介紹幾種新的感染性標志物1218太工講課件

介紹幾種新的感染性標志物1218太工講本課件PPT僅供大家學習使用學習完請自行刪除，謝謝！本課件PPT僅供大家學習使用學習完請自行刪除，謝謝！本課件PPT僅供大家學習使用學習完請自行刪除，謝謝！本課件PPT僅供大家學習使用學習完請自行刪除，謝謝！介紹幾種新的感染標志物無錫二院胡錫池當前抗感染領域現(xiàn)狀隨著各類侵入性診斷操作的應用，多重耐藥細菌的蔓延，嚴重燒創(chuàng)傷、器官移植病人和放化療病人的增加，醫(yī)院性感染、膿毒血癥和多器官功能衰竭綜合征〔MODS〕的發(fā)生率不斷升高。盡管現(xiàn)代醫(yī)療已取得很大進步，但上述感染并發(fā)癥仍是危重病人晚期死亡的主要原因。因此對這些感染并發(fā)癥進展早期治療顯得尤為重要。然而感染并發(fā)癥的傳統(tǒng)診斷指標存在耗時、敏感性和特異性不高的缺陷。因此，尋找新的，敏感而特異的感染性標志物在當下就顯得尤為重要。幾種新的感染標志物1、降鈣素原〔ProcalcitominPCT〕2、內(nèi)毒素3、(1→3)--D-葡聚糖〔G試驗〕4、半乳甘露聚糖〔GM試驗〕5、呼吸道病毒7項檢測〔直接免疫熒光法〕降鈣素原〔ProcalcitominPCT〕降鈣素原概述降鈣素原是正常人血清中存在，含116個氨基酸組成的糖蛋白，最初由甲狀腺C細胞產(chǎn)生;在非感染或病毒性感染疾病時保持非常低的血清水平，在細菌性感染時含量升高，并與感染程度和預后呈正相關;目前國外認為PCT為一種新的具有創(chuàng)新意義、可用于診斷和監(jiān)控嚴重細菌感染及膿毒血癥、敗血癥等疾病的理想指標，具有高度的敏感性和特異性;PCT含量的變化穩(wěn)定，并出現(xiàn)在疾病的早期〔3-4h〕。半衰期(24h);正常血清水平:100-150pg/ml。哪些情況下降鈣素原會升高全身性細菌感染；嚴重休克、SIRS和MODS。真菌、寄生蟲、立克次體、結(jié)核感染；病毒感染、腫瘤、過敏、自身免疫性疾病及局部感染患者中，PCT水平可輕度升高；PCT的臨床意義早期診斷在感染發(fā)生2-3h血漿PCT濃度就會升高.病情監(jiān)測在膿毒性休克時PCT含量最高，可達1000ng/ml，是正常人的2000倍。隨著感染的恢復PCT也隨著下降。PCT升高幅度依次為Sirs〔全身性炎癥反響綜合癥〕+/—，Sepsis〔敗血癥〕2+、SevereSepsis〔嚴重敗血癥〕3+、SepsisShock〔敗血癥休克〕4+預后判斷動物實驗證明，PCT是一個潛在的致死因子，本身不會啟動膿毒性反響，但可放大并加重膿毒性的病理反響，當PCT含量升高時死亡率也升高。鑒別診斷細菌感染和非細菌性炎癥反響〔自身免疫性疾病等〕的鑒別診斷細菌感染和病毒感染的鑒別診斷〔腦脊膜炎等〕器官移植術后鑒別診斷〔細菌感染、病毒感染、吸收熱、排斥反響、真菌感染等〕膿毒性休克和非膿毒性休克的鑒別診斷PCT的實驗室檢測

