異性抗原，與其他兩個(gè)抗原成分相結(jié)合而成為:稻葉型（原型，含AC）小川型(異型，含AB)彥島型(中間型，含ABC)。第25頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第26頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第27頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第28頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月?lián)w抗原霍亂弧菌可分為200個(gè)以上的血清型目前流行的霍亂為O1和O139兩種血清型。目前使用的霍亂疫苗是滅活全菌體或全菌與其毒素的結(jié)合物，對(duì)成人有效，但不能誘發(fā)兒童免疫反應(yīng)。第29頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.BS/WC滅活菌苗由提取的或重組的霍亂毒素B亞單位（BS）及殺死的全菌細(xì)胞（WC）組成。2.CVD103-HgR減毒活菌苗在美國(guó)獲準(zhǔn)，為一次劑量的霍亂活菌苗。它是由霍亂經(jīng)典型569B菌株構(gòu)建而成的CVD103減毒株（CTA-B+）。并在其染色體溶血素基因nlyA位點(diǎn)插入汞抗性基因作為篩選標(biāo)記。3.以沙門氏菌為載體表達(dá)霍亂弧菌O抗原的傷寒/霍亂菌苗。4.O139減毒菌苗候選株CVD112及Bengal-15

霍亂菌苗有四類：第30頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月另外，發(fā)現(xiàn)霍亂毒素（CT）是很強(qiáng)的黏膜免疫原，能有效刺激黏膜sIgA及血清IgG反應(yīng)，及黏膜免疫記憶反應(yīng)，對(duì)CT及CTB的免疫佐劑活性進(jìn)行了大量的研究，對(duì)多種蛋白、多糖及病毒、細(xì)菌等的免疫佐劑效果得到肯定的認(rèn)識(shí)。第31頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第32頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第33頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第34頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月CT/CT-B佐劑應(yīng)用的抗原

抗原（佐劑）途徑參考文獻(xiàn)蛋白質(zhì)

破傷風(fēng)類毒素（CT）p.o（Jacksonetal,1993）鏈球菌M蛋白（CT-B）i.m（BessenandTischetti,1988）鏈球菌

（CT-B）

S.Mutans抗原I/II（CT/CT-B）p.o（Czerkinskyetal,1989;WuandRusell,1993）S.Mutans蛋白質(zhì)抗原（CT-B）

流感病毒溶血素（CT/CT-B）i.m(Takahashietal.,1990)呼吸道合胞病毒FG糖蛋白（CT/CT-B）p.o,i.m（Tomasietal,1994）S.mutansGtf.1：：phoA融合蛋白i.m（Walsh,1993）第35頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月多糖p.o(Tomasietal,1994)沙門氏菌多糖（CT-B）p.o（Orretal.,1994）P．a(chǎn)eruginosa多糖（CT）p.o（AbrahamandPobinson,1991）病毒

完整流感病毒（CT）p.o(ChenandStrober1990)仙臺(tái)病毒（CT）p.o,i.m（Nedrudetal.1987）Neasles病毒（CT-B）i.n(Mulleretal,1995)呼吸道合胞病毒（RSV）i.n(Reumanetal,1991)細(xì)菌/原生動(dòng)物

幽門螺桿菌（CT）p.o(CzinnandNedrud,1991)弓形體（CT）p.o（Bourguinetal.,1991）阿米巴原蟲(chóng)多肽-CT-B融合蛋白p.o(Zhangetal,1995b)第36頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、痢疾菌苗痢疾是我國(guó)常見(jiàn)和多發(fā)傳染病，其發(fā)病率始終居24種法定傳染病的前二位。主要病原體為痢疾桿菌，其致病特點(diǎn)是定居侵入結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞，且能迅速溶解吞噬泡膜進(jìn)入胞漿.臨床表現(xiàn)為發(fā)燒，膿血便，腹瀉，里急后重，甚至引起神經(jīng)癥狀和血尿綜合癥。第37頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月痢疾菌共有4群：A志賀氏痢疾菌（Shigelladysenteriae），B福氏痢疾菌（S.flexneri），C鮑氏痢疾菌（S.bordii）和D宋內(nèi)氏痢疾菌（S.sonnei）。在我國(guó)及其他發(fā)展中國(guó)家主要流行型是福氏痢疾和宋內(nèi)氏痢疾。按其菌膜表面LPS-O抗原分為44個(gè)血清型。第38頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.死菌苗五、六十年代大量動(dòng)物及人體實(shí)驗(yàn)證明滅活的痢疾全菌非口服途徑，雖可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生高的血清抗體，但沒(méi)有保護(hù)效果；用提取的宋氏痢疾菌的核糖體，皮下免疫途徑，在豚鼠和猴中證實(shí)可提供特異保護(hù)，證明LPS-O多糖是保護(hù)性抗原；Robbins(1992)將痢疾菌LPS與不同蛋白載體（TT，DT）交聯(lián)進(jìn)行非口服途徑免疫能誘導(dǎo)豚鼠產(chǎn)生高的血清抗體反應(yīng)，豚鼠眼模型證明有一定保護(hù)作用。宋內(nèi)氏LPS-O-蛋白（TT，DT）有保護(hù)作用，Robbins（1996）將多糖-蛋白結(jié)合苗用于越南士兵，報(bào)告宋氏多糖-蛋白結(jié)合苗保護(hù)效果達(dá)70%。第39頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.活菌苗采取了多種方法進(jìn)行痢疾菌野生毒株的減毒研究。Meitert等（1984）在膽鹽平皿連續(xù)傳代32次獲得S.f2a減毒株IstratiT32；80年代初中國(guó)近一萬(wàn)人現(xiàn)場(chǎng)觀察，證實(shí)T32菌苗安全，有保護(hù)活性，效果與免疫次數(shù)和劑量有關(guān)。

