基因工程復(fù)習(xí)題75分

一、轉(zhuǎn)導(dǎo)：由噬菌體和細(xì)胞介導(dǎo)的遺傳信息轉(zhuǎn)移過程轉(zhuǎn)染：以噬菌體為載體，不經(jīng)過蛋白包裝成顆粒，而是用DNA連接酶使噬菌體質(zhì)粒：是獨(dú)立于以外的能自主的雙鏈閉合環(huán)狀DNA分子庫：特定生物體全組的集合（天然存在Ti質(zhì)粒：在根瘤土壤桿菌細(xì)胞中存在的一種外自主的環(huán)形雙鏈DNA分子，它SD序列：mRNA的核糖體結(jié)合位點(diǎn)，含有一個(gè)啟始子和一段同核糖體16SRNA3’末端堿基互補(bǔ)的序列，3-9個(gè)核苷酸,富含嘌呤,位于起始子上游3-11個(gè)核苷酸處工程：通過操作將目的或DNA片段與合適的載體連接轉(zhuǎn)入目標(biāo)生物細(xì)胞，通過、轉(zhuǎn)錄、翻譯外源目的以及蛋白質(zhì)的活性表達(dá)，使轉(zhuǎn)生物獲得新的遺傳性報(bào)告：編碼產(chǎn)物能夠被快速測(cè)定、不依賴于外界壓力的一類cDNAlibrary：將生物特定的組織或特定發(fā)育時(shí)期的全部mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，并穿梭質(zhì)粒載體：人工構(gòu)建的、具有兩種不同起點(diǎn)和選擇標(biāo)記、可以在兩種不同的寄主細(xì)胞中存活和的質(zhì)粒載體。8bpDNA①增加樣品密度，使其增加，以確保DNA均勻沉入加樣孔內(nèi)smid（cosmid人工：常用的人工有酵母人工和細(xì)菌人工DNADNADNADNA人工構(gòu)建的λ噬菌體載體分類：噬菌體載體、質(zhì)粒載體、單鏈?zhǔn)删w載體、SV40甲基化酶的甲基供體（S-腺苷甲硫氨酸，甲基受體（A、8bpREE.coliLeu2+、His+、Ura3+、高效、快速的偶聯(lián)以及起始反應(yīng)物比較穩(wěn)定，亞磷酰胺三酯法的合成方向是由3'端向PCR產(chǎn)生噬菌斑插入型入載體：入載體上的標(biāo)記空載的λDNA大于包裝下限，能被包裝RAPDDNA（RandomamplifiedpolimophicDNARAPD技術(shù)一出現(xiàn)，便以它的簡(jiǎn)便、快捷和多態(tài)性撿出率高而引起科學(xué)工作者的極大。目前這一技術(shù)已被廣泛用于遺傳圖譜構(gòu)建、群體遺傳結(jié)構(gòu)分析、DNA分析和定位F.BolivarR.L.Rodriguez①起點(diǎn)ori：pMB1系列（來源于ColE1）的高拷貝型起③pSC101的Tetr長(zhǎng)度24②由于轉(zhuǎn)化的是完整植株的卵細(xì)胞卵或早期胚胎細(xì)胞導(dǎo)入的DNA分子整合效率較高Taqman技術(shù)SYBRGreenⅠ熒光染色法FRET(熒光能量轉(zhuǎn)移)技PEG介導(dǎo)的原生轉(zhuǎn)TiT-DNA、Vir、ConOri4答：①可利用原核細(xì)胞系統(tǒng)進(jìn)行克隆、表②也可利用真核細(xì)胞系統(tǒng)進(jìn)行表答：1.μgDNA答：1.tac改變起始下面的幾組子，能提高翻譯的起始效率REDNADNADNARE答：1EB受體細(xì)胞型與載體所含的選擇標(biāo)記匹配有利于外源蛋白表達(dá)產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)的積累或促進(jìn)外源的高效分泌表達(dá)外源可以高效表達(dá)和穩(wěn)定遺傳具有多種酶的單一酶切位點(diǎn)(MCS)，可供外源的插能在宿主細(xì)胞中自主，并實(shí)現(xiàn)外源的增殖PCR法篩選文庫的原理答：利用合適的引物，以從初選出來的陽性克隆中質(zhì)粒為模板進(jìn)行PCR，通過對(duì)DNA新鏈的合成方向?yàn)?’3’（1）①能夠識(shí)別和除去外源中的內(nèi)含子，剪接形成成③外源導(dǎo)入細(xì)胞上帶有一定的自發(fā)性和盲目性整合的拷貝數(shù)和位置都不能答：目的插入到Ti衍生的載體上的T-DNA區(qū)→形成重組DNA→重組DNA轉(zhuǎn)入含有的農(nóng)桿菌中→農(nóng)桿菌侵染植物→植物傷口處細(xì)胞分泌酚類化合物→菌內(nèi)Vir表→含有外源目的的T-DNA整合到植物細(xì)胞組中。DNA（ocDNADNADNA C實(shí)用溫度：但在37℃下粘性末端的結(jié)合很不穩(wěn)定。所以一般采用 C（二）（三）ATPATPT4DNA10umol-1umol/L，T7DNA2）3’→5答：1mRNApolyAmRNADNASouthernbloting→Southern洗膜)→雜交結(jié)果的檢測(cè)0℃CaCl2Ca2+與DNA件，SC-DNA外源插入無內(nèi)含子，多用cDNA或化學(xué)合外源與表達(dá)載體的連接處，必須形成正確的DNARNA答：(一)酶的純度：如果存在外切核酸酶污染，就會(huì)消化掉黏性末端的突出部分，從而DNA（）DNA：DNASDS、EDTAA；2.dcmC（五）(Buffer)：酶切時(shí)所需要的酶量要高許多；2.位點(diǎn)偏愛與組文庫相比，cDNA文庫具有的優(yōu)越性答：1.以mRNA為材料，特別適于某些RNA的組結(jié)構(gòu)研究及有關(guān)的克隆分離每一個(gè)cDNA克隆對(duì)應(yīng)于一種mRNA序列，這樣在目的的選擇中出現(xiàn)假陽性的概cDNANCDNARNA洗去未雜交的探針→→分析結(jié)果→挑選出含有插入序列的菌落或噬菌斑答：（一）包涵體