口蹄疫監(jiān)測診斷作業(yè)指導(dǎo)書

口蹄一疫毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測1.適用范圍用于檢測豬、牛、羊血清中的口蹄疫病毒VPI結(jié)構(gòu)蛋白抗體，與豬、牛、羊口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)診斷試劑盒合使用，可區(qū)分口蹄疫病毒感染動物及疫苗免疫動物。檢測豬血清應(yīng)用豬口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)診斷試劑盒；檢測牛、羊血清應(yīng)用牛、羊口蹄疫病毒VP1結(jié)蛋白抗體附試驗(yàn)診斷試劑2.檢測試劑口蹄疫病毒VP1抗樣品釋、酶陰VP1陽性對酶結(jié)合物稀、TMB物A、B物B液、終（I.OMHZSQ）、濃縮洗滌液、稀釋板、一次性封板膜、微孔定位簽。3.檢測步驟3.1使用前將試劑盒恢復(fù)到室溫，避免陽光直射或放置在 30C以上的環(huán)境中。3.2取出試劑盒中的樣品稀釋液。A1、B1兩孔作，CI、D1兩孔作為陽性對照孔，其余孔作檢測孔，每孔一個樣品。3.3在稀釋板的各孔中加200樣品稀釋液。在相應(yīng)各孔中分別加入10此對照血清或被檢血清樣品。用加樣器重復(fù)吹吸數(shù)次。稀釋每樣品時必須使用不同的吸頭。3.4取出抗原包被板。3.5分別從稀釋板上取稀釋后的對照血清和被檢血清各100此，加至抗原包被板的相應(yīng)孔中，加益或封膜后，置37士2C下孵育60士5分鐘。3.6洗滌工作液配制：按需要量，用去產(chǎn)離子水或雙蒸水將洗滌液作25倍3.7用洗滌工作液洗滌抗原包被板，每孔30063.8酶結(jié)合物工作液配制：用酶結(jié)合物稀釋液將酶結(jié)合物作100倍稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用。3.9每入100此酶結(jié)合物工作加蓋或封膜后，置37士2C30±2分鐘。3.10重復(fù)3.7。3.1仃MB底物工制：將TMB底物B液和TMB底物A液量。3.12每孔加入100此底物工作液置37士2C下孵育15士1分。3.13100此終止液，3.14在5分鐘在450nln波長下的OD直。結(jié)果判定4.1豬vPI結(jié)構(gòu)蛋4.1.1陰性照均D值應(yīng)續(xù)0.15，每孔0D值應(yīng)妻0.5，且簇2.。，試驗(yàn)無臨界值=0.23X陽對照孔平均OD值。4.1.2被檢樣品孔OD直＜臨界值時、判為陰性，即為抗口蹄疫病毒VPI結(jié)構(gòu)4.1.3被檢樣孔OD直＞臨界值，判為陽性。4.1.4對判定結(jié)果為陽性的樣品，應(yīng)用2個孔進(jìn)行重復(fù)檢測。復(fù)檢測后，若至少有一個孔為陽性，則判為口蹄疫病毒VPI結(jié)構(gòu)蛋白體陽性，若兩孔均為陰性，則判為口蹄疫病毒VPI結(jié)構(gòu)4.1.5當(dāng)豬口蹄疫病毒vPI結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)試劑盒與豬口蹄疫病盒聯(lián)合使用時，按下列標(biāo)}4.2牛、VPI4.2.1陰性照平均值應(yīng)W0.2，每個陽性對照孔OD應(yīng)＞0.5且W2.0。否則試驗(yàn)無。臨界值=0.23x陽性對照孔平均OD直。4.2.2被檢樣品孔OD值V臨界值時，判為陰性，即為抗口蹄疫毒VP1結(jié)4.2.3被孔OD直》臨界4.2.4對判定結(jié)果應(yīng)用2個進(jìn)行重重復(fù)檢