免疫發(fā)光法(ILMA)–法國梅里埃公司、美國羅氏該方法敏感性高,特異性強，此法測定的低限值為0.1ng/ml,檢測耗時約2h。SPCT-Q-半定量快速實驗-德國評細替、武漢海特該方法操作簡單、結(jié)果易觀察的特點。其低限值為0.5ng/ml。檢測耗時約0.5h?！矡o錫雷賽公司〕放射免疫學分析法透射免疫濁度法不同人群中血漿PCT的值PCT與其它感染性指標的比較。PCTPSWBC:特異性高：全身性感染既可導致白細胞升高,也可以引起白細胞減少。PCTPSCRP：靈敏度好：PCT可在感染后2個小時后檢測；CRP在炎癥過程開場8～12h后，才能從血清中檢測出。PCTPSIL-1、IL-6、TNF-α:穩(wěn)定性好：PCT的半衰期較長(20～24h)；IL半衰期很短(數(shù)分鐘至幾小時)。E66851108

內(nèi)毒素檢測內(nèi)毒素研究背景1.據(jù)統(tǒng)計，我國每年各種感染病人到達2億人次，發(fā)熱病人到達3億人次，其中G-菌感染占很大比例。由革蘭氏陰性菌所引起的內(nèi)毒素血癥及膿毒血癥是目前臨床上的主要死亡原因之一。早期的數(shù)小時內(nèi)作為臨床上搶救感染性休克的關鍵，因此，早期體液中內(nèi)毒素的正確、快速定量檢測及相應的對癥治療就顯得格外重要。內(nèi)毒素的快速定量測定有助于對G-菌感染的早期診斷、治療方法的選擇及療效的判斷。2.3.4.定義細菌內(nèi)毒素〔Endotoxin〕是G-菌細胞壁上的特有構(gòu)造，內(nèi)毒素為外源性致熱原，它可激活中性粒細胞等，使之釋放出一種內(nèi)源性熱原質(zhì)，作用于體溫調(diào)節(jié)中樞引起發(fā)熱。內(nèi)毒素的主要化學成分為脂多糖〔LPS〕中的類脂A。Shwartzman現(xiàn)象5內(nèi)毒素的生物學效應