第40頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月80年代中國(guó)國(guó)內(nèi)以T32為受體株開(kāi)始致力于構(gòu)建雙價(jià)痢疾菌苗株的研究。牟兆欽等，1989年將一編碼宋內(nèi)氏菌LPS-O抗原的大質(zhì)粒轉(zhuǎn)移至T32菌中獲得福氏2a宋內(nèi)氏雙價(jià)痢疾菌苗株FS-18，F(xiàn)SM2117；宋樹(shù)珍等構(gòu)建了FS痢疾雙價(jià)菌苗株，其中FSM2117識(shí)別福氏2a和識(shí)別宋內(nèi)氏痢疾苗LPS-O抗原；林紀(jì)勝(1999)構(gòu)建了S.flexenri2a和S.dysenteriaI雙價(jià)痢疾菌株，有雙價(jià)免疫原性，現(xiàn)FSM2117與FS兩株痢疾雙價(jià)菌苗均已獲國(guó)家新生物制品證書和試生產(chǎn)文號(hào)。

３.基因工程雙價(jià)活菌苗第41頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月90年代國(guó)內(nèi)外開(kāi)展了痢疾侵襲活菌苗的研究。主要針對(duì)痢疾菌毒力相關(guān)基因的插入失活或缺失的方法，構(gòu)建減毒突變株，目的是保存其入侵能力，限制其無(wú)限繁殖能力。對(duì)其免疫原性和保護(hù)效果進(jìn)行了大量實(shí)驗(yàn)室研究。國(guó)外工作主要集中在福氏2a，福氏5型或Y型。構(gòu)建出福氏2a-宋內(nèi)氏雙價(jià)侵襲的菌苗株，目的是降低目前非侵襲雙價(jià)苗的免疫劑量，提高免疫原性。

痢疾桿菌III型分泌系統(tǒng)將不同侵襲蛋白分泌和導(dǎo)入宿主細(xì)胞的調(diào)節(jié)分子與效應(yīng)分子的鑒定，可能會(huì)找到構(gòu)建痢疾基因工程菌苗新的靶分子和靶基因。第42頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、產(chǎn)毒性大腸桿菌苗腸毒素大腸桿菌（ETEC）是嬰幼兒和旅游者腹瀉的主要病原菌。全球年病例為2.1億次，死亡病例達(dá)38萬(wàn)，多為5歲以下的兒童。其致病特征是分泌ST和LT毒素及菌膜表面存在致病相關(guān)的菌毛抗原CFAs。正在采用減毒痢疾菌為載體進(jìn)行LT或菌毛抗原的表達(dá)，進(jìn)行多價(jià)菌苗研制的前期工作，或用重組的卡介苗為載體進(jìn)行LT-B的表達(dá)研究。國(guó)內(nèi)早年構(gòu)建表達(dá)K88、K99及LT的幼畜工程菌苗已投入生產(chǎn)。（封套抗原Ｋ、脂多糖毒素ＬＴ）第43頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月四、腸出血性大腸桿菌苗（EHEC苗）大腸桿菌O157：H7是腸出血性大腸桿菌的主要病原菌，首次鑒定于1982年。1996年日本大規(guī)模爆發(fā)EHECO157出血性腸炎以來(lái)，引起國(guó)際上的極大關(guān)注。致病特點(diǎn)通過(guò)特殊的黏附分子（intimin）黏附靶器官，產(chǎn)生類志賀毒素和腸溶血素（hly）等，出血性腹瀉，溶血性尿毒綜合癥，血栓形成性血小板減少性紫癜。