發(fā)熱反應1白細胞反應2內(nèi)毒素血癥（ETM）與內(nèi)毒素休克（ETS）3彌漫性血管內(nèi)凝血（DIC）4內(nèi)毒素血癥與臨床疾病的相關性內(nèi)毒素檢測革蘭陰性菌敗血癥的診斷呼吸道感染肝臟感染及肝硬化膽道疾病急性胰腺炎潰瘍性結(jié)腸炎細菌性感染的輔助性診斷、治療和預后判斷原因不明的發(fā)熱外源性輸注的內(nèi)毒素血癥的診斷體液內(nèi)毒素水平增高是嚴重細菌性感染〔尤其是革蘭染色陰性菌〕的一個重要的特異性指標，而且，也是膿毒血癥和全身炎癥反響綜合癥的可靠指標。內(nèi)毒素水平不僅可用于感染類別的鑒別診斷，也可用于感染控制和病情轉(zhuǎn)歸的參數(shù)。因此，建議在適當?shù)臅r候可對內(nèi)毒素的水平作一系列連續(xù)動態(tài)的監(jiān)測。內(nèi)毒素檢測的臨床意義(1→3)--D-葡聚糖(G試驗)半乳甘露聚糖(GM試驗)當前侵襲性真菌感染(IFI)檢測的現(xiàn)狀發(fā)病率呈逐年上升趨勢，且漏診率居高不下。據(jù)尸檢研究發(fā)現(xiàn)，75%的IFI病例在生前漏診，主要原因是IFI的臨床表現(xiàn)不典型易被根底疾病所掩蓋，導致診斷困難。目前常規(guī)微生物學檢查〔直接涂片鏡檢和真菌培養(yǎng)〕耗時長，干擾因素多。而分子生物學檢查〔真菌DNA的檢測〕門檻過高，且不能提示現(xiàn)癥感染。病理檢查常因患者的病情所限難以實施。因此尋找有效的感染性標志物對于快速診斷侵襲性真菌感染、制定正確的治療方案、爭取最正確治療時間，意義重大。真菌感染的診斷深部真菌感染的臨床表現(xiàn)深部真菌感染影像學特征微生物學檢查主要包括兩方面:直接涂片鏡檢和真菌培養(yǎng).分子生物學檢測--真菌DNA的檢測真菌細胞壁組分檢測(1,3)-β-D-葡聚糖(G試驗)真菌抗原檢測半乳甘露聚糖(GM試驗)，分布于大多數(shù)曲霉屬真菌胞壁中1-3-?-D葡聚糖的檢測(G試驗)真菌在自然界中分布很廣,其細胞壁主要成分為(1-3)-?-D-Glucan(葡聚糖).當真菌進入人體血液或深部組織后，經(jīng)吞噬細胞的吞噬、消化等處理，1-3-β-D葡聚糖可從胞壁中釋放出來，從而使血液及其它體液〔如尿、腦脊液，腹水，胸水等〕中1-3--β-D葡聚糖含量增高。淺部真菌感染中，1-3--β-D葡聚糖未被釋放出來，故其在體液中的量不增高?？焖贆z測血液等體液中酵母菌、絲狀真菌等細胞壁成分，不僅檢測曲霉菌，還可以檢測念珠菌、鐮刀菌、毛孢子菌、支頂孢屬。另據(jù)文獻報道，檢測葡聚糖含量不能用于隱球菌感染的診斷，可能因為隱球菌在免疫缺陷患者體內(nèi)生長緩慢，并形成厚莢膜。有體外實驗說明，新生隱球菌產(chǎn)生的1-3--β-D葡聚糖量比念珠菌和曲霉菌少。是早期真菌感染的敏感生物標志可鑒別致病菌和定植菌1-3-?-D葡聚糖的臨床意義1-3-?-D葡聚糖〔G試驗〕-北京金山川酵母菌、絲狀真菌細胞壁成分；不僅檢測曲霉菌，還可以檢測念珠菌、鐮刀菌、毛孢子菌、支頂孢屬；不能檢測：隱球菌和接合菌；美國FDA已批準，歐洲局部國家已注冊；敏感性、特異性：90％左右半乳甘露聚糖(GM試驗)半乳甘露聚糖〔galactomannan，GM〕是曲霉菌細胞壁的組成成分，當曲霉在組織生長時可釋放進入血循環(huán)。檢測的是半乳甘露聚糖，主要適于侵襲性曲霉菌感染的早期診斷。當菌絲生長時，半乳甘露聚糖從薄弱的菌絲頂端釋放，是最早釋放的抗原。GM釋放量與菌量成正比，可以反映感染程度。連續(xù)檢測GM可作為治療療效的監(jiān)測。GM檢測的臨床意義GM檢測有助于IPA的早期診斷，而且還有助于抗曲霉治療的療效以及疾病轉(zhuǎn)歸的判斷血清中GM的量伴隨IPA的進展會增加，也會隨著藥物的有效治療而下降。如果在IPA的治療期間，其GM抗原血癥持續(xù)保持較高水平者，其預后那么較差，此時試著更改治療方案。相反，GM抗原血癥去除早且明顯者，其預后那么較理想，應正確判定病情后及時撤藥。跟蹤研究發(fā)現(xiàn)，腎功能嚴重受損也會影響GM抗原血癥的去除。半乳甘露聚糖〔GM試驗〕-美國伯樂曲霉菌細胞壁上一種多聚糖抗原可以從血清、腦脊業(yè)、胸水、BALF檢測到方法：ELISA〔BioRad〕：敏感性高1ng/mlLatexagglutination：15ng/mlG試驗與GM試驗比較G試驗在以下情況可出現(xiàn)假陽性使用纖維素膜進展血透，標本或患者暴露于紗布或其他含有葡聚糖的材料；靜脈輸注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品；使用多糖類抗癌藥物。服用多粘菌素B,厄他培能,頭孢噻肟,吡肟,優(yōu)力欣,磺胺等藥物鏈球菌血癥；操作者處理標本時存在污染、標本溶血；放化療造成的粘膜損傷導致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌經(jīng)胃腸道進入血液等