第44頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月當(dāng)前研制的菌苗O157多糖綠膿桿菌外毒素蛋白的結(jié)合苗（O157LPS-rEPA），已進(jìn)行I期臨床觀察，認(rèn)為安全，有免疫原性。重組的Stx的減毒活菌苗，重組Stx亞單位苗及鈷照射的全菌死菌苗正在進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察。第45頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月五、傷寒桿菌P195傷寒桿菌能入侵腸黏膜上皮細(xì)胞，在吞噬細(xì)胞酸性吞噬泡內(nèi)存活，經(jīng)淋巴系統(tǒng)進(jìn)入血流引起菌血癥，近而侵犯肝，脾，腎等多種臟器與器官，并大量繁殖而再次引起嚴(yán)重菌血癥，臨床表現(xiàn)為高熱，胃腸炎，敗血癥等。世界傷寒桿菌感染病例約300萬(wàn)，死亡人數(shù)50萬(wàn)。滅活死菌苗已有70余年的歷史，由于副反應(yīng)較大的問(wèn)題促進(jìn)了活苗的研制。第46頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月①口服Ty21a減毒活菌苗是Germamier經(jīng)NTG誘導(dǎo)后，篩選得到傷寒VigalE減毒株。它缺乏UDP-4-半乳糖異構(gòu)酶而不能正常合成胞壁脂多糖，在體內(nèi)外有半乳糖供給情況下可正常合成細(xì)胞壁。②注射用傷寒Vi多糖苗表面抗原Vi是位于菌膜LPS外的莢膜多糖抗原，由Ｎ-乙酰-氨基糖醛酸高度聚合而成，可阻止外膜與補(bǔ)體的結(jié)合，對(duì)菌的入侵也有一定作用。目前正進(jìn)行Vi多糖與蛋白交聯(lián)的結(jié)合苗的研制。第47頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月六、結(jié)核菌苗P196據(jù)WHO估計(jì)，全球每年增加結(jié)核病人達(dá)800萬(wàn)，年死亡病例為300萬(wàn)。全球有1/3的人（即17億）曾感染過(guò)結(jié)核，其中90%-95%的人感染初期并無(wú)癥狀，此時(shí)雖然機(jī)體的免疫反應(yīng)控制了初始的感染，但并未完全排除病原體。第48頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月最近的研究進(jìn)展證明T細(xì)胞不僅只分泌TH1類的細(xì)胞因子激活感染的宿主細(xì)胞殺傷病原體，而且通過(guò)CTL溶解感染靶細(xì)胞和胞內(nèi)病原體，CD8+T細(xì)胞在直接殺傷胞內(nèi)結(jié)核桿菌有其特殊作用。結(jié)核桿菌是專性需氧胞內(nèi)致病菌，由于血清各種檢測(cè)方法交叉反應(yīng)嚴(yán)重，至今不甚清楚它的抗原決定簇的定位及數(shù)目，其毒力機(jī)制不清。第49頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月卡介苗（BCG）是預(yù)防結(jié)核病的唯一活菌苗，經(jīng)大量資料的統(tǒng)計(jì)指出BCG的效果波動(dòng)很大（0%-80%）。以及在艾滋病人和HIV攜帶者接種BCG后發(fā)生全身性感染，促使人們研制新一代結(jié)核菌苗。顯然核酸免疫是結(jié)核菌苗的重要研究方向。

第50頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月卡介苗（ＢＣＧ）由于其廣泛應(yīng)用的安全性和免疫佐劑作用，因而以ＢＣＧ為載體的重組疫苗研究日益被科學(xué)家們重視。

卡介苗可長(zhǎng)期在體內(nèi)存活，其增殖可達(dá)幾個(gè)月，生長(zhǎng)緩慢可誘發(fā)強(qiáng)的，持續(xù)的免疫應(yīng)答，具有佐劑活性，可誘發(fā)TH1型免疫反應(yīng)。第51頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月七、嗜血流感桿菌苗（Hib）P197

嗜血流感桿菌（Hib）為G-有莢膜短小桿菌，其莢膜多糖有特異型免疫原性，其中b型毒力最強(qiáng)，主要引起化膿性感染如急性肺炎、腦膜炎、敗血癥等，常在流感、麻疹、百日咳、肺結(jié)核等之后合并感染。第52頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

Hib莢膜多糖（磷酸聚核糖基核糖醇）（PRP）是Hib多糖菌苗的有效成分，將PRP與載體蛋白如白喉（DT）、破傷風(fēng)類毒素（TT）腦膜炎球菌外膜蛋白（OMP）等共價(jià)交聯(lián)成Hib莢膜多糖-蛋白結(jié)合苗。證明Hib-蛋白結(jié)合苗對(duì)嬰幼兒使用安