G試驗在以下情況可出現(xiàn)假陰性之前使用過抗真菌藥物、標本放置時間過長，導致分解代謝。試驗操作過程中離心時間過長。GM試驗在以下情況可出現(xiàn)假陽性飲用牛奶或高蛋白食物；血液透析；自身免疫性肝炎等；食用污染的大米等。GM試驗在以下情況可出現(xiàn)假陰性釋放入血循環(huán)中的曲霉GM〔包括甘露聚糖〕并不持續(xù)存在而是會很快去除；以前使用了抗真菌藥物；粒細胞缺乏的患者。G試驗、GM試驗結(jié)果與臨床診斷不符合時的原因分析患者是不是粒缺的狀態(tài)患者飲食或藥物的干擾操作是否標準(分析前,分析中,分析后等)試劑和儀器是否狀態(tài)良好儀器檢測原理：G試驗、內(nèi)毒素

北京金山川-MB-80檢測儀〔動態(tài)比濁法〕

動態(tài)定量檢測革蘭陰性菌可溶性抗原〔脂多糖〕，真菌可溶性抗原〔1-3〕-β-D葡聚糖，通過連續(xù)檢測濁度變化建立時間〔T〕與微生物含量〔C〕關系的標準曲線，再經(jīng)過光電轉(zhuǎn)換原理，由軟件系統(tǒng)分析得出樣品中含真菌可溶性抗原或內(nèi)毒素含量。

PCT，G試驗，GM試驗，內(nèi)毒素檢測早期診斷快速診斷指導用藥評價效果動態(tài)觀察呼吸道病毒7項檢測〔直接免疫熒光〕呼吸道病毒感染概述呼吸道病毒是指一大類能侵犯呼吸道引起呼吸道局部病變或僅以呼吸道為入侵門戶，主要引起呼吸道外組織器官病變的病毒。據(jù)統(tǒng)計，90%以上的急性上呼吸道感染由該類病毒引起。

KarinMetal.Cell.2006Feb24;124(4):823-35.呼吸道病毒感染病毒分類呼吸道病毒包括：正粘病毒科：

流感病毒副粘病毒科：

副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒其他病毒科：

腺病毒、風疹病毒、鼻病毒、冠狀病毒、呼腸病毒呼吸道病毒感染病毒分類癥狀常見相關病毒不常見相關病毒流感流感病毒副流感病毒，腺病毒假膜性喉炎副流感病毒流感病毒，RSV，腺病毒細支氣管炎呼吸道合胞病毒流感病毒，腺病毒，副流感病毒支氣管肺炎流感病毒，RSV，腺病毒副流感病毒，麻疹，CMV，VZV卡他性鼻炎鼻病毒、冠狀病毒流感，副流感，腸道和腺病毒呼吸道病毒感染流行病學流感病毒感染發(fā)生頂峰期在北半球一般是從11月到4月腺病毒出現(xiàn)在深冬到夏初RSV通常是在冬天到早春，持續(xù)5個月流行副流感病毒爆發(fā)會持續(xù)一年。呼吸道病毒檢測臨床意義Byington,C.L.,H.Castillo,etal.(2002).“Theeffectofrapidrespiratoryviraldiagnostictestingonantibioticuseinachildren’shospital.〞ArchPediatrAdolescMed156(12):1230-4.為臨床合理用藥指導依據(jù)，防止抗生素的濫用。減少耐藥菌的產(chǎn)生，節(jié)省病人開支。呼吸道病毒檢測方法別離培養(yǎng)—需要專業(yè)技能，時間長，本錢高。PCR—本錢高，實驗室條件要求高EIA—低敏感性，假陰性高，IgM&IgGIF—快速，穩(wěn)定，敏感，特異性強檢測解決方案D3UltraTM1983年成立，OhioUniversity，230名員工。年銷售額超過4億美元。呼吸疾病，皰疹&衣原體感染，甲狀腺疾病等Athens,Ohio&Cleveland,Ohio全球最大細胞株和病毒株供給商江蘇省代理：無錫賽拓基因生物科技檢測解決方案檢測